SC/T 3049-2015
基本信息
标准号： SC/T 3049-2015
中文名称：刺参及其制品中海参多糖的测定 高效液相色谱法
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
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标准简介
SC/T 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖的测定 高效液相色谱法
SC/T3049-2015
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标准内容
ICS67.120.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T3049-2015
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
Determination of sea cucumber polysaccharides in Apostichopus japonicus andinterrelatedproducts
High performance liquid chromatography2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。SC/T3049—2015
本标准由农业部渔业渔政管理局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会（SAC/TC156/SC3)）归口。本标准起草单位：中国海洋大学，大连漳子岛渔业集团股份有限公司，山东东方海洋科技股份有限公司、中国水产科学院黄海水产研究所本标准主要起草人：薛长湖、薛勇、刘小芳、常罐光、黄万成、刘云涛、王联珠1范围
SC/T3049—2015
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
本标准规定了刺参（Apostichopuxjuponicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参，即食刺参，胶囊，浆液等深加工品中海参多糖含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于刺参（Apostichopusjapomicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参、即食刺参胶囊、浆液等深加工品中海参多糖含量的测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T3016水产品抽样方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
海参多糖sea cucumberpolysaccharides由海参岩藻聚糖硫酸酯和海参硫酸软骨素组成。海参岩藻聚糖硫酸酯是一类由L-岩藻糖聚合形成的直链硫酸化多糖：海参硫酸软骨素是一类具有岩藻糖支链取代的硫酸化多糖，主要由D-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-岩藻糖构成。4原理
样品经酶解、乙酸钾沉淀、酸解后制备得到海参硫酸软骨素水解液，水解液中岩藻糖与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）进行衔生反应，XDB-C色谱柱分离·经配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定岩藻糖衍生物的含量·内标法定量，以岩藻糖含量为基准计算出样品中海参多糖的含量。5试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂。5.1试验用水应符合GB/T6682一级水的要求。5.2标准物质：L-岩藻糖（Fuc），纯度≥99%。5.3内标物：乳糖（Lac).纯度≥99%5.4甲醇：色谱纯。
5.5乙睛：色谱纯。
5.6三氯甲烷。
5.7冰乙酸。
5.8盐酸。
5.9三氟乙酸。
5.10木瓜蛋白酶：食品级。
SC/T3049—2015
乙酸钠。
2乙二胺四乙酸。
5.13半胱氨酸盐酸盐。
5.14乙酸钾。
5.15氢氧化钠。
磷酸二氢钾
5.171-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)5.180.1mol/L乙酸钠缓冲液：准确称取8.20g无水乙酸钠，用水溶解并定容至1000ml.用冰乙酸调节pH至5.9~6.1g
5.194mol/L三氟乙酸浴
模，准确移取30nP毛B用水带择至10gm我准布
家化锅用小解并稀释
5.200.3mol/L氢氧
推确移最
10.3mol/L盐
5.220.5mol/L
葡字牌
5-吡唑啉酮.用
备液滑
5.23岩藻糖标
称取经真童干爆
100mL。该溶
5.24岩藻糖
0.25mmol/l
天配制。
5.25内标
液浓度为2m
mol/L氧氧化
5.27磷酸盐
5.28磷酸盐
仪器和设备
工作液
车确移取活园
过临光
美糖标
教有效
小取经真实手最至恒重的乳
自效用
71-苯基-3-甲基-
溶解并稀释至
用水霜
5.3168mg用水溶解
高效液相色谱仪
天平：感量0.01g.
紫外检测
分析天平：感量0.000
离心机，15000r/min
电热恒温鼓风干燥箱。
超声波清洗仪
6.7涡旋混合器。
3恒温水浴锅。
恒温水浴振荡器。
6.10氮吹仪。
6. 11 pH计。
6.12微量移液器及配套枪头。
小型粉碎机，
磷酸盐
海酸饰
riKacahaiKAca
1ommol/L
准工作液，当
mL该溶
0mL用0.3
1000mL
1000mL。
7测定方法
7.1试样制备
SC/T3049—2015
鲜刺参去肠腺、灰嘴，剪成0.5cm×0.5cm的小块，70℃烘干12h.粉碎，过10目筛，混勾备用：干刺参，粉碎.过10目筛混匀备用：即食刺参，剪成0.5cm×0.5cm的小块，70℃烘于12h，粉碎，过10目筛，混匀备用：胶囊，取内容物混勾备用，浆液混匀备用。7.2试样海参硫酸软骨素的提取与水解液的制备7.2.1鲜刺参、干刺参、即食刺参及刺参胶等固体制品准确称取（1.00土0.05）g试样，置于50三角瓶中：加人（5.18）.加人100mg本瓜蛋广，37mg25mL0.1mol/L乙酸钠缓冲液
胺四乙酸和22m半胱餐酸盐酸盐，涡旋混合，60℃恒温50R就B电#
水浴振荡酶解24h，将酶解液全部转移更90001
液转移至50mL烧杯
移至另一50mL离
mL容量瓶，用水
中，加人1mL4
超声溶解残余物
瓶，用水稀释
7.2.2刺参
氧氧化
夜、刺参
准确移取
100mg木瓜蛋
24 h.将酶解
过滤后转移至
7.3试样衍
准确移耶
2mmol/L乳机
0.3 mol/L号
0.3mol/L盐酸
移至5元
按上述方法用三年
7.4岩藻糖系列标
分别准确移取浓度
参硫酸软
骨系浴服
路控件
东水解液
参液软
O调节水解技PH室
服液、刺专酒、刺参乳饮料等液体制品置于
100m烧杯中
接西和
10min弃去流淀，上清
于4℃静置12h后转
望声溶解后转移至10
液于5mL安培瓶
吹干，加2mL水
转移人5ml容量
酸利线
真扑维费，病混合
上商心管中：子900
心0mm寿去沉
杯中加入12致乙服钾涡旋混合，超市至乙胶钾完（5.18），加人
温水浴振荡酶解
全器解
武样海参硫酸软
手液行生
1.25mmol/L的岩藻糖标
乳糖溶液（5.25）、4500.5m
炸液（5.
荣水带
基5啤味面
各反应
心子药，静票
中国器
相过0.45m感膜供高效表
0.50mmol/L.0.
具塞试
甲基-5-吡唑味酮甲
1苯基-3
氢氧化钠溶液（5.20），涡旋混合均习后乳糖衍生物的峰面积之比为纵坐标，以相应的7.5测定
7.5.1色谱参考条件
45um水膜
加人50
22）和450L
温.加450
层三氯甲烷层：
漕分析。
mol/ L,1.co mmol/L
分别加入502mmol/L
清液（5.22）和450mL0.3mol/1bzxZ.net
液行生物。以岩藻糖衍生物的峰面积与蕾精系列标
为横坐标绘制标准工作曲线，
7.5.1.1色谱柱：XDB-C，5μm，250mm×4.6mmc内径）或性能相当者。7.5.1.2柱温：25℃
7.5.1.3检测波长：254mm
7.5.1.4进样量：20L
7.5.1.5流速：1.0mL/min
7.5.1.6流动相：A：磷酸盐-乙睛溶液1(5.27).B：磷酸盐乙睛溶液2（5.28）；梯度洗脱程序3
SC/T3049—2015
见表1。
时间，min
7.5.2色谱分析
表1流动相梯度洗脱程序
分别注20L岩藻糖系列标准衍生液（7.4）和试样衔生液（7.3）于高效液相色谱仪中，按7.5.1规定的色谱条件进行分析，记录峰面积，试样液中岩藻糖衍生物的响应值均应在标准曲线范围之内。根据标准品的保留时间定性，内标法定量。岩藻糖标准溶液衍生物和试样液衍生物液相色谱图参见附录A。
7.6结果计算和表述
试样中海参多糖的含量按式(1)计算X=CX164X5x10x20-
AX1000
式中：
试样中海参多糖的含量，单位为毫克每克或毫克每毫升（mg/g或mg/ml）：由标准曲线计算得到的试样液中岩藻糖的浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L)：岩藻糖的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)：试样海参硫酸软骨素水解液定容体积，单位为毫升（mL）：试样海参硫酸软骨素定容体积与海参硫酸软骨素溶液水解体积的比值：试样质量或试样体积，单位为克或毫升（g或mL）：刺参中海参硫酸软骨索所含岩藻糖与海参多糖的质量转换系数。计算结果保留3位有效数字，
8检测方法灵敏度、准确度和精密度8.1灵敏度
本方法中岩藻糖的检出限为1.2×10-mmol/L.定量限为5.0×10-mmol/L。8.2准确度
本方法岩薄糖在0.05mmol/L~6.00mmol/L添加浓度范围内回收率为70%~110%。8.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差≤15%。riKacaaiKAca
A.1岩藻糖标准溶液衍行生物液相色谱图见图A.1。
附录A
（资料性附录）
液相色谱图
岩藻糖标准溶液衍生物液相色谱图（1mmol/L）A.2淡干刺参液相色谱图
见图A.2。
淡干刺参液相色谱图
SC/T30492015
SC/T3049—2015
A.3刺参口服液液相色谱图
见图A.3.
刺参口服液液相色谱图
riKacaOiaiKAca
SC/T3049-2015
中华人民共和国
水产行业标准
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
SC/T30492015
中国农业出版社出版
（北京市朝阳区麦子店街18号楼）（邮政编码：100125
网址：ccap.com.cn)
北京昌平环球印刷厂印刷
新华书店北京发行所发行
各地新华书店经销
开本880mm×1230mm1/16
2015年5月第1版
印张75
字数15千字
2015年5月北京第1次印刷
书号：16109-3420
定价：18.00元
版权专有侵权必究
举报电话：（010）65005894
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T3049-2015
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
Determination of sea cucumber polysaccharides in Apostichopus japonicus andinterrelatedproducts
High performance liquid chromatography2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。SC/T3049—2015
本标准由农业部渔业渔政管理局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会（SAC/TC156/SC3)）归口。本标准起草单位：中国海洋大学，大连漳子岛渔业集团股份有限公司，山东东方海洋科技股份有限公司、中国水产科学院黄海水产研究所本标准主要起草人：薛长湖、薛勇、刘小芳、常罐光、黄万成、刘云涛、王联珠1范围
SC/T3049—2015
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
本标准规定了刺参（Apostichopuxjuponicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参，即食刺参，胶囊，浆液等深加工品中海参多糖含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于刺参（Apostichopusjapomicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参、即食刺参胶囊、浆液等深加工品中海参多糖含量的测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T3016水产品抽样方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
海参多糖sea cucumberpolysaccharides由海参岩藻聚糖硫酸酯和海参硫酸软骨素组成。海参岩藻聚糖硫酸酯是一类由L-岩藻糖聚合形成的直链硫酸化多糖：海参硫酸软骨素是一类具有岩藻糖支链取代的硫酸化多糖，主要由D-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-岩藻糖构成。4原理
样品经酶解、乙酸钾沉淀、酸解后制备得到海参硫酸软骨素水解液，水解液中岩藻糖与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）进行衔生反应，XDB-C色谱柱分离·经配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定岩藻糖衍生物的含量·内标法定量，以岩藻糖含量为基准计算出样品中海参多糖的含量。5试剂
除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂。5.1试验用水应符合GB/T6682一级水的要求。5.2标准物质：L-岩藻糖（Fuc），纯度≥99%。5.3内标物：乳糖（Lac).纯度≥99%5.4甲醇：色谱纯。
5.5乙睛：色谱纯。
5.6三氯甲烷。
5.7冰乙酸。
5.8盐酸。
5.9三氟乙酸。
5.10木瓜蛋白酶：食品级。
SC/T3049—2015
乙酸钠。
2乙二胺四乙酸。
5.13半胱氨酸盐酸盐。
5.14乙酸钾。
5.15氢氧化钠。
磷酸二氢钾
5.171-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)5.180.1mol/L乙酸钠缓冲液：准确称取8.20g无水乙酸钠，用水溶解并定容至1000ml.用冰乙酸调节pH至5.9~6.1g
5.194mol/L三氟乙酸浴
模，准确移取30nP毛B用水带择至10gm我准布
家化锅用小解并稀释
5.200.3mol/L氢氧
推确移最
10.3mol/L盐
5.220.5mol/L
葡字牌
5-吡唑啉酮.用
备液滑
5.23岩藻糖标
称取经真童干爆
100mL。该溶
5.24岩藻糖
0.25mmol/l
天配制。
5.25内标
液浓度为2m
mol/L氧氧化
5.27磷酸盐
5.28磷酸盐
仪器和设备
工作液
车确移取活园
过临光
美糖标
教有效
小取经真实手最至恒重的乳
自效用
71-苯基-3-甲基-
溶解并稀释至
用水霜
5.3168mg用水溶解
高效液相色谱仪
天平：感量0.01g.
紫外检测
分析天平：感量0.000
离心机，15000r/min
电热恒温鼓风干燥箱。
超声波清洗仪
6.7涡旋混合器。
3恒温水浴锅。
恒温水浴振荡器。
6.10氮吹仪。
6. 11 pH计。
6.12微量移液器及配套枪头。
小型粉碎机，
磷酸盐
海酸饰
riKacahaiKAca
1ommol/L
准工作液，当
mL该溶
0mL用0.3
1000mL
1000mL。
7测定方法
7.1试样制备
SC/T3049—2015
鲜刺参去肠腺、灰嘴，剪成0.5cm×0.5cm的小块，70℃烘干12h.粉碎，过10目筛，混勾备用：干刺参，粉碎.过10目筛混匀备用：即食刺参，剪成0.5cm×0.5cm的小块，70℃烘于12h，粉碎，过10目筛，混匀备用：胶囊，取内容物混勾备用，浆液混匀备用。7.2试样海参硫酸软骨素的提取与水解液的制备7.2.1鲜刺参、干刺参、即食刺参及刺参胶等固体制品准确称取（1.00土0.05）g试样，置于50三角瓶中：加人（5.18）.加人100mg本瓜蛋广，37mg25mL0.1mol/L乙酸钠缓冲液
胺四乙酸和22m半胱餐酸盐酸盐，涡旋混合，60℃恒温50R就B电#
水浴振荡酶解24h，将酶解液全部转移更90001
液转移至50mL烧杯
移至另一50mL离
mL容量瓶，用水
中，加人1mL4
超声溶解残余物
瓶，用水稀释
7.2.2刺参
氧氧化
夜、刺参
准确移取
100mg木瓜蛋
24 h.将酶解
过滤后转移至
7.3试样衍
准确移耶
2mmol/L乳机
0.3 mol/L号
0.3mol/L盐酸
移至5元
按上述方法用三年
7.4岩藻糖系列标
分别准确移取浓度
参硫酸软
骨系浴服
路控件
东水解液
参液软
O调节水解技PH室
服液、刺专酒、刺参乳饮料等液体制品置于
100m烧杯中
接西和
10min弃去流淀，上清
于4℃静置12h后转
望声溶解后转移至10
液于5mL安培瓶
吹干，加2mL水
转移人5ml容量
酸利线
真扑维费，病混合
上商心管中：子900
心0mm寿去沉
杯中加入12致乙服钾涡旋混合，超市至乙胶钾完（5.18），加人
温水浴振荡酶解
全器解
武样海参硫酸软
手液行生
1.25mmol/L的岩藻糖标
乳糖溶液（5.25）、4500.5m
炸液（5.
荣水带
基5啤味面
各反应
心子药，静票
中国器
相过0.45m感膜供高效表
0.50mmol/L.0.
具塞试
甲基-5-吡唑味酮甲
1苯基-3
氢氧化钠溶液（5.20），涡旋混合均习后乳糖衍生物的峰面积之比为纵坐标，以相应的7.5测定
7.5.1色谱参考条件
45um水膜
加人50
22）和450L
温.加450
层三氯甲烷层：
漕分析。
mol/ L,1.co mmol/L
分别加入502mmol/L
清液（5.22）和450mL0.3mol/1bzxZ.net
液行生物。以岩藻糖衍生物的峰面积与蕾精系列标
为横坐标绘制标准工作曲线，
7.5.1.1色谱柱：XDB-C，5μm，250mm×4.6mmc内径）或性能相当者。7.5.1.2柱温：25℃
7.5.1.3检测波长：254mm
7.5.1.4进样量：20L
7.5.1.5流速：1.0mL/min
7.5.1.6流动相：A：磷酸盐-乙睛溶液1(5.27).B：磷酸盐乙睛溶液2（5.28）；梯度洗脱程序3
SC/T3049—2015
见表1。
时间，min
7.5.2色谱分析
表1流动相梯度洗脱程序
分别注20L岩藻糖系列标准衍生液（7.4）和试样衔生液（7.3）于高效液相色谱仪中，按7.5.1规定的色谱条件进行分析，记录峰面积，试样液中岩藻糖衍生物的响应值均应在标准曲线范围之内。根据标准品的保留时间定性，内标法定量。岩藻糖标准溶液衍生物和试样液衍生物液相色谱图参见附录A。
7.6结果计算和表述
试样中海参多糖的含量按式(1)计算X=CX164X5x10x20-
AX1000
式中：
试样中海参多糖的含量，单位为毫克每克或毫克每毫升（mg/g或mg/ml）：由标准曲线计算得到的试样液中岩藻糖的浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L)：岩藻糖的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)：试样海参硫酸软骨素水解液定容体积，单位为毫升（mL）：试样海参硫酸软骨素定容体积与海参硫酸软骨素溶液水解体积的比值：试样质量或试样体积，单位为克或毫升（g或mL）：刺参中海参硫酸软骨索所含岩藻糖与海参多糖的质量转换系数。计算结果保留3位有效数字，
8检测方法灵敏度、准确度和精密度8.1灵敏度
本方法中岩藻糖的检出限为1.2×10-mmol/L.定量限为5.0×10-mmol/L。8.2准确度
本方法岩薄糖在0.05mmol/L~6.00mmol/L添加浓度范围内回收率为70%~110%。8.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差≤15%。riKacaaiKAca
A.1岩藻糖标准溶液衍行生物液相色谱图见图A.1。
附录A
（资料性附录）
液相色谱图
岩藻糖标准溶液衍生物液相色谱图（1mmol/L）A.2淡干刺参液相色谱图
见图A.2。
淡干刺参液相色谱图
SC/T30492015
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A.3刺参口服液液相色谱图
见图A.3.
刺参口服液液相色谱图
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中华人民共和国
水产行业标准
刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法
SC/T30492015
中国农业出版社出版
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网址：ccap.com.cn)
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新华书店北京发行所发行
各地新华书店经销
开本880mm×1230mm1/16
2015年5月第1版
印张75
字数15千字
2015年5月北京第1次印刷
书号：16109-3420
定价：18.00元
版权专有侵权必究
举报电话：（010）65005894
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