SC/T 7016.12-2012 鱼类细胞系 第12部分鲤白血球细胞系(CLC) SC/T7016.12-2012 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7016.12—2012
鱼类细胞系
第12部分：鲤白血球细胞系（CLC）Fish cell lines--
Part 12: Carp leucocytes cell line (CLC)2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7016《鱼类胞系》分为下列部分：一第1部分：胖头够肌肉细胞系（FHM)；一第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；一一第3部分：草鱼卵巢细胞系（CO）；—-第4部分：虹鳟性腺细胞系（RTG-2)，一第5部分:鲤上皮瘤细胞系(FPC)；一一第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)：-—-第7部分：棕鲤细胞系(BB)
一第8部分：斑点尾鲍卵巢细胞系(CCO)；一第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF：2);第10部分：狗鱼性腺细胞系（1G)：：一第11部分：虹鳞肝细胞系（R1)；第12部分：鲤白血球细胞系（CI)+-+
本部分为SC/T7016的第12部分。本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。SC/T 7016.12—2012
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任：本部分中农业部池业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推」总站、深圳山人境检验检疫局。本部分主要起草人，陈爱平、高隆英、张利峰、王妹、钱冬、陈艳。I
1范围
鱼类细胞系
第12部分：鲤自血球细胞系（CLCSC/T 7016. 12—20 12
本部分描述了靓白而球细胞系(carpleucocytescellline，CIC)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于鲤自啦球细跑系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适于本文件。凡是不注月期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验空用水规格和试验方法3术语和定义
鲤白血球细胞carp leucocyles cell line,CLCFaisal和Ahnc1990年将鯉(Cyprinuscarpio)的H血球细胞经培养、衔生的连续细跑系，4细胞的形态,大小与特性
4.1形态
为上皮样细胞（参见附录A）。
4.2大小
经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.32um，其中最大量细胞的峰值直径约10. 58 μm(参见 B.2),
4.3特性
4.3.1生长特性
贴壁尘长。
4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CLC对从患病大鱿中分离到的虹彩病毒一火鲩虹彩病毒（Andrinsdavidianusiridovirus，ADIV）、从德国养殖草鱼中分离到的-种杆形RNA病毒一33/86鼓感，并能导致细胞出现合胞体。接种后的CPF或合胞体形态参见附录A。
CLC在接种了鲤春病毒血症病毒（Springviraemiaofcarpvirus，SVCV)、草鱼出血病病毒（Grasscarprcovirus，GRV）病毒性出血性败症病毒（Viralhaenorrhagicscpticacmiavirus，VHSV），传染性胰脏坏死病毒（Infcctiouspacreaticnecrosisviruls、IPVV)等病毒后，可以山现（rE，但滴度不高。5主要材料与仪器设备
应符合GB/T 6682中一级水的规定。5.2、细胞培养液
SC/T 7Q16.12-2012
主要成分见.1.
5.3细胞消化液
主要成分及其含量见α2，
5.4血清
胎牛而清。
5.5仪器设备
主要包括：
一-牛化培养箱、超净工作台、真空象和废液瓶等培养细胞所用的设备：一一例置显微镜;
一血球计数板或电子细胞计数仪；一一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移溉管等培养细胞所川的耗材。6细胞培养条件
6.1培养温度
细胞置于生化培养箱内，在15℃~28℃下培养，其最适生长温度为25℃。6.2培养液pH
7. 2~7. 6.
7细胞传代与保璇
7.1传代程序
7.1.1吸弃旧培养液
置于超净1作台内，无南环境下吸弃长满单层C1L的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞
用细胞消化液消化分救细胞。沿细胞培养瓶-侧加人细胞消化液，-般在50mI.细胞培养瓶中加入5ml.左有或按细胞培养瓶培养面每平方厚米加入0.1ml.~~0.2mL，加入的消化液必须完全浸没细胞层。贴壁长满的CLC消化时间-般为2min～3.5min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。
7.1.3更换细胞培养液与分瓶
将消化液吸弃后，在50ml.细胞培养瓶中，加入10nL~-15ml.细胞培养液（C.1），按每瓶5ml.分成2瓶～3瓶，使细胞浓度达到1×10个/mL。分瓶后在25℃培养，8h内细胞贴壁并4长；18h后能垫本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶，按培养尚每平方厘米加人0.1mL~0.2mL的细胞培养液7.1.4细胞的传代周期
细胞长满单层5后再次传代较好。7.2细胞的保藏
7.2.1保藏条件
7.2.1.1温度与天数
传代后的CLC经25℃24h的培养后，移入生化培养箱15℃或20℃保藏，在15℃下可保存45l以1，20℃下可保存30d45d。
7.2.1.2保藏液pH
7. 2~7. 6,
7.2.2液氮冻存
SC/T7016.12—2012
保种也可在液氯中冻存。细胞冻存液中需要加人10为-：小基亚砜(IMS())做为保护剂，其胎牛血清浓度应为20%，保种细胞应经程序降温后放人液氮中。8传代细胞的质量检查
传代细胞的质量检查包括：
一一-培养的CLC，依4.3.2在一-年内至少要进行一次病毒敏感谱的检测，其接种后的CPE形态参见附录A
一一在移人生化培养箱的第二天用倒暨显微镜观察细胞形态、生长情况，并持续观察7d~-10d；：-可按培养液中酚红的颜色判定培养液的pH是否保持在7.2～7.6；一一细胞培养液混浊或出现丝状物时，视为细菌或真菌污染。3
A3CLC被33/86(一种杆形RNA病毒）感染后的CPE见图A.3SC/T7016.12—2012
图A3CLC被33/86（一种杆形RNA病毒）感染后的CPEA.4CLC被33/86感染后形成的合胞体见图A.4。图A.4CLC被33/86感染后形成的合胞体SC/T7016.12—2012
附录AWww.bzxZ.net
【资料性附录】
CLC及其接种病毒产生的CPE形态图A.1长满单层正常的CLC见图A.1
STANDARD
长满单层正常的CLC
完虹彩
A.2CLC被大鲜
图A.2CLC被大蜕虹彩病毒感染后的CPESC/T7016.12—2012
附录B
【资料性附录】
细胞实时分析系统测定的悬浮CLC特性B. 1细胞实时分析系统(CASY TT)测定的悬浮 CIC特性见图B.1.
细跑径（m）
图B.1细胞实时分析系统(CASYTT)测定的悬浮CLC:特性B.2
2悬浮CLC检测参数
细胞计数:9 293 个1
平均体积：1562 fL
体积峰值：619.90IL；
平均直径：13.32μm
直径峰值：10.58m。
验图岗
C.细胞培养液
附录C
【规范性附录】
试剂配制
SC/T 7016.12—2012
按Mediurnl99培养基（含Earle平衡盐溶液）说明书要求，在容器中加入适量的水，并将容器放到磁力揽拌器上，边搅拌边加入199培养基（含Earles平衡盐溶液）干粉。当充分搅勾和游解后，加人10%经56℃30min灭活的胎牛血消：用粉状NalICX)调节培养液的pH至7.2～7.4。尽快过滤除菌，分装后一20℃保存，
C.2细胞消化液
NaHPO, 12H,O
1000ml
在1L水中依次加人以上试剂,并加入NaIIX),0.4~0.6g,必须调节H至7.4-~8.0。充分搅拌至完全溶解后，过滤除菌、分装后一20℃保存。7
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