SC/T 7016.11-2012 鱼类细胞系 第11部分虹鳟肝细胞系(R1) SC/T7016.11-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.11—2012
鱼类细胞系
第11部分：虹肝细胞系（R1）
Fish cell lines-
Part 11 : Rainbow trout liver cell line (Rl)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
S/T7016色类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHIM)：一一第2部分：草鱼肾纫胞系（CIK）：-第3部分：草鱼卵巢纽胞系（（X))：—-第4部分：虹鳟性腺细胞系（RTG-2)：一第5部分：鲤上皮瘤细胞系（FPC)；第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)：一第7部分：棕绷细胞系(BB)；
第8部分：斑点叉尾鲤卵巢细胞系（CCO)；一第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2)：一-第10部分：狗色性腺细胞系(PG)：第11部分：虹r鳟肝细胞系(R1)；第12部分：鲤白血球细胞系(CIC)；本部分为SC/T7016的第11部分
本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。SC/T7016.11—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高隆英，张利峰.王小亮、钱冬，李文旭。1范围
鱼类细胞系
第11部分：虹鳞肝细胞系(R1)
SC/T 7016. 11-2012
本部分描述了虹肝细跑系（rainbowtroutlivercelllinc,R1)的形态、传代培养条件、生长特性，针对部分水牛动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于虾鳞肝细胞的培养、应用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仪注日期的版本适于本文件。凡是不注口期的孕川文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
虹肝细胞系rainbuw truut liver cell line (简称 R1)AhneW，1985年从虹尊（(mcorhymch5miss）所组织经原代培荐、衍牛的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见图A1)。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞忌浮后的平均直径约12.52nm，其中最大量细胞的峰值直径约10. 25 μrn(参见B, 2)。
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁生长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性R】对传染性胰脏坏死病毒（Infectiouspacreaticnccrosisvirus，IPVV)敏感.接种后的CPE形态参见图 A.2、图 A.3。
5主要材料与仪器设备
应符合 CB/T G682 中 -级水的规定。5.2细胞培养液
主要成分见C.1。
5.3细胞消化液
主要战分及其含量见C2。
SC/T 7016. 11-2012
5.4血清
胎牛血清。
5.5仪器设备
毛要包括：
一生化培养箱、超净T作台、真空泵和废液瓶等暗养细胞所用的设备；一-倒置显微镜；
血球计数板或中了细胞计数仪；-细胞培养瓶、移液器或洗H球以及移液管等培养细胞所的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞置丁生化培养箱内，在15℃～22℃下培养.最适生长温度为20。6.2培养液pll
7. 2-~7. 6.
7细胞传代与保藏
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置丁超净,L作台内,无菌环境下吸弃长满单层R1的细胞培养瓶中的旧培希液。7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分散细胞。淤细胞培养瓶--侧加人细胞消化液，--般在5mL细胞培养瓶中加人5mL在右或按细胞培养瓶培养面每乎方厘米加,人(.1mL0,2mL.加人量必须完全浸没细胞层,贴壁长满的Rl消化时间一般为1.5mir~-5nii，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞，
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸奔后,在 50 ml.细胞培养瓶中,加入10 tmL～15 mL 细胞培养液(C.1),按每瓶 5 mL 分成2瓶～3瓶，使细胞浓度达到5×105个/mL，分瓶后在20℃下培养，8h内细胞贴并牛长：24h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，按培养面每平方厘米加入0.1ml,~0.2mL的细胞培养液。
7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层了d所再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的R1经20℃24h的培养后，移入生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存30d以上，20℃下可保存30d
7.2. 1. 2保藏液pH
7. 2 ~-7. 6.
7.2.2液氨冻存
保种也可在液氮中冻存。细胞冻存液中需要加人1(%二中基业(IMSO)作为保护剂.其胎牛血清浓度应为20%.保种细胞应经程序降温后放入液氮中。2
8传代细胞的质检查
传代细胞的质最检食包括：
SC/T 7016.11—2012
-一培养的R1，依4.3.2在一年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见附录A；
一在移人生化培养箱的第天用倒置显微镜观察细胞形态、生长情况，并连续观察7d～10d；--可按培养液中酚红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2~-7.6；细胞培养液混浊或山现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
A.3R1在接种IPNV24h后，用免疫荧光检测阳性见图A.3图A.3R1在接种IPNV24h后，用免疫荧光检测阳性SC/T7016.11—2012
SC/T7016.11-2012
附录A
【资料性附录】
R1及其接种IPNV后产生的CPE形态图SELGHINGRE
A.1长满单层正常的R1见图A.1
ANDARD
RCH CENTER
图A长满单层正常的RI
A.2RI被IPNV
后的空斑见图人
图A.2R1被IPNV感染后的空斑
SC/T7016.11-2012
附录豚
(资料性附录)
细胞实时分析系统测定的悬浮R1特性B.1细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮R1特性见图 B.1,
2悬浮R1检测参数
细胞计数：10909个：bZxz.net
平均体积：1373IL；
体积峰值：564.40fl；
平均点径：12.52um
直径峰值：J0.25um。
细脑直径（um）
细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 R1 特性45
C.1细胞培养液
附录C
【规范性附录】
试剂配制
SC/T 7016. 11--2012
按Medium199培养基（含Earle's平衡盐溶液）说明书要求，在容器中加人适景的水，并将容器放到磁力搅拌器上，过搅拌边垢人199培养基（含Earlc’s平衡盐溶液）干粉。当充分搅匀和溶解后，加人10%经5℃30min灭活的胎牛血清：用粉状NaHCO.调节培养液的pH至7.2-~7.4。尽快过滤除菌，分装后一20℃保存。
C.2细胞消化液
NazHPO, -12H2O
1 000 rnL
在1L水中依次加入以L试剂,并加入NaHC(0.4宫-~0.6g必须调节pII至7.4~-8.0。充分搅拌至完全溶解后，过滤除菌、分装后一20℃保存。7
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。