SC/T 7217-2014
基本信息
标准号： SC/T 7217-2014
中文名称：刺激隐核虫病诊断规程
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
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标准简介
SC/T 7217-2014 刺激隐核虫病诊断规程
SC/T7217-2014
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标准内容
ICS65.150
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7217—2014
刺激隐核虫病诊断规程
Protocol of diagnosis for cryptocarvoniasis2014-03-24发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB3/11.1、2099给出的规则起节SC/T7217—2014
请注慈本文件的某些内容川能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的亮在。本标雄巾农业部渔业属提出
本标准由全国水产标准化技术委员会(5AC/TC156)归口。本标准起草单位：中山大学，中华人民北和广州出人境检验检疫局。本标滩主安起草人，李安兴、柏建山、李六伟。1范围
刺激隐核虫病诊断规程
SC/T 7217—2014
本标准规定了刺激隐核虫病临床症状检查、刺激隐核虫（Crucrniriias)形态学鉴定和聚合酶链式反应（PCR)检测的方法
本标准适而丁刺激隐核虫病的流行病学调查、诊断,检疫和监测2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仪注日期的版延用」本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件，G3/T6682分析实验室用水舰格和试验方法SC/T7?103水生动物产地检疫采样技术规范3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
cryptocaryoniasis
刺激隐孩虫病
由刺激隐核虫感染海水硬骨鱼类沐表和鳃·并引起鱼类发病戎死亡的一种妝病4试剂和材料
4.1水：衍合GB/T6682中一级水的规格。4.2蛋白酶K(20mg/mL）
4.3引物浓度为l0umol/L、
引物1:5'-GTICCCCTIGAACGAGGAATTC-3引物 2 5'-TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT- 3与I物 3:5'-TGAGAGAATTAAFCATAATTTATA-34.4 DNA marker(DL200o nrker)。4.5PCR试剂：TayDNA聚合酮、loXPCRbulfer、MgCl2、tNIPs、灭菌双蒸水，4.6微量样品基因DA轴提试剂盒（可使用其他同等效果的试剂盒）。4.7PCR产物回收试剂盒，
4.8琼脂糖（分析纯）
4.9TE缓冲液，见附录A
4. 10※T1F烂存波，见附录A。
4.11EB溶液，见附录A，
4.1210×加样缓冲液
4.13其他化学试剂(HC1,H.O等）：分析纯级产品。5仪器设备
5.1解剖盘、剪儿、镊子。
SC/T 7217—2014
5.2普通光学显微镜
5.3盖玻片、载玻片、培养Ⅱ。
5.4研磨粹与1.5 trLEP管配套）。5.5台式离心机
5.6水浴锅。
5.7背通冰箱。
5.8微移液器！
5.9PCR扩增仪。
5.10水平地泳系统。
5.11凝胶成像仪或紫外险测仪。6刺激隐核虫病简介
参见附录B,
7采样
接SC/T7103的规定执行
8诊断方法
8.1临床症状检查
8.1.1外观检查
的体表（参见图7）和鳃（参见图C2）工望现许多小白点（俗称“口点病\）.鳃丝在片，黏液增多,体表出血、溃疡利糜烂。
8.1.2行为观察
病角摄食量减少.身体消瘦，游动缓慢，垦分散状态，离群漫游，时常翻转牙体，呼吸频率加快，严重时导致死广
8.2显微镜检查
月载玻片将鱼体表的液轻轻刮下正片，显微镜下可见黏液中有黑色圆形或椭阅形业体（参见图C.3),大小为c.2mm~0.5mm。取鳃丝压片显微镜下也可见鳃丝上皮浅层中具有黑色圆形或椭因形出体（参见图（.1），也体周身被纤毛，活体川持续旋转运动。8.3PCR检测
8.3.1虫体DVA的提取
取1个或儿个虫体，置丁1净平班巾，用灭菌水反复洗淤3次，再转移到洁净的离心管中，用祈磨棒奔碎，使其充分破裂：然后、加人蛋白酶K(终浓度为200/rn1.)消化.按微最样品基因纠「)NA拥提试剂盒说明书的方法提取IDNA：将提取的DNA用TE溶液或双蒸水稀释至总体积10μL1C保存待用，
8.3.2PCK扩增
8.3.2.1PCR扩增对照样品
PCR持增反应中设立性对照样品、阴性对照样品和空H对照样品，以虫体I)VA作为而I性对熙样品，取健康鱼肌肉组织抽提NA作为阴性对照样品，取等体积的水代模板作为白对照样品8.3.2.2第—轮PCK扩增
采用5OL反应体系，向0.2nLPCR管中依次加人I0×PCRbuffer.MgCldNTPs，物1和SC/T 7217—2014
物2、模板DNA、IαyDNA聚合酶，最后加水补足0L.混匀后瞬时离心.PCR扩增仪中扩增，PCR折增反成体系见表，PR扩增条件为：94℃变性min91℃30s,55℃30s.72℃1min.35个循坏72延伸10mina
表1PCR扩增反应体系
Ix PC'R huffertMg'+Ere
Mg(Cl.(25 nz-ol/ 1)
-NTPet2. : mnuol/ L)
物 1 10 ;rmol/ 1.)
引物2(10 pt0l/ [.)
模板12NA
T NA聚酶( /u)
8.3.2.3第二轮PCR扩增
库积，l
至总体积为5！
如果第-轮PCR扩增后的产物电泳时看不到INA条带，取第一轮PCR产物4μI.作为模板：如果能看到TDNA条带,则将第一轮 PCR 物稀释 100 倍后，瑕 4μI.作为模板。然后，加人10》PCRmffrr、Mgl：、dNTPs、引物1和引物3、TaqDNA聚合酶，最后加水补足50μL(参照第-轮ICR抑增体系),混勾后瞬时离心,PCR扩增仪中扩增。PCR扩增条件为:94%变性5min;92℃ 30555\：305.72℃40s，35个循环，72℃延仲10min。8.3.3琼脂糖电泳
取适量5X×T3E缓冲液稀释10倍(T作浓度为0.5×TBF缓冲液)，配制1.5%的琼脂糖凝咬-川人化乙链至终浓度为0.5ug/ml。电泳时取3μl~5ul.PCR产物与0.5u1(10X）加样缓冲液混合均勾，小心加到加样孔巾,以DNAMarkcr作为核酸分了量标准套照物。5V/cm电泳约0.5h.当溴酚益到达底部时停止。取凝胶于凝胶成像仪中观察，第一轮PCR扩增条带约为750bp，也可能没有条带即性刘照和空白对照没有扩增条常，第二轮PCR产牛一条540 bhp的扩增条带者判定为附性反应（参见附录
8.3.4PCK扩增产物的回收与纯化按PCR产物回收试剂盒说明进行扩增产物的回收与纯化，将纯化的PCR产物转移到离心管中，一29℃保存，
8.3.5CR扩增产物的序列测定和比对将PCR纯化产物送测序公司进行序列测定，测序结果与刺激隐核虫ITSrDNA序列（参见附录E）逆行比对，序列树似性在95%以上者,判断待测样品为刺激隐核虫，9结果综合判定
9.1如果在体表或鳃上肉眼观察到小白点或在显微镜下观察到疑似虫体，则判断为可疑9.2如果在显微镜下观察划疑似出体，并用PCR力汰扩增出540bP的H标片段，经测序鉴定和刺激隐核虫的参考序列相似性达到95%以上，贿而确诊为刺激隐核出。病鱼同时符个8.1中的症状，则确诊为刺激隐核虫病。
SC/T7217—2014
A.11mol/I.Tris-HCpH8.0)
去离了水
附录A
【规范性附录】
试剂及其配制
充分溶解后,用盐酸调 pH至8. ,定容至1 I.sA.2TE缓冲液(plI8.0)
1 mal/I Tris-HCl(pH 8. o)
C. 5 mol/L EDIA(pH 8. 0)
加去离子水定容至100mL，混勾.4℃保存。A.35×TBE贮存液
EDTA(0. 5 ino/I.-pH 8. 0)
称量后放入烧杯向烧杯中加入800m1.去离子水，充分溶解后，定容至1,空温保存A.4EB(EthidiumBromide,核酸染色剂）用水配制成1Ciu/ml的浓缩液。用时每10m.琼脂糖溶液中加1s附录B
【资料性附录】
刺激隐核虫病简介bzxz.net
SC/T 7217—2014
刺激题核电病的病原为刺激隐核虫，t活史分为1个阶段，即滋准体（trophont）、胞变前休（rrloron)、胞囊（tomont)和幼虫（theront>阶段。寄生在鱼体上的价段称为慈养体，早圆形或架形.能布「皮浅表层内做旋转运动，以信土的体液、组织细胞为食，成熟后脱离宿主进人水体.即成为白出活动的胞粪前体，此期虫体可布水体中自由游动（约为21--8h），然后附着在固着物「，形成胞囊，胞囊在适合的环境条件下，其内部的原生质组经历·系列不均等分裂形成幼体。幼体成熟后逸出胞囊逃人水中，即为兵有感染能力的幼虫
刺滋隐核出病可以危害绝大多数海水硬骨鱼类：WilkieandGordin（1969)曾报：刺激隐核业感染06种水族馆养殖的游水鱼类。Digglcs（1956）剂查了澳大利亚的14种野牛海水鱼，在13种角体工发现了刺激隐核虫。罗晓春等（2008)对中国华南地区海水养殖鱼类的调食发现：6个科的1种游水养殖色类都可被刺激隐核虫感染：迄今为比报道刺激隐核虫病的地区包括印度洋地区、太平洋地区、波斯湾、以色列的红海、大西洋和加勒比海地这等热带亚热带海区。在东南亚海区，刺激隐核业病发病严壹的鱼奖主要为网箱养殖的卵形、人黄鱼、石斑色、鲈、鲷科鱼类和比鱼类等，一般认为发病与放养密度过大密切相美
刺激隐核虫病主要发病季节为5月下句至？月中何和9月中旬至11月下句.水温22%~30%的季节，该病流行高峰的水温是℃~-℃，病鱼摄食量减少，身体消瘦，游动缓慢，分散状态，离群漫游，常翻转身体，呼吸灏率加快，严垂时导致死亡。SC/T7217—2014
附录C
（资料性附录
刺激隐核虫病临床症状及刺激隐核虫形态观察C.1卵形(Trachinotusovatus）体表感染刺激隐核虫形成的小白点见图1
图C.1卵形鲳体表感染刺激隐核虫形成的小白点C.2卵形鳃上寄生的刺激隐核虫
见图C.2
图C.2卵形鲳鳃上寄生的刺激隐核虫C.3黏液中的刺激隐核虫（200×）见图c3。
黏液中的刺激隐核虫（200×）
C.4卵形鲳鳃丝上寄生的刺激隐核虫（40×）见图c.4。
卵形鳃丝上寄生的刺激隐核虫（40×）图C.4
SC/T7217—2014
SC/T7217—2014
附录D
（资料性附录）
刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图见图D.1。2.000-
说明：
2000marker;
阳性对照：
阴性对照：
空白对照；
刺激隐核虫检测样品第一轮PCR产物刺激隐核虫检测样品第二轮PCR产物。5
刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图附录
【资料性附录】
刺激隐核虫ITSrINA序列
SC/T 7217—2014
CTAGTAAGIGCAAGTCAICAGCTTGTAETGAITAEGTTCCTGCCCTTTGIACACACCGCCLGTCGCTCCTACCGATTTCGAGTGATCCGKTGAACCTI'TGGACTGCGCTAACACTAGTTAGTGCGGGAAGTTAAGTAAAC'CACTTCACTTAGAGGAAGGAGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAAC'CTGCGGAAGGATCAITAACACAATTAAGATCAAACCTAAAAATTTAITTIGATGTATTGAGATCTGATAATTTTTAATTAICAATCTCAAATTTTIACAAATTTATTIIAAIAATAAAFATCATIAAGTTAATIAAAITAACTAAAGAAAAITIICAACGGTGGATATCTTGGCTCCCATAACGATGAAGAACGCAGCGAAAIGCGATACGGAATGCGAATTGCAGAATTCCGCGAGTCATCAGAICTTTGAACCAAAITGCGCCGAGGGGAIAICCCAACGGCATGTTTTTTTCAGTGTOTTTATTGAAATCATAAAACTAAATGTGATTGAAIGCATAATTTATAI
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7217—2014
刺激隐核虫病诊断规程
Protocol of diagnosis for cryptocarvoniasis2014-03-24发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB3/11.1、2099给出的规则起节SC/T7217—2014
请注慈本文件的某些内容川能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的亮在。本标雄巾农业部渔业属提出
本标准由全国水产标准化技术委员会(5AC/TC156)归口。本标准起草单位：中山大学，中华人民北和广州出人境检验检疫局。本标滩主安起草人，李安兴、柏建山、李六伟。1范围
刺激隐核虫病诊断规程
SC/T 7217—2014
本标准规定了刺激隐核虫病临床症状检查、刺激隐核虫（Crucrniriias)形态学鉴定和聚合酶链式反应（PCR)检测的方法
本标准适而丁刺激隐核虫病的流行病学调查、诊断,检疫和监测2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仪注日期的版延用」本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件，G3/T6682分析实验室用水舰格和试验方法SC/T7?103水生动物产地检疫采样技术规范3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
cryptocaryoniasis
刺激隐孩虫病
由刺激隐核虫感染海水硬骨鱼类沐表和鳃·并引起鱼类发病戎死亡的一种妝病4试剂和材料
4.1水：衍合GB/T6682中一级水的规格。4.2蛋白酶K(20mg/mL）
4.3引物浓度为l0umol/L、
引物1:5'-GTICCCCTIGAACGAGGAATTC-3引物 2 5'-TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT- 3与I物 3:5'-TGAGAGAATTAAFCATAATTTATA-34.4 DNA marker(DL200o nrker)。4.5PCR试剂：TayDNA聚合酮、loXPCRbulfer、MgCl2、tNIPs、灭菌双蒸水，4.6微量样品基因DA轴提试剂盒（可使用其他同等效果的试剂盒）。4.7PCR产物回收试剂盒，
4.8琼脂糖（分析纯）
4.9TE缓冲液，见附录A
4. 10※T1F烂存波，见附录A。
4.11EB溶液，见附录A，
4.1210×加样缓冲液
4.13其他化学试剂(HC1,H.O等）：分析纯级产品。5仪器设备
5.1解剖盘、剪儿、镊子。
SC/T 7217—2014
5.2普通光学显微镜
5.3盖玻片、载玻片、培养Ⅱ。
5.4研磨粹与1.5 trLEP管配套）。5.5台式离心机
5.6水浴锅。
5.7背通冰箱。
5.8微移液器！
5.9PCR扩增仪。
5.10水平地泳系统。
5.11凝胶成像仪或紫外险测仪。6刺激隐核虫病简介
参见附录B,
7采样
接SC/T7103的规定执行
8诊断方法
8.1临床症状检查
8.1.1外观检查
的体表（参见图7）和鳃（参见图C2）工望现许多小白点（俗称“口点病\）.鳃丝在片，黏液增多,体表出血、溃疡利糜烂。
8.1.2行为观察
病角摄食量减少.身体消瘦，游动缓慢，垦分散状态，离群漫游，时常翻转牙体，呼吸频率加快，严重时导致死广
8.2显微镜检查
月载玻片将鱼体表的液轻轻刮下正片，显微镜下可见黏液中有黑色圆形或椭阅形业体（参见图C.3),大小为c.2mm~0.5mm。取鳃丝压片显微镜下也可见鳃丝上皮浅层中具有黑色圆形或椭因形出体（参见图（.1），也体周身被纤毛，活体川持续旋转运动。8.3PCR检测
8.3.1虫体DVA的提取
取1个或儿个虫体，置丁1净平班巾，用灭菌水反复洗淤3次，再转移到洁净的离心管中，用祈磨棒奔碎，使其充分破裂：然后、加人蛋白酶K(终浓度为200/rn1.)消化.按微最样品基因纠「)NA拥提试剂盒说明书的方法提取IDNA：将提取的DNA用TE溶液或双蒸水稀释至总体积10μL1C保存待用，
8.3.2PCK扩增
8.3.2.1PCR扩增对照样品
PCR持增反应中设立性对照样品、阴性对照样品和空H对照样品，以虫体I)VA作为而I性对熙样品，取健康鱼肌肉组织抽提NA作为阴性对照样品，取等体积的水代模板作为白对照样品8.3.2.2第—轮PCK扩增
采用5OL反应体系，向0.2nLPCR管中依次加人I0×PCRbuffer.MgCldNTPs，物1和SC/T 7217—2014
物2、模板DNA、IαyDNA聚合酶，最后加水补足0L.混匀后瞬时离心.PCR扩增仪中扩增，PCR折增反成体系见表，PR扩增条件为：94℃变性min91℃30s,55℃30s.72℃1min.35个循坏72延伸10mina
表1PCR扩增反应体系
Ix PC'R huffertMg'+Ere
Mg(Cl.(25 nz-ol/ 1)
-NTPet2. : mnuol/ L)
物 1 10 ;rmol/ 1.)
引物2(10 pt0l/ [.)
模板12NA
T NA聚酶( /u)
8.3.2.3第二轮PCR扩增
库积，l
至总体积为5！
如果第-轮PCR扩增后的产物电泳时看不到INA条带，取第一轮PCR产物4μI.作为模板：如果能看到TDNA条带,则将第一轮 PCR 物稀释 100 倍后，瑕 4μI.作为模板。然后，加人10》PCRmffrr、Mgl：、dNTPs、引物1和引物3、TaqDNA聚合酶，最后加水补足50μL(参照第-轮ICR抑增体系),混勾后瞬时离心,PCR扩增仪中扩增。PCR扩增条件为:94%变性5min;92℃ 30555\：305.72℃40s，35个循环，72℃延仲10min。8.3.3琼脂糖电泳
取适量5X×T3E缓冲液稀释10倍(T作浓度为0.5×TBF缓冲液)，配制1.5%的琼脂糖凝咬-川人化乙链至终浓度为0.5ug/ml。电泳时取3μl~5ul.PCR产物与0.5u1(10X）加样缓冲液混合均勾，小心加到加样孔巾,以DNAMarkcr作为核酸分了量标准套照物。5V/cm电泳约0.5h.当溴酚益到达底部时停止。取凝胶于凝胶成像仪中观察，第一轮PCR扩增条带约为750bp，也可能没有条带即性刘照和空白对照没有扩增条常，第二轮PCR产牛一条540 bhp的扩增条带者判定为附性反应（参见附录
8.3.4PCK扩增产物的回收与纯化按PCR产物回收试剂盒说明进行扩增产物的回收与纯化，将纯化的PCR产物转移到离心管中，一29℃保存，
8.3.5CR扩增产物的序列测定和比对将PCR纯化产物送测序公司进行序列测定，测序结果与刺激隐核虫ITSrDNA序列（参见附录E）逆行比对，序列树似性在95%以上者,判断待测样品为刺激隐核虫，9结果综合判定
9.1如果在体表或鳃上肉眼观察到小白点或在显微镜下观察到疑似虫体，则判断为可疑9.2如果在显微镜下观察划疑似出体，并用PCR力汰扩增出540bP的H标片段，经测序鉴定和刺激隐核虫的参考序列相似性达到95%以上，贿而确诊为刺激隐核出。病鱼同时符个8.1中的症状，则确诊为刺激隐核虫病。
SC/T7217—2014
A.11mol/I.Tris-HCpH8.0)
去离了水
附录A
【规范性附录】
试剂及其配制
充分溶解后,用盐酸调 pH至8. ,定容至1 I.sA.2TE缓冲液(plI8.0)
1 mal/I Tris-HCl(pH 8. o)
C. 5 mol/L EDIA(pH 8. 0)
加去离子水定容至100mL，混勾.4℃保存。A.35×TBE贮存液
EDTA(0. 5 ino/I.-pH 8. 0)
称量后放入烧杯向烧杯中加入800m1.去离子水，充分溶解后，定容至1,空温保存A.4EB(EthidiumBromide,核酸染色剂）用水配制成1Ciu/ml的浓缩液。用时每10m.琼脂糖溶液中加1s附录B
【资料性附录】
刺激隐核虫病简介bzxz.net
SC/T 7217—2014
刺激题核电病的病原为刺激隐核虫，t活史分为1个阶段，即滋准体（trophont）、胞变前休（rrloron)、胞囊（tomont)和幼虫（theront>阶段。寄生在鱼体上的价段称为慈养体，早圆形或架形.能布「皮浅表层内做旋转运动，以信土的体液、组织细胞为食，成熟后脱离宿主进人水体.即成为白出活动的胞粪前体，此期虫体可布水体中自由游动（约为21--8h），然后附着在固着物「，形成胞囊，胞囊在适合的环境条件下，其内部的原生质组经历·系列不均等分裂形成幼体。幼体成熟后逸出胞囊逃人水中，即为兵有感染能力的幼虫
刺滋隐核出病可以危害绝大多数海水硬骨鱼类：WilkieandGordin（1969)曾报：刺激隐核业感染06种水族馆养殖的游水鱼类。Digglcs（1956）剂查了澳大利亚的14种野牛海水鱼，在13种角体工发现了刺激隐核虫。罗晓春等（2008)对中国华南地区海水养殖鱼类的调食发现：6个科的1种游水养殖色类都可被刺激隐核虫感染：迄今为比报道刺激隐核虫病的地区包括印度洋地区、太平洋地区、波斯湾、以色列的红海、大西洋和加勒比海地这等热带亚热带海区。在东南亚海区，刺激隐核业病发病严壹的鱼奖主要为网箱养殖的卵形、人黄鱼、石斑色、鲈、鲷科鱼类和比鱼类等，一般认为发病与放养密度过大密切相美
刺激隐核虫病主要发病季节为5月下句至？月中何和9月中旬至11月下句.水温22%~30%的季节，该病流行高峰的水温是℃~-℃，病鱼摄食量减少，身体消瘦，游动缓慢，分散状态，离群漫游，常翻转身体，呼吸灏率加快，严垂时导致死亡。SC/T7217—2014
附录C
（资料性附录
刺激隐核虫病临床症状及刺激隐核虫形态观察C.1卵形(Trachinotusovatus）体表感染刺激隐核虫形成的小白点见图1
图C.1卵形鲳体表感染刺激隐核虫形成的小白点C.2卵形鳃上寄生的刺激隐核虫
见图C.2
图C.2卵形鲳鳃上寄生的刺激隐核虫C.3黏液中的刺激隐核虫（200×）见图c3。
黏液中的刺激隐核虫（200×）
C.4卵形鲳鳃丝上寄生的刺激隐核虫（40×）见图c.4。
卵形鳃丝上寄生的刺激隐核虫（40×）图C.4
SC/T7217—2014
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附录D
（资料性附录）
刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图见图D.1。2.000-
说明：
2000marker;
阳性对照：
阴性对照：
空白对照；
刺激隐核虫检测样品第一轮PCR产物刺激隐核虫检测样品第二轮PCR产物。5
刺激隐核虫特异性PCR琼脂糖电泳图附录
【资料性附录】
刺激隐核虫ITSrINA序列
SC/T 7217—2014
CTAGTAAGIGCAAGTCAICAGCTTGTAETGAITAEGTTCCTGCCCTTTGIACACACCGCCLGTCGCTCCTACCGATTTCGAGTGATCCGKTGAACCTI'TGGACTGCGCTAACACTAGTTAGTGCGGGAAGTTAAGTAAAC'CACTTCACTTAGAGGAAGGAGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAAC'CTGCGGAAGGATCAITAACACAATTAAGATCAAACCTAAAAATTTAITTIGATGTATTGAGATCTGATAATTTTTAATTAICAATCTCAAATTTTIACAAATTTATTIIAAIAATAAAFATCATIAAGTTAATIAAAITAACTAAAGAAAAITIICAACGGTGGATATCTTGGCTCCCATAACGATGAAGAACGCAGCGAAAIGCGATACGGAATGCGAATTGCAGAATTCCGCGAGTCATCAGAICTTTGAACCAAAITGCGCCGAGGGGAIAICCCAACGGCATGTTTTTTTCAGTGTOTTTATTGAAATCATAAAACTAAATGTGATTGAAIGCATAATTTATAI
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