GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 GB/T30955-2014 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

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中华人民共和国国家标准
GB/T30955—2014
饲料中黄曲霉毒素B1B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法Determination of aflatoxin B,, B2 ,G,,G2 content in feeds-High performance liquid chromatography with immunoaffinity column clean-up2014-07-08发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2015-01-10实施
中华人民共
国家标准
饲料中黄曲毒素B,、B2、G,、Gz的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30955—2014
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2014年11月第一版 2014年11月第一次印刷*
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本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。GB/T30955-2014
本标准起草单位：浙江大学饲料科学研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所国家饲料质量监督检验中心（北京）.北京中检维康技术有限公司。本标准主要起草人：余东游、饶正华，李卫芬、李兰、王雄、果旗、梁权1范围
饲料中黄曲霉毒素BtB2G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30955—2014
本标准规定广饲料中黄曲霉毒素B,B2G1G的免疫亲和层析净化-高效液相色谱法的测定方法。
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素Bi、B2、Gi、G的测定。本标准的检测限：黄曲霉毒素B,为0.2μg/kg，黄曲毒素B.为0.2ug/kg，黄曲霉毒素G为0.3pg/kg，黄曲霖毒素Gz为0.3μg/kg。本标准的定量限：黄曲霉毒素B,为1.0μg/kg.黄曲霉毒素Bg为1.Cμg/kg，黄曲需毒素G,为1.0μg/kg黄曲無毒素G为1.0μg/kg2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样经过甲醇-水提取后，提取液经过滤，稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化，经高效液相色谱仪分离，荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲需毒素BB32G1G的含量，
4试剂
除非另有说明，均为分析纯的试剂；实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定，标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。
4.1甲醇：色谱纯。
4.2萃色谱纯，
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲醇+水（8+2)：取80mL甲醇(4.1)加20tmL水，混合均勾。4.5甲醇+水（15+55）：取45ml甲醇(4.1)加55mL水，混合均匀。4.6苯+乙腈（98+2)：取2mL乙晴（4.3)加人98 mL苯（4.2)混价均匀。4.7黄曲霉毒素标准储备溶液：用萃十乙睛(98十2)溶液(4.6)分别配制0.100mg/ml.的黄曲霉毒素BB,、G，G2 标准储备.保存F4C备用.川使用1年。4.8黄曲霉毒素混合标准T作液：准确移取适量的黄曲毒素BI.Bz，G.G2标准储备溶液（4.7),1
GB/T 30955--2014
50下，氮气吹干仪吹干，用适量的甲醇+水（45十55）溶液（4.5）定容为混合标准工作液，黄曲霉毒素B，Bz，G，、G各分别为0ng/mL、lng/mL，5ng/mL，10ng/mL.50ng/mL。4.9PBS缓冲溶液，称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mE纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0,最后用纯水稀释至1000 mL。4.10次氯酸钠。
5仪器和设备
实验室常规仪器，设备材料皮下刻各项5.1高速均质器，18000r/mim~22000r/min，或震荡器。5.2黄曲霉毒素免疫亲和柱，柱容量≥300ng。5.3玻璃纤维滤纸，直径11ctm.孔径1.5μm.5.4玻璃定量管，10mL.
5.5氮吹仪，50℃。
5.6光化学衍生系统。
5.7高效液相色谱仪，带荧光检测器。6试样采集与制备
按GB/T14699.1采样：按CB/T20195用四分法缩减至500g，粉碎后过1mm孔径的分析筛，混匀后装人密闭容器，冷藏保存。7分析步骤
7.1提取
称取试样（粒度小于1mm)50.0g于250mL具塞锥形瓶中，加人5.0g氯化钠及准确加人100.0mL(V)甲醇十水(8+2)溶液(4.4),以均质器高速搅拌提取 2min,或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤，准确移取10.0mL(V.)滤液并加人40.0 mL(V,)PBS缓冲溶液(4.9)稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1~2次，至滤液澄清，备用。
7.2净化
将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃定量管下。准确移取10.0mL(V)样品提取液注人玻璃定量管中，将空气压力录与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/rmin流速缓慢通过免疫亲和柱，得溶液全部流出后，以10.0mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加人1.0mL(V)甲醇（4.1)洗脱，流速不超过1mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加纯水定容为2.0 mL,供色谱检测用。7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱：Ci柱，长150mm内径4.6mm，填料直径5μm，或相当者。流动相：甲醇+水（45+55)溶液（4.5）。流速:0.8 mL/min
检测波长：发波长360nm；发射波长440nm。2
光化学衍生系统。
柱温：30℃。
进样量：20L-。
7.3.2色谱测定
GB/T 30955—2014
分别取相同体积样液和标工作溶液注人高效相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与黄曲霉毒素BBG、G，标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B,、B,GrG的浓度c(μg/L）。标准品色谱图参见附录A。警告一一黄曲霉毒素是高致癌性物质，应十分小心处理，使用过的玻璃容器及黄曲需毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。8结果计算与表述
8.1结果计算
试样中黄曲霉毒素B1，B、G，G含量以质量分数X：计，单位为微克每干克（ug/kg），按式（1）计算：
式中：
X,=P.xvxexv.
试样溶液中黄曲霉毒素BBG.G.各组分的峰面积值；样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）：黄曲霉毒素B、B,,G，、G各标准溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);G
标准溶液的进样体积（μL）；
黄曲霉毒素Bl.Bz.GLGz各标准溶液峰面积平均值：试样质量，单位为克（g）。
8.2结果表示
测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后位。9重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。-(12
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黄曲霉毒素标准溶液色谱图见图A.1。mv
附录A
（资料性附录）
标准品色谱图
图A.1黄曲霉毒素标准溶液（B,10μg/L、B210μg/L,G,10μg/L.G210μg/L）色谱图版权专有侵权必究
书号：155066：1-50141
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