SC/T 7019-2015
基本信息
标准号： SC/T 7019-2015
中文名称：水生动物病原微生物实验室保存规范
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SC/T 7019-2015 水生动物病原微生物实验室保存规范
SC/T7019-2015
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标准内容
ICS 65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7019-2015
水生动物病原微生物实验室保存规范Laboratory preservation methodfor pathogenic microorganism of aquatic animals2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照CB/T1.1—2009给出的规则起草SC/T7019—2015
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承扣识别这些专利的责任。本标准由农业部渔业渔政管理局提出。本标准由全国水产标化技术委员会（SA/T155)归。本标准起草单位：上海海洋人学。本标准主要起草人：杨先乐、胡鲲.李怡、赵依妮、邱军强、宋增福、肖丹，I
SC/T 7019—2015
本标准是以规范水生动物病原微牛物的保存方法、实现水生动物病原微生物资源的充分共享和可持续利为目的而制定的。本标准在制定过程中.本着以种质资源共享为主要原则、既结合了我国现有工作基础，又考虑「我国水产养殖业的特殊性.尽可能地把水生动物病原微生物资源的特征描绘出来，1范围
水生动物病原微生物实验室保存规范SC/T 7019—2015
本标准规定了水生动物病原微生物保存的术语和定义、基本要求、保存方法和记录要求。.本标准适用于水生动物病原微生物的收集、整理、保存过程中有关特征的基本描述和基本数据、信息的采集。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件CB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义
下列术语和定义适用十本文件。3.1
水生动物病原微生物pathagenic microarganism of aquatic animals能感染水生动物，并引起水生动物发生病理变化的细菌、真菌和病毒等，3.2
病原微生物的保存
preservation for patbogenic microorganism将病原徽生物用各白适宜的方法妥善保存.避免失活，污染，保持其原有性状基本稳定。4基本要求
4.1设施
水生动物病原微生物的保存应有独立的保存设施，保存设施应定期维护，需配备备用电源。4.2人员
水生动物病原徽生物的保存由双人负责，并详细记录入库和出库信息，4.3保存效果的检查
保存机构要对保存的水牛动物病原微牛物定期检查，确保保存效果。5保存方法
5.1液氨超低温保存法
见附录A。
5.2—800冻结法
见附录 B。
5.3真空冷冻干燥法
见附录C。
5.4定期移植法
见附录 D。
5.5矿物油移植法
-iiiK wcutKAca
SC/T 7019—2015
见附录E。
5.6沙土管保存法
见附录上.
6记录要求
6.1培养物信息
6.1.1保存编号
水生动物病原微生物在保行机构的保存编号，由前缀和水生动物病原微生物编号两部分组成。前缀为保机构名称的英文缩写，前缀和水!动物病原微牛物编号之间留半角空格。6.1.2名称
6.1.2.1中文名
水生动物病原微牛物的中文名称。尚无文译名时，可填\暂无”。6.1.2.2拉丁文名
水生动物病原微生物的拉丁文名。以“属名」种名十词\表示.斜体学。6.1.3来源
6. 1. 3. 1采集地点
水生动物病原微生物的分类、采集地点：6.1.3.2提供单位
水生动物病原微生物的提供单位名称。6. 1. 3.3提供人
水生动物病原微生物的提供人。6.1.3.4水生动物病原微生物在收存单位之间的转移情况收荐单位前以左指向箭头一”斤头，收存单位之间用左指向箭头连接6.1.4宿主
6.1.4.1分类的宿主
水牛动物病源微牛物分类来源的宿主的中文或技丁文名称等。6.1.4.2引起宿主疾病名称
水生动物病原微牛物引起循主的疾病名称。6. 1.4.3靶组织
水生动物病原微生物侵染宿丰的靶组织，6.1.5培养条件
6.1.5.1培养基
水生动物病原微牛物最适培养法的统一编号，由前缀和培养基编号两部分组成。前缀为统一培养苯编号的英文缩写CM.编号以4位数表示;前缀和培养基之间不留空格：培养基的统一编号参考中国菌种日录》化学1业出版社.2007年第一版）。6.1.5.2培养温度
水牛动物病原微生物的最适培养温度单位为℃。6.1.6生物学信息
6.1.6.1生理生化特性
水生动物病原微生物的牛化特性.如革兰氏染色、氧化酶反应等，6.1.6.2遗传学背景
SC/T7019—2015
水生动物病原微生物携带的特定用途的质粒、F因子，裁体、筛选标记基因、启动子、增强子、信号肽基因等信息。
6.1.7图像信息
水生动物病原微生物的资源数字图像。数字图像的文件人小宜在200K以内，以外部文件存放，在该字段上填写图像文件的文件名称。图像文件命名规则为：资源号.jpg。6. 1. 8保存时间
水生动物病原微生物被保存机构收集、保存的时间。格式为YYYY/MM/TDD，其巾YYYY为年，MM 为月,DD 为口。
6.1.9模式菌株
水牛动物病原微生物是否为模式株：a）模式株；
b）非模式株。
6.1.10用途
水生动物病原微生物的主要用途主要包括以下几个方面：a）分类：
h）研究；
c）教学，
d）牛产，
e）其他，
6.1.11实物保存ID
培养物在培养设施中保存的物理地址。6.2共享信息
6.2.1共享方式
水生动物病原微生物的共享方式，公益性共亨；
公益性借用共亨：
合作研究共亨；
知识产权性交易共享；
资源纯交易性共享；
资源租赁性共享；
资源交换性共享；
收藏地共享；
i）行政许可性共享。
6.2.2提供形式
提供给资源使用者的水生动物病原微生物的形式：a）斜而培养物；
b）冻于物；
c）冻结物；
d）其他。
6.2.3获取途径
获得水生动物病原微生物的途径：3
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SC/T 7019—2015
交换所得；
白行分离；
购买；
d）其他；
联系方式（名称、地址、邮编、联系人、电话、E-mail等）。6.2.4源数据主键
链接水生动物病原微生物特性数据的主键值，以病原微牛物保疗编号（无空格）表示，6.3保存单位信息
6.3.1保存单位中文名称
水生动物病原微物保存单位的中文全称6.3.2主管部门
水生动物病原微生物保存单位的十管部门。6. 3.3联系方式
水生动物病原微生物保存单位的联系方式.包括电话、网址、E-mal等。6.3.4资源保存类型
水生动物病原微牛物的保存类型：a）培养物；
一元培养物；
基因：
d）其他，
附录A
【规范性附录]
液氨超低温保存法
液氮超低温保存法适宜各种细菌、真菌和病毒的保存。SC/T 7019—2015
其原理为利用微生物在一130以下新陈代谢趋于停止，可将微生物保存在一196°℃的波态氮或一150℃的氮气中。
A.1安管或冻存管的准备
州圆底翻硅玻璃制品的安管，或螺旋口的塑料冻存管。将冻存管或安部管清洗干净，121%下高压火菌 15 min~~20 min,烘下,备用。A.2保护剂的准备
保护剂种类要根据病原微生物的类别进行选择。般来用10%～20%寸油。A.3保存物的准备
A.3.1病原菌培养物的准备
菌种的谁备可选择下列几种方法之一：a）刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内；b）接种液体培养基，与保护剂混个分装十冻存管内：将培养物接种在平删上培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板L切取一些大小均勾的小映(直径为5 mm~10 mm）,与保护剂混勾后加入冻存管内：d）在小安管中装 1.2 mL--2 mL的琼脂培养基,接种菌种,培养 2 d~10 d 后,加入保护剂,待保存。
A3.2病毒培养物的准备
a）剪-·段两端各超出冷冻管长度为2cm的热收缩塑料管；b）将含有澄清病毒态液（组织培养的上清培养基或组织培养基内的细胞溶解产物）冰浴2min-3min,用灭菌移液管将0.2ml.冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内.将盖子拧紧；）将冷冻管放入热收缩塑料管中部.插人正确的标签：d）用喷灯小心加热热收缩塑料管，使之包住冷冻管：e）再小心加热热收缩塑料管的两端至完全密封，待保。A.4预冻
倾冻时，--殷冷冻速度控制在每分钟下降1℃在右,使样品结钙一35℃。片前常用的控温方法如下
a）程序控温降温汰：府用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温-能很好地控制降温速率。
b）分段降温法：将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或感挂丁冰冷的气雾中逐渐降温。一般采用一步控温：将安管或塑料小管先放一20℃-~一40℃冰箱中1h2h;然后，取出放人液氮罐中快速冷冻
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SC/T 7019—2015
c）对耐低温的病原菌，可以直接放人超低温气相或液相氮中A.5保存
将安管或塑料冻存管置于液氮罐中保存--般气村中温度为一150℃，液相中温度为一196℃。A.6
6复苏
从液氛罐中取山安颜管或朔料冻存管，立即放置在28℃-30℃水济中快速复苏并适当搭动，直到内部结冰全部溶解为止.一般需50s~10C3。开启安管或塑料冻存管·将内容物移至适宜的培养基」进行培养。
附录B
【规范性附录】
一80℃冻结法
一80℃冻结法适宜保存各种纫菌、真菌和病毒。SC/T 70192015
一80℃冻结法是在一80℃冰箱中以减缓培养物的代谢活动而进行冷冻的--补保存方法。B.1安额管的准备
见附录A。
B.2保护剂的选择和准备
保护剂种类要根据细菌类别选择。配制保护剂时·应注意其浓度、PH和灭菌方法。来取脱脂牛奶作为保护剂需在100℃间歇煮沸2次·～3次，每次10min~30min-备用。B.3保存物的准备
在最适宜的培养条件下将培养物培养至静止期或成熟期·逊行纯度检查后，与保护剂混合均匀，分製，培养物浓度以细胞或孢于不少丁105个/ml.～10个/I为宜。采用较长的毛细滴管，将培养物直接滴入安部管底部，每管分装量为0.1ml.～0.2mL。若足球形安管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物-应离心去除培养基；然后，将培养物与保护剂混匀.再分装于安瓶管中。分装安颜管时间尽量要短,最好在1h-~2h内分装完串并预冻。B.4保存
将安部管或塑料冻存管置于一80%冰箱中保存，B.5复苏
从冰箱中取出安管或塑料冻存管、应立即放置28℃~-30℃水浴中快速复苏并适当快速摇动，直到内部结冰全部溶解为止，需50s~-100$。开启安额管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行赔养。
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附录C
【规范性附录】
真空冷冻干燥法
真空冷冻十燥法适汀细菌、点菌和病毒的保存真空冷冻干燥法将培养物冷冻后，在减压下利用升华作用除去水分，伙细胞的生理活动趋十停止：从而长期维持存活状态。
C.1安额管准备
见附录 A，
C.2保护剂的选择和准备
见附录B.
C.3冻干样品的准备
见附录 B。
C.4预冻
—般预冻2 h 以上.温度达到—20℃~ 35℃。C.5冷冻干燥bZxz.net
采用冷冻干爆机进行冷冻干燥，将预冻后的样品安管置于冷冻干燥机的干煤燥箱内，开始冷冻丁燥,时间一般为8h～20 h。
C.6封口及真空检验
将安潮管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安管颈部加热熔封。熔封店的千燥管可采用高频电火花测定直空度。C.7保存
安瓶管应避光保存。
℃8捡查
冷冻干燥后抽取若干支安管复苏，然后进行各项指标检查，如存活率、形态、杂菌污染等，C. 9复苏
复苏采用以下操作步骤：
a）用70头酒精棉花擦拭安瓶上部；b）将安管项部烧热；
用无菌棉签礁冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用锉刀或镊子轻听预部，敲下已开裂的安部管的顶蹦：
SC/T 7019—2015
用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移人新鲜培养基上逆行适温培养9
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T7019-2015
水生动物病原微生物实验室保存规范Laboratory preservation methodfor pathogenic microorganism of aquatic animals2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照CB/T1.1—2009给出的规则起草SC/T7019—2015
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承扣识别这些专利的责任。本标准由农业部渔业渔政管理局提出。本标准由全国水产标化技术委员会（SA/T155)归。本标准起草单位：上海海洋人学。本标准主要起草人：杨先乐、胡鲲.李怡、赵依妮、邱军强、宋增福、肖丹，I
SC/T 7019—2015
本标准是以规范水生动物病原微牛物的保存方法、实现水生动物病原微生物资源的充分共享和可持续利为目的而制定的。本标准在制定过程中.本着以种质资源共享为主要原则、既结合了我国现有工作基础，又考虑「我国水产养殖业的特殊性.尽可能地把水生动物病原微生物资源的特征描绘出来，1范围
水生动物病原微生物实验室保存规范SC/T 7019—2015
本标准规定了水生动物病原微生物保存的术语和定义、基本要求、保存方法和记录要求。.本标准适用于水生动物病原微生物的收集、整理、保存过程中有关特征的基本描述和基本数据、信息的采集。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件CB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义
下列术语和定义适用十本文件。3.1
水生动物病原微生物pathagenic microarganism of aquatic animals能感染水生动物，并引起水生动物发生病理变化的细菌、真菌和病毒等，3.2
病原微生物的保存
preservation for patbogenic microorganism将病原徽生物用各白适宜的方法妥善保存.避免失活，污染，保持其原有性状基本稳定。4基本要求
4.1设施
水生动物病原微生物的保存应有独立的保存设施，保存设施应定期维护，需配备备用电源。4.2人员
水生动物病原徽生物的保存由双人负责，并详细记录入库和出库信息，4.3保存效果的检查
保存机构要对保存的水牛动物病原微牛物定期检查，确保保存效果。5保存方法
5.1液氨超低温保存法
见附录A。
5.2—800冻结法
见附录 B。
5.3真空冷冻干燥法
见附录C。
5.4定期移植法
见附录 D。
5.5矿物油移植法
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SC/T 7019—2015
见附录E。
5.6沙土管保存法
见附录上.
6记录要求
6.1培养物信息
6.1.1保存编号
水生动物病原微生物在保行机构的保存编号，由前缀和水生动物病原微生物编号两部分组成。前缀为保机构名称的英文缩写，前缀和水!动物病原微牛物编号之间留半角空格。6.1.2名称
6.1.2.1中文名
水生动物病原微牛物的中文名称。尚无文译名时，可填\暂无”。6.1.2.2拉丁文名
水生动物病原微生物的拉丁文名。以“属名」种名十词\表示.斜体学。6.1.3来源
6. 1. 3. 1采集地点
水生动物病原微生物的分类、采集地点：6.1.3.2提供单位
水生动物病原微生物的提供单位名称。6. 1. 3.3提供人
水生动物病原微生物的提供人。6.1.3.4水生动物病原微生物在收存单位之间的转移情况收荐单位前以左指向箭头一”斤头，收存单位之间用左指向箭头连接6.1.4宿主
6.1.4.1分类的宿主
水牛动物病源微牛物分类来源的宿主的中文或技丁文名称等。6.1.4.2引起宿主疾病名称
水生动物病原微牛物引起循主的疾病名称。6. 1.4.3靶组织
水生动物病原微生物侵染宿丰的靶组织，6.1.5培养条件
6.1.5.1培养基
水生动物病原微牛物最适培养法的统一编号，由前缀和培养基编号两部分组成。前缀为统一培养苯编号的英文缩写CM.编号以4位数表示;前缀和培养基之间不留空格：培养基的统一编号参考中国菌种日录》化学1业出版社.2007年第一版）。6.1.5.2培养温度
水牛动物病原微生物的最适培养温度单位为℃。6.1.6生物学信息
6.1.6.1生理生化特性
水生动物病原微生物的牛化特性.如革兰氏染色、氧化酶反应等，6.1.6.2遗传学背景
SC/T7019—2015
水生动物病原微生物携带的特定用途的质粒、F因子，裁体、筛选标记基因、启动子、增强子、信号肽基因等信息。
6.1.7图像信息
水生动物病原微生物的资源数字图像。数字图像的文件人小宜在200K以内，以外部文件存放，在该字段上填写图像文件的文件名称。图像文件命名规则为：资源号.jpg。6. 1. 8保存时间
水生动物病原微生物被保存机构收集、保存的时间。格式为YYYY/MM/TDD，其巾YYYY为年，MM 为月,DD 为口。
6.1.9模式菌株
水牛动物病原微生物是否为模式株：a）模式株；
b）非模式株。
6.1.10用途
水生动物病原微生物的主要用途主要包括以下几个方面：a）分类：
h）研究；
c）教学，
d）牛产，
e）其他，
6.1.11实物保存ID
培养物在培养设施中保存的物理地址。6.2共享信息
6.2.1共享方式
水生动物病原微生物的共享方式，公益性共亨；
公益性借用共亨：
合作研究共亨；
知识产权性交易共享；
资源纯交易性共享；
资源租赁性共享；
资源交换性共享；
收藏地共享；
i）行政许可性共享。
6.2.2提供形式
提供给资源使用者的水生动物病原微生物的形式：a）斜而培养物；
b）冻于物；
c）冻结物；
d）其他。
6.2.3获取途径
获得水生动物病原微生物的途径：3
-iiiKwcutkAca
SC/T 7019—2015
交换所得；
白行分离；
购买；
d）其他；
联系方式（名称、地址、邮编、联系人、电话、E-mail等）。6.2.4源数据主键
链接水生动物病原微生物特性数据的主键值，以病原微牛物保疗编号（无空格）表示，6.3保存单位信息
6.3.1保存单位中文名称
水生动物病原微物保存单位的中文全称6.3.2主管部门
水生动物病原微生物保存单位的十管部门。6. 3.3联系方式
水生动物病原微生物保存单位的联系方式.包括电话、网址、E-mal等。6.3.4资源保存类型
水生动物病原微牛物的保存类型：a）培养物；
一元培养物；
基因：
d）其他，
附录A
【规范性附录]
液氨超低温保存法
液氮超低温保存法适宜各种细菌、真菌和病毒的保存。SC/T 7019—2015
其原理为利用微生物在一130以下新陈代谢趋于停止，可将微生物保存在一196°℃的波态氮或一150℃的氮气中。
A.1安管或冻存管的准备
州圆底翻硅玻璃制品的安管，或螺旋口的塑料冻存管。将冻存管或安部管清洗干净，121%下高压火菌 15 min~~20 min,烘下,备用。A.2保护剂的准备
保护剂种类要根据病原微生物的类别进行选择。般来用10%～20%寸油。A.3保存物的准备
A.3.1病原菌培养物的准备
菌种的谁备可选择下列几种方法之一：a）刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内；b）接种液体培养基，与保护剂混个分装十冻存管内：将培养物接种在平删上培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板L切取一些大小均勾的小映(直径为5 mm~10 mm）,与保护剂混勾后加入冻存管内：d）在小安管中装 1.2 mL--2 mL的琼脂培养基,接种菌种,培养 2 d~10 d 后,加入保护剂,待保存。
A3.2病毒培养物的准备
a）剪-·段两端各超出冷冻管长度为2cm的热收缩塑料管；b）将含有澄清病毒态液（组织培养的上清培养基或组织培养基内的细胞溶解产物）冰浴2min-3min,用灭菌移液管将0.2ml.冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内.将盖子拧紧；）将冷冻管放入热收缩塑料管中部.插人正确的标签：d）用喷灯小心加热热收缩塑料管，使之包住冷冻管：e）再小心加热热收缩塑料管的两端至完全密封，待保。A.4预冻
倾冻时，--殷冷冻速度控制在每分钟下降1℃在右,使样品结钙一35℃。片前常用的控温方法如下
a）程序控温降温汰：府用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温-能很好地控制降温速率。
b）分段降温法：将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或感挂丁冰冷的气雾中逐渐降温。一般采用一步控温：将安管或塑料小管先放一20℃-~一40℃冰箱中1h2h;然后，取出放人液氮罐中快速冷冻
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SC/T 7019—2015
c）对耐低温的病原菌，可以直接放人超低温气相或液相氮中A.5保存
将安管或塑料冻存管置于液氮罐中保存--般气村中温度为一150℃，液相中温度为一196℃。A.6
6复苏
从液氛罐中取山安颜管或朔料冻存管，立即放置在28℃-30℃水济中快速复苏并适当搭动，直到内部结冰全部溶解为止.一般需50s~10C3。开启安管或塑料冻存管·将内容物移至适宜的培养基」进行培养。
附录B
【规范性附录】
一80℃冻结法
一80℃冻结法适宜保存各种纫菌、真菌和病毒。SC/T 70192015
一80℃冻结法是在一80℃冰箱中以减缓培养物的代谢活动而进行冷冻的--补保存方法。B.1安额管的准备
见附录A。
B.2保护剂的选择和准备
保护剂种类要根据细菌类别选择。配制保护剂时·应注意其浓度、PH和灭菌方法。来取脱脂牛奶作为保护剂需在100℃间歇煮沸2次·～3次，每次10min~30min-备用。B.3保存物的准备
在最适宜的培养条件下将培养物培养至静止期或成熟期·逊行纯度检查后，与保护剂混合均匀，分製，培养物浓度以细胞或孢于不少丁105个/ml.～10个/I为宜。采用较长的毛细滴管，将培养物直接滴入安部管底部，每管分装量为0.1ml.～0.2mL。若足球形安管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物-应离心去除培养基；然后，将培养物与保护剂混匀.再分装于安瓶管中。分装安颜管时间尽量要短,最好在1h-~2h内分装完串并预冻。B.4保存
将安部管或塑料冻存管置于一80%冰箱中保存，B.5复苏
从冰箱中取出安管或塑料冻存管、应立即放置28℃~-30℃水浴中快速复苏并适当快速摇动，直到内部结冰全部溶解为止，需50s~-100$。开启安额管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行赔养。
-iiiKwcutKAca
SC/T 7019—2015
附录C
【规范性附录】
真空冷冻干燥法
真空冷冻十燥法适汀细菌、点菌和病毒的保存真空冷冻干燥法将培养物冷冻后，在减压下利用升华作用除去水分，伙细胞的生理活动趋十停止：从而长期维持存活状态。
C.1安额管准备
见附录 A，
C.2保护剂的选择和准备
见附录B.
C.3冻干样品的准备
见附录 B。
C.4预冻
—般预冻2 h 以上.温度达到—20℃~ 35℃。C.5冷冻干燥bZxz.net
采用冷冻干爆机进行冷冻干燥，将预冻后的样品安管置于冷冻干燥机的干煤燥箱内，开始冷冻丁燥,时间一般为8h～20 h。
C.6封口及真空检验
将安潮管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安管颈部加热熔封。熔封店的千燥管可采用高频电火花测定直空度。C.7保存
安瓶管应避光保存。
℃8捡查
冷冻干燥后抽取若干支安管复苏，然后进行各项指标检查，如存活率、形态、杂菌污染等，C. 9复苏
复苏采用以下操作步骤：
a）用70头酒精棉花擦拭安瓶上部；b）将安管项部烧热；
用无菌棉签礁冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用锉刀或镊子轻听预部，敲下已开裂的安部管的顶蹦：
SC/T 7019—2015
用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移人新鲜培养基上逆行适温培养9
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