GB 22255-2014
基本信息
标准号： GB 22255-2014
中文名称：食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定
GB22255-2014
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB22255—2014
食品安全国家标准
食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定2015-01-28发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2015-07-28实施
本标准代替GB/T22255—2008《食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》。本标准与GB/T22255—2008相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定”；增加了示差检测器的应用；
增加固相萃取柱净化、分离的试样制备步骤；增加发酵酒、配制酒、不含蛋白的饮料的试样制备步骤。GB22255—2014
1范围
食品安全国家标准
食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定本标准规定了食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定方法本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定2原理
GB22255—2014
试样中三氯蔗糖用甲醇水溶液提取，除蛋白、脂肪，经固相萃取柱净化、富集后用高效液相色谱仪反相Cis色谱柱分离，蒸发光散射检测器或示差检测器检测，根据保留时间定性，以峰面积定量。3试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1甲醇(CH:OH)。
3.1.2乙腈（CH,CN)：色谱纯。
3.1.3正已烷（CH）。
乙酸锌[Zn(CHCOO)，·2H,O]。
亚铁氰化钾[K,Fe(CN)。·3H,O]。3.1.6
中性氧化铝（100目～200目）。3.2
试剂的配制
乙酸锌溶液（219g/L）：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100mL。亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。甲醇水溶液（75+25）：量取75mL甲醇，加25mL水，混匀。乙睛水溶液（11+89）：量取11mL乙睛，加89mL水，混匀。3.3标准品
三氯蔗糖标准品（Cl.H1CO.）：CAS编号56038-13-2，纯度≥99%3.4标准溶液的制备
3.4.1三氯蔗糖标准贮备溶液（10.0mg/mL）：称取三氯煎糖标准品0.25g（精确至0.0001g）于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，其中三氯蔗糖浓度为10.0mg/mL。贮备液置于4℃冰箱中保存，保存期为6个月。
3.4.2三氯蔗糖标准中间液（1.00mg/mL）：吸取5.00mL三氯蔗糖标准贮备溶液于50mL容量瓶中，1
GB22255—2014
用水定容至刻度，混匀，其中三氯蔗糖浓度为1.00mg/mL。置于4℃冰箱中保存，保存期为3个月。3.4.3三氯蔗糖标准工作液：分别吸取0.200mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL三氯蔗糖中间液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。其中三氯蔗糖工作液浓度分别为0.0200mg/mL、0.0500mg/ml.0.100mg/mL.0.200mg/mL.0.400mg/mL。3.5材料
固相萃取柱（200mg，类型为N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型填料）使用前依次用4mL甲醇、4mL水活化
4仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差检测器或蒸发光散射检测器。4.2
天平：感量为0.1mg和1mg
涡旋混合器。
离心机：转速≥3000r/min。
离心机：转速≥10000r/min。
超声波清洗仪：工作频率35kHz。4.7
水浴锅。
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1含蛋白脂肪试样
5.1.1.1称取粉碎均后固体试样1g～2g（精确到0.001g），混匀后液体试样1g～5g（精确到0.001g）置于50mL离心管中.加人5mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇，继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min，将上清液移人50mL离心管中。沉淀物加人5.0mL甲醇水溶液（75十25），玻棒搅拌均匀后，涡旋混合器上振荡30s，以3000r/min离心10min，重复提取2次，将上清液合并于150mL分液漏斗中5.1.1.2在150mL分液漏斗内，加人30mL正已烷，振摇2min，静置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发Ⅲ。蒸发Ⅲ于沸水浴上蒸发，当蒸发Ⅲ中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，以3000r/min离心10min。5.1.1.3取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后·用3mL甲醇洗脱.收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11+89）溶解（如溶液有浑浊现象可将其移入离心管，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。
注：果冻类样品经提取后的上清液需50C水浴加热后趁热过柱，否则易堵塞萃取柱，5.1.2酱及酱制品、醋、酱油
称取混匀后试样2g（精确到0.001g），置于50mL离心管中，加人1.0g中性氧化铝，加人3mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇，以下步骤自5.1.1.1继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min\开始，到5.1.1.3“滤液为制备的试样溶液，备用。”为止依次处理，2
5.1.3含酒精的试样（发酵酒、配制酒GB22255—2014bzxZ.net
称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于50mL蒸发皿中，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙睛水溶液（11+89)溶解，溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。5.1.4饮料
称取混勾后试样5g（精确到0.001g），置于15mL离心管中，加人5mL水，涡旋混合器上振荡30s。以3000r/min离心10min。以下步骤按5.1.1.3处理。5.1.5风味发酵乳、奶茶
称取混勺后试样1g5g（精确到0.001g）置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液，以下步骤自5.1.1.1继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min”开始，到5.1.1.3滤液为制备的试样溶液，备用。”为止依次处理。
不同试样的前处理需要同时做试样空白试验5.2
仪器参考条件
5.2.1色谱柱：Cls柱（4.6mm×150mm，5μm）或性能相当者。5.2.2流动相：水+乙睛=89+11。注：当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序（蒸发光散射检测器适用），参见附录A。5.2.3流速：1.0mL/min。
5.2.4柱温：35℃。
5.2.5示差检测器条件：
检测池温度：35℃；
一灵敏度：16
5.2.6蒸发光散射检测器条件：按不同品牌蒸发光散射检测器在高水相流动相条件下的要求设置。如SEDEX75：
雾化压力：3.5Bar；增益：8；蒸发温度：40℃。或性能相当者。5.2.7进样量：20.0L
5.3标准曲线的制作
5.3.1示差检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0μL.在上述色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积-三氯蔗糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依示差检测原理，见式（1）：y=ar+b
式中：
—峰面积；
α、b——与检测池温度、流动相性质等实验条件有关的常数；一一三氯糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）5.3.2蒸发光散射检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0L，在给定的色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积-三氯蔗3
糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依蒸发光散射检测原理，见式（2）：y=br
式中：
a、b-
峰面积；
与蒸发室温度、流动相性质等实验条件有关的常数；三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。按仪器数据处理软件的处理方式不同，也可作对数方程，即lgy=b十algr。5.4试样溶液的测定
GB22255—2014
取制备的试样溶液和空白试样溶液各20.0L进样，进行高效液相色谱分析。以保留时间定性，以峰面积外标法定量，见附录B。
分析结果的表述
试样中三氯蔗糖含量按式（3)计算：X
式中：
(c-ca)×V×1000
mX1000
试样中三氯蔗糖的含量，单位为克每千克（g/kg)；.....3)
由标准曲线查得试样进样液中三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；由标准曲线查得空白试样进样液中三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）；
换算系数。
结果保留三位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%8其他
当取样量2.00g，定容至1.00mL时，检出限均为0.0025g/kg.定量限均为0.0075g/kg，4
GB22255—2014
附录A
复杂情况下的液相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适用）当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序，见表A.1液相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适用）表A.1
乙腊（体积分数）
超纯水（体积分数）
附录B
三氯蔗糖（蔗糖素）高效液相色谱图GB22255—2014
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图（蒸发光散射检测器）见图B.1。mAL.-
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液的液相色谱图（蒸发光散射检测器）三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图（示差检测器）见图B.2。mat.
“滋碗
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液的液相色谱图（示差检测器）imir
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食品安全国家标准
食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定2015-01-28发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2015-07-28实施
本标准代替GB/T22255—2008《食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》。本标准与GB/T22255—2008相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定”；增加了示差检测器的应用；
增加固相萃取柱净化、分离的试样制备步骤；增加发酵酒、配制酒、不含蛋白的饮料的试样制备步骤。GB22255—2014
1范围
食品安全国家标准
食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定本标准规定了食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定方法本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定2原理
GB22255—2014
试样中三氯蔗糖用甲醇水溶液提取，除蛋白、脂肪，经固相萃取柱净化、富集后用高效液相色谱仪反相Cis色谱柱分离，蒸发光散射检测器或示差检测器检测，根据保留时间定性，以峰面积定量。3试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1甲醇(CH:OH)。
3.1.2乙腈（CH,CN)：色谱纯。
3.1.3正已烷（CH）。
乙酸锌[Zn(CHCOO)，·2H,O]。
亚铁氰化钾[K,Fe(CN)。·3H,O]。3.1.6
中性氧化铝（100目～200目）。3.2
试剂的配制
乙酸锌溶液（219g/L）：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100mL。亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。甲醇水溶液（75+25）：量取75mL甲醇，加25mL水，混匀。乙睛水溶液（11+89）：量取11mL乙睛，加89mL水，混匀。3.3标准品
三氯蔗糖标准品（Cl.H1CO.）：CAS编号56038-13-2，纯度≥99%3.4标准溶液的制备
3.4.1三氯蔗糖标准贮备溶液（10.0mg/mL）：称取三氯煎糖标准品0.25g（精确至0.0001g）于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，其中三氯蔗糖浓度为10.0mg/mL。贮备液置于4℃冰箱中保存，保存期为6个月。
3.4.2三氯蔗糖标准中间液（1.00mg/mL）：吸取5.00mL三氯蔗糖标准贮备溶液于50mL容量瓶中，1
GB22255—2014
用水定容至刻度，混匀，其中三氯蔗糖浓度为1.00mg/mL。置于4℃冰箱中保存，保存期为3个月。3.4.3三氯蔗糖标准工作液：分别吸取0.200mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL三氯蔗糖中间液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。其中三氯蔗糖工作液浓度分别为0.0200mg/mL、0.0500mg/ml.0.100mg/mL.0.200mg/mL.0.400mg/mL。3.5材料
固相萃取柱（200mg，类型为N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型填料）使用前依次用4mL甲醇、4mL水活化
4仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差检测器或蒸发光散射检测器。4.2
天平：感量为0.1mg和1mg
涡旋混合器。
离心机：转速≥3000r/min。
离心机：转速≥10000r/min。
超声波清洗仪：工作频率35kHz。4.7
水浴锅。
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1含蛋白脂肪试样
5.1.1.1称取粉碎均后固体试样1g～2g（精确到0.001g），混匀后液体试样1g～5g（精确到0.001g）置于50mL离心管中.加人5mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇，继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min，将上清液移人50mL离心管中。沉淀物加人5.0mL甲醇水溶液（75十25），玻棒搅拌均匀后，涡旋混合器上振荡30s，以3000r/min离心10min，重复提取2次，将上清液合并于150mL分液漏斗中5.1.1.2在150mL分液漏斗内，加人30mL正已烷，振摇2min，静置分层，20min后，下层水相移置于50mL蒸发Ⅲ。蒸发Ⅲ于沸水浴上蒸发，当蒸发Ⅲ中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸发皿，冲洗液合并移置于15mL离心管中，超声波处理5min，以3000r/min离心10min。5.1.1.3取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液体流速不超过每秒1滴，柱上液面为2mm左右时加入1mL水，继续保持液体流速为每秒1滴，到柱中液体完全排出后·用3mL甲醇洗脱.收集甲醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙腈水溶液（11+89）溶解（如溶液有浑浊现象可将其移入离心管，10000r/min离心5min），溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。
注：果冻类样品经提取后的上清液需50C水浴加热后趁热过柱，否则易堵塞萃取柱，5.1.2酱及酱制品、醋、酱油
称取混匀后试样2g（精确到0.001g），置于50mL离心管中，加人1.0g中性氧化铝，加人3mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇，以下步骤自5.1.1.1继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min\开始，到5.1.1.3“滤液为制备的试样溶液，备用。”为止依次处理，2
5.1.3含酒精的试样（发酵酒、配制酒GB22255—2014bzxZ.net
称取混匀后试样5g（精确到0.001g），置于50mL蒸发皿中，于沸水浴上蒸干，残渣用1.00mL乙睛水溶液（11+89)溶解，溶液过0.45μm滤膜，滤液为制备的试样溶液，备用。5.1.4饮料
称取混勾后试样5g（精确到0.001g），置于15mL离心管中，加人5mL水，涡旋混合器上振荡30s。以3000r/min离心10min。以下步骤按5.1.1.3处理。5.1.5风味发酵乳、奶茶
称取混勺后试样1g5g（精确到0.001g）置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋混合器上振荡3min后加人15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液，以下步骤自5.1.1.1继续振荡30s，超声波提取20min，以3000r/min离心10min”开始，到5.1.1.3滤液为制备的试样溶液，备用。”为止依次处理。
不同试样的前处理需要同时做试样空白试验5.2
仪器参考条件
5.2.1色谱柱：Cls柱（4.6mm×150mm，5μm）或性能相当者。5.2.2流动相：水+乙睛=89+11。注：当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序（蒸发光散射检测器适用），参见附录A。5.2.3流速：1.0mL/min。
5.2.4柱温：35℃。
5.2.5示差检测器条件：
检测池温度：35℃；
一灵敏度：16
5.2.6蒸发光散射检测器条件：按不同品牌蒸发光散射检测器在高水相流动相条件下的要求设置。如SEDEX75：
雾化压力：3.5Bar；增益：8；蒸发温度：40℃。或性能相当者。5.2.7进样量：20.0L
5.3标准曲线的制作
5.3.1示差检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0μL.在上述色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积-三氯蔗糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依示差检测原理，见式（1）：y=ar+b
式中：
—峰面积；
α、b——与检测池温度、流动相性质等实验条件有关的常数；一一三氯糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）5.3.2蒸发光散射检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0L，在给定的色谱条件下测定峰面积，然后作峰面积-三氯蔗3
糖浓度（mg/mL）标准曲线，曲线方程依蒸发光散射检测原理，见式（2）：y=br
式中：
a、b-
峰面积；
与蒸发室温度、流动相性质等实验条件有关的常数；三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。按仪器数据处理软件的处理方式不同，也可作对数方程，即lgy=b十algr。5.4试样溶液的测定
GB22255—2014
取制备的试样溶液和空白试样溶液各20.0L进样，进行高效液相色谱分析。以保留时间定性，以峰面积外标法定量，见附录B。
分析结果的表述
试样中三氯蔗糖含量按式（3)计算：X
式中：
(c-ca)×V×1000
mX1000
试样中三氯蔗糖的含量，单位为克每千克（g/kg)；.....3)
由标准曲线查得试样进样液中三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；由标准曲线查得空白试样进样液中三氯蔗糖的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）；
换算系数。
结果保留三位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%8其他
当取样量2.00g，定容至1.00mL时，检出限均为0.0025g/kg.定量限均为0.0075g/kg，4
GB22255—2014
附录A
复杂情况下的液相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适用）当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取洗脱程序，见表A.1液相色谱洗脱程序（蒸发光散射检测器适用）表A.1
乙腊（体积分数）
超纯水（体积分数）
附录B
三氯蔗糖（蔗糖素）高效液相色谱图GB22255—2014
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图（蒸发光散射检测器）见图B.1。mAL.-
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液的液相色谱图（蒸发光散射检测器）三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液（0.200mg/mL）的液相色谱图（示差检测器）见图B.2。mat.
“滋碗
三氯蔗糖（蔗糖素）标准溶液的液相色谱图（示差检测器）imir
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