SC/T 7016.10-2012
基本信息
标准号： SC/T 7016.10-2012
中文名称：鱼类细胞系 第10部分狗鱼性腺细胞系(PG)
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SC/T 7016.10-2012 鱼类细胞系 第10部分狗鱼性腺细胞系(PG)
SC/T7016.10-2012
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标准内容
ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.10-2012
鱼类细胞系
第10部分：狗鱼性腺细胞系（PG）Fish cell lines-
Part 10:Pike gonad cell line(PG)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：一第1部分：胖头鳅肌肉细胞系(FFIM)；第2部分：草鱼肾细胞系(CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系（CO)；一第4部分：虹鳟性腺细胞系（RT2)；第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)；一第6部分：大鳞大麻哈鱼环胎细胞系(CHSE);-第7部分：棕蛔细胞系(BB);
第8部分：斑点义尾纳卵巢细胞系（CCO)，第 9部分;蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);一第10部分：狗鱼性腺细胞系(IG)；-第11部分：虹薄细胞系(R1)；
第12部分：鲤白血球细胞系（CLC)：本部分为SC/T7016的第10部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草，SC/T 7016. 10-2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：余国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高降英、张利峰、曹欢、钱冬、段翠兰。1范围
鱼类细胞系
第 10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)SC/T 7016.10—2012
本部分描述了狗鱼性腺细(pike gonad cell line,PG)的形态、传代培养条件、生长特性,针对部分水生动物病毒的缴感谱及传代细胞的质量控制。本部分适而丁狗鱼性腺细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本(包括所有修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
狗鱼性腺细胞pike gonad cell line, PGAhneW.1979年从狗色(Fsox:.uciur)性腺组织经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为I:皮样细胞(参见图A.1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.54μm，其中最大量细胞的峰值直径约10.60utn参见B2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁牛长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性PG对传染性胰脏坏死病毒（Infectiouspacrcaticnccrosisvirus，IPVV）敏感，接种后的（PE形态参见图 A. 2。
5主要材料与仪器设备
应符合GB/T6682中级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见C.1。
5.3细胞消化液
上要成分及其含量见C，2。
5.4血清
SC/T 7016. 10--2012
胎牛血清。
5.5仪器设备下载标准就来标准下载网
主要包括：
一生化培养箱、超净工作台、真泵和废液瓶等培养细胞所用的设备：一倒置显微镜；
一血球计数板或也了细胞计数仪：一一细胞培养瓶、移液器或吸耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞胃于生化培养箱内，在1322下培养，最适牛长温度为20℃。6.2培养液p
7. 2~-7. 6.
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净工作台内，无菌坏境下吸长满单层PG的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞
细胞消化液消化分散细胞。浩细胞培养瓶一侧人细胞消化液，-般在50 mJ.细胞培养瓶中加人5m1l.左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加入.1mL～0.2mL加人量必须完全漫没细胞层：贴壁长满的P消化时间一般为1.5min～~5min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养璇以分散细胞。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸年店，在50mI.细胞培养瓶加人10mL~～15mL细胞培举液（C.1），按每瓶5mL分成2瓶~-3瓶，使细胞脑浓度达到1×10个/mL，分瓶后在20℃培养，8h内细胞贴壁并生长：21h后能基本长满单层细胞。不同规格的细跑培养瓶，按培养面舒平方厘米加人0.1mL～0.2ml.的细胞培养液，7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层7d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7. 2. 1. 1 温度与关数
传代后的1G经20℃21h的培养后，移入生化养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以上.20℃下保存20d30。
7.2. 1. 2保藏液 pH
7.2-~7.6.
7.2.2液氮冻存
保种试可在氮中冻存。细胞炼存液中需要加人10%二甲基亚砜（TMS))作为保剂，其胎牛面清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温激人液氨中。8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
SC/T 7016.10-2012
-培养的PG,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见图A1
一-在移入生化培养箱的第-天用倒置显微镜观察细胞形态、牛长情况，并连续观察7d～10d;一-可按培养液中红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2～7.6；一一细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。SC/T 7016. 10-2012
附录A
【资料性附录】
PC及其接种IPNV后产生的CPE形态图A.1长满单层正常的P见图A.1。
图 A. 1长满单层正常的 PG
A. 2 PG 在接种 IFNV 后的 CPE 见图 A, 2。图A.2PG在接种IPNV后的CPE
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮PG特性B.1 细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 PG 特性见图Ｒ.1.
细胞径）
SC/T7016.10—2012
细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮PG特性图 B. 1
2悬浮 PG检别参数
细胞计数：11781个；
均体积：1784I.：
体蜂值：624.0n)fL；
平均直径：13.54um
直径峰值10.60μm。
SC/T 7016. 10--2012
C.T细胞培养液
附录C
【规范性附录】
试剂配制
按Mediuml99培养基（含Earle's平-衡盐溶液）说明书要求，在容器中加入适量的水并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加入199培养基（含Earles平衡盐溶液)干粉。当充分揽匀和解后，人10%经56℃30min火活的胎F血清：用粉状NaHO调节培养液的pH至7.2~7.4。尽快过滤除菌，分装后-20℃保存
细胞消化液
Na2HP.·12H20
1000 mL
在1L水中依次加入以上试剂,并加入NaHCO,0.4~-0.6g+必须调节pII至7.4-~8.0。充分搅拌至完全浴解后，过滤除菌、分装后一20℃保存。6
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T7016.10-2012
鱼类细胞系
第10部分：狗鱼性腺细胞系（PG）Fish cell lines-
Part 10:Pike gonad cell line(PG)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：一第1部分：胖头鳅肌肉细胞系(FFIM)；第2部分：草鱼肾细胞系(CIK)；第3部分：草鱼卵巢细胞系（CO)；一第4部分：虹鳟性腺细胞系（RT2)；第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)；一第6部分：大鳞大麻哈鱼环胎细胞系(CHSE);-第7部分：棕蛔细胞系(BB);
第8部分：斑点义尾纳卵巢细胞系（CCO)，第 9部分;蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);一第10部分：狗鱼性腺细胞系(IG)；-第11部分：虹薄细胞系(R1)；
第12部分：鲤白血球细胞系（CLC)：本部分为SC/T7016的第10部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草，SC/T 7016. 10-2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：余国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高降英、张利峰、曹欢、钱冬、段翠兰。1范围
鱼类细胞系
第 10部分：狗鱼性腺细胞系(PG)SC/T 7016.10—2012
本部分描述了狗鱼性腺细(pike gonad cell line,PG)的形态、传代培养条件、生长特性,针对部分水生动物病毒的缴感谱及传代细胞的质量控制。本部分适而丁狗鱼性腺细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本(包括所有修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
狗鱼性腺细胞pike gonad cell line, PGAhneW.1979年从狗色(Fsox:.uciur)性腺组织经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为I:皮样细胞(参见图A.1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.54μm，其中最大量细胞的峰值直径约10.60utn参见B2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁牛长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性PG对传染性胰脏坏死病毒（Infectiouspacrcaticnccrosisvirus，IPVV）敏感，接种后的（PE形态参见图 A. 2。
5主要材料与仪器设备
应符合GB/T6682中级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见C.1。
5.3细胞消化液
上要成分及其含量见C，2。
5.4血清
SC/T 7016. 10--2012
胎牛血清。
5.5仪器设备下载标准就来标准下载网
主要包括：
一生化培养箱、超净工作台、真泵和废液瓶等培养细胞所用的设备：一倒置显微镜；
一血球计数板或也了细胞计数仪：一一细胞培养瓶、移液器或吸耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞胃于生化培养箱内，在1322下培养，最适牛长温度为20℃。6.2培养液p
7. 2~-7. 6.
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净工作台内，无菌坏境下吸长满单层PG的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞
细胞消化液消化分散细胞。浩细胞培养瓶一侧人细胞消化液，-般在50 mJ.细胞培养瓶中加人5m1l.左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加入.1mL～0.2mL加人量必须完全漫没细胞层：贴壁长满的P消化时间一般为1.5min～~5min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养璇以分散细胞。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸年店，在50mI.细胞培养瓶加人10mL~～15mL细胞培举液（C.1），按每瓶5mL分成2瓶~-3瓶，使细胞脑浓度达到1×10个/mL，分瓶后在20℃培养，8h内细胞贴壁并生长：21h后能基本长满单层细胞。不同规格的细跑培养瓶，按培养面舒平方厘米加人0.1mL～0.2ml.的细胞培养液，7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层7d后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7. 2. 1. 1 温度与关数
传代后的1G经20℃21h的培养后，移入生化养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以上.20℃下保存20d30。
7.2. 1. 2保藏液 pH
7.2-~7.6.
7.2.2液氮冻存
保种试可在氮中冻存。细胞炼存液中需要加人10%二甲基亚砜（TMS))作为保剂，其胎牛面清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温激人液氨中。8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
SC/T 7016.10-2012
-培养的PG,依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见图A1
一-在移入生化培养箱的第-天用倒置显微镜观察细胞形态、牛长情况，并连续观察7d～10d;一-可按培养液中红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2～7.6；一一细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。SC/T 7016. 10-2012
附录A
【资料性附录】
PC及其接种IPNV后产生的CPE形态图A.1长满单层正常的P见图A.1。
图 A. 1长满单层正常的 PG
A. 2 PG 在接种 IFNV 后的 CPE 见图 A, 2。图A.2PG在接种IPNV后的CPE
附录B
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮PG特性B.1 细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 PG 特性见图Ｒ.1.
细胞径）
SC/T7016.10—2012
细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮PG特性图 B. 1
2悬浮 PG检别参数
细胞计数：11781个；
均体积：1784I.：
体蜂值：624.0n)fL；
平均直径：13.54um
直径峰值10.60μm。
SC/T 7016. 10--2012
C.T细胞培养液
附录C
【规范性附录】
试剂配制
按Mediuml99培养基（含Earle's平-衡盐溶液）说明书要求，在容器中加入适量的水并将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加入199培养基（含Earles平衡盐溶液)干粉。当充分揽匀和解后，人10%经56℃30min火活的胎F血清：用粉状NaHO调节培养液的pH至7.2~7.4。尽快过滤除菌，分装后-20℃保存
细胞消化液
Na2HP.·12H20
1000 mL
在1L水中依次加入以上试剂,并加入NaHCO,0.4~-0.6g+必须调节pII至7.4-~8.0。充分搅拌至完全浴解后，过滤除菌、分装后一20℃保存。6
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