GB 1886.69-2016
基本信息
标准号： GB 1886.69-2016
中文名称：食品安全国家标准 食品添加剂 天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 食品安全 国家标准 食品 添加剂 天门冬 苯丙氨酸 甲酯 乙酰 磺胺
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标准简介
GB 1886.69-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸
GB1886.69-2016
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB1886.69—2016
食品安全国家标准
食品添加剂
2016-08-31发布
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
乙酰磺胺酸
2017-01-01实施
人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸
GB1886.692016
本标准适用于以天门冬酰苯丙氨酸甲酯和乙酰磺胺酸盐为原料，经反应、离心干燥等步骤加工制得的食品添加剂天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸2化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1
化学名称
[2-羧基-β-（N-（6-甲氧羰基-2-苯基)乙基氨甲酰基)]乙胺正离子-6-甲基-4-氧代-1,2,3-噻嗪-3-负离子化物-2，2-二氧化物
2.2分子式
CH2O,N,S
2.3结构式
HOOCCH
相对分子质量
457.46（按2007年国际相对原子质量）3技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
COOCHa
理化指标
结晶性粉末
理化指标应符合表2的规定。
含量（以干基计).2/%
乙酰磺胺酸
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
干燥失重，w/%
比旋光度αm（20℃D）
钾+w/%
5-苯基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸，w/%其他相关物质，/%
铅（Pb)/（mg/kg）
感官要求
表2理化指标
GB1886.69—2016
检验方法
取适量试样置于清洁、干燥的玻璃皿中，在自然光线下，观察其色泽和状态，嗅其气味标
34.0~37.0
63.0~66.0
+14.5~+16.5
干燥温度为105℃，干燥时间为4h。检验方法
附录A中A.4
GB5009.3直接干燥法
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.7
GB5009.12
A.1警示
附录A
检验方法
GB1886.692016
试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况，操作者应采取适当的安全和防护措施A.2一般规定
本标准所使用试剂和水：在没有注明其他要求时.均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的二级水试验中所使用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3鉴别试验
试样在漠化钾分散剂下，在红外吸收光谱中呈现的最大波数与天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸的标准品相同，标准品红外光谱图见图A.1100
/本题
2 000)
波数/em！
天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸标准品红外光谱图A.4含量(以干基计)的测定
A.4.1滴定法
试剂和材料
苯甲酸：纯度≥99%。
A.4.1.1.1
A.4.1.1.2
乙醇。
N,N-二甲基甲酰胺。
A.4.1.1.3
GB 1886.69—2016
A.4.1.1.4百里酚蓝甲醇溶液：称取0.30g百里酚蓝于烧杯中，用甲醇溶解并稀释至100mL。A.4.1.1.5四丁基氢氧化铵甲醇溶液：0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液（0.1mol/L)的标定：量取10mLN，N-二甲基甲酰胺于锥形瓶中，加0.05mL百里酚蓝甲醇溶液，用0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定直至纯蓝色产生。立即加入0.2g（精确到0.001g)苯甲酸，搅拌，蓝色消失.在氮气保护下用0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定直至纯蓝色产生。记录第二次滴定所消耗的滴定液体积（V）。四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度ci，以摩尔每升（mol/L)计，按式（A.1)计算：C
式中：
苯甲酸的质量，单位为克（g)；一换算系数；
m×1000
第二次滴定所消耗的四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL)；苯甲酸的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)，[M,（C,H.Oz）=122.12]。A.4.1.2
仪器和设备
pH计或电位滴定仪。
A.4.1.3分析步骤
称取约0.1g~0.15g试样，精确至0.001g。置于200mL烧杯中，用50mL乙醇溶解，在氮气保护下，用0.1mo1/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定，用PH计或电位滴定仪测定电位值，记录第一突跃点和第二突跃点的滴定体积（Vi，Vz）,同时量取50mL乙醇进行空白滴定，记录体积（V。）。A.4.1.4结果计算
乙酰磺胺酸的质量分数W1，按式（A.2)计算：ViXcXM2
mlx1000
式中：
试样中第一突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)；（A.2)
乙酰磺胺酸的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)，[M,（C,H,NO,S)=163.15]；试样的质量，单位为克（g）；
换算系数
天门冬酰苯丙氨酸甲酯的质量分数w2.按式（A.3)计算：w2
式中：
(V2-Vi-V.) Xci XM,
mX1000
试样中第二突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；试样中第一突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；空白所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)；(A.3)
GB1886.69—2016
一一天门冬酰苯丙氨酸甲酯的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol).[M，（C14HiN,O,）=294.31]；
试样的质量，单位为克（g）；
1000换算系数。
高效液相色谱法
试剂和材料
A.4.2.1.1乙酰磺胺酸：纯度≥99.0%。A.4.2.1.2天门冬酰苯丙氨酸甲酯：纯度≥99.0%。A.4.2.1.3磷酸钾溶液：称取5.6g磷酸钾，加入820mL水.用磷酸调节pH=4.3.加人180mL甲醇，混匀.过0.45um滤膜，脱气备用。A.4.2.1.4甲醇溶液：1+9。
A.4.2.2仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器。A.4.2.3分析步骤
A.4.2.3.1标准溶液制备
A.4.2.3.1.1乙酰磺胺酸标准储备溶液：1000mg/L，精确称取0.100g乙酰磺胺酸标准品，用甲醇溶液定容到100mL，混匀备用，
A.4.2.3.1.2天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准储备溶液：1000mg/L，精确称取0.100g天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准品，用甲醇溶液定容至100mL，混匀备用。A.4.2.3.1.3乙酰磺胺酸和天门冬酰苯内氨酸甲酯混合标准溶液：100.0mg/L，分别吸取乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准储备溶液10.0mL至100mL容量瓶，用甲醇溶液定容，混匀备用。A.4.2.3.1.4乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准系列溶液：分别移取乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准混合标准溶液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL至10mL容量瓶用甲醇溶液定容.混勾.即得10.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L、75.0mg/L、100.0mg/L混合标准系列溶液。A.4.2.3.2试样溶液制备
称取约0.1g试样，精确至0.001g。置于100mL烧杯中，用少量甲醇溶液溶解。移入100mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0mL上述溶液，用甲醇溶液定容至10mL，供液相色谱仪测定，本试样溶液需现配现测。A.4.2.3.3色谱参考条件
色谱柱：C1s柱，250mmX4.6mm，5um，或是同等分离效果的色谱柱。流动相：磷酸钾溶液。
检测波长：210nm。
柱温：40℃。
流速：2.0mL/min
A.4.2.3.4测定
分别吸取混合标准系列溶液和试样溶液各10uL进行液相色谱测定，根据标准工作曲线计算试样5
GB1886.692016
中乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量。乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准溶液的液相色谱图见图A.2，天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸试样溶液的液相色谱图见图A.3。300 -+
i/murl
说明：
乙酰磺胺酸：
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准溶液的液相色谱图150
说明：
乙酰磺胺酸：
天门冬酰苯丙氨酸甲酯。
A.4.2.4结果计算
天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸试样溶液的液相色谱图试样中乙酰磺胺酸或天门冬酰苯丙氨酸甲酯的质量分数w3，按式（A.4)计算：ws
cxV,xf
×100%
m2x1000x1000
.（A.4)
式中：
GB1886.69—2016
从标准工作曲线得到的乙酰磺胺酸或天门冬酰苯丙氨酸甲酯溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液的稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）；
换算系数
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于5.0%，比旋光度α.（20℃.D)的测定
试剂和材料
甲酸溶液：15mol/L。
2仪器和设备
旋光仪。
分析步骤
称取6.200g试样，用甲酸溶液溶解并稀释至100mL。在30min内恒温到20℃，按GB/T613规定的方法用旋光仪进行测定，获得天门冬酰苯丙氨酸甲酯的比旋光度4结果计算
试样中天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸比旋光度αm（20℃,D).按式（A.5)计算：αm（20℃.D)=
式中：
试样中测得天门冬酰苯丙氨酸甲酯的比旋光度；0.646天门冬酰苯丙氨酸甲酯换算成天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸的系数。A.6
钾的测定
试剂和材料
氯化钾：标准物质.使用前在105℃干燥2h。盐酸：优级纯。
氯化钠溶液：200g/L。
仪器和设备
原子吸收光谱仪。
分析步骤
标准溶液制备
..（A.5)
钾标准储备溶液：100mg/L，准确称取0.1907g氯化钾，用水溶解于1000mL容量瓶，并稀A.6.3.1.1
释至刻度，混匀。
GB1886.69—2016
A.6.3.1.2钾标准溶液：10.0mg/L，取钾标准储备溶液10.00mL至100mL容量瓶，用水稀释至刻度，混匀。
A.6.3.1.3钾标准系列溶液：分别取2.50mL、5.00mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL钾标准溶液（A.6.3.1.2）至100mL容量瓶中，加2.0mL氯化钠溶液，1.0mL盐酸，然后用水稀释至刻度。即得浓度分别为0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的钾标准系列溶液。A.6.3.2试样溶液制备
称取约3g试样，精确0.001g。置于烧杯中，用水溶解，转移至500mL容量瓶，稀释至刻度。移取10.00mL试样溶液至100mL容量瓶，加人氯化钠溶液2.0mL，盐酸1.0mL，用水稀释至刻度，混匀。A.6.3.3测定
使用配有钾空心阴极灯和空气乙炔火焰的原子吸收光谱仪，在766.5nm钾发射谱线下，调节仪器达最佳测定条件，分别测定标准系列溶液和试样溶液及空白的吸收值。用钾标准溶液的吸光值和浓度绘制标准工作曲线。
A.6.4结果计算
钟的质量分数w，：按式（A.6）计算：w
式中：
(C-C)XV,X
msX1000×1000
测定用试样溶液中钾的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；测定用空白溶液中钾的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：一一试样的定容体积，单位为毫升（mL)；—试样溶液的稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）；
1000换算系数。
..(A.6)
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不天于10%。A.75-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸和其他相关物质的测定A.7.1i
试剂和材料
A.7.1.15-芊基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸：纯度99.5%。A.7.1.2甲醇：色谱纯。
A.7.1.3磷酸钾溶液：称取5.6g磷酸钾，加入820mL水，用磷酸调节pH4.3，加人180mL甲醇，混匀，过0.45μm滤膜，脱气备用。A.7.1.4甲醇溶液：1十9。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器，8bzxZ.net
分析步骤
标准溶液制备
GB 1886.69—2016
A.7.3.1.15-芋基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液：0.25mg/mL，精确称取0.025g5-芋基-3，6-二氧-2哌嗪乙酸，加人10mL甲醇，用水稀释到100mL。A.7.3.1.25-芊基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准使用溶液：0.075mg/mL，吸取0.25mg/mL5-苄基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液15mL于50mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，混匀备用A.7.3.1.3其他相关物质标准溶液：取A.7.3.2中试样溶液1.5mL于100mL容量瓶，用甲醇溶液稀释至刻度，混匀。
A.7.3.2试样制备
称取约0.05g试样，准确至0.0001g.用甲醇溶液溶解.转移至10mL容量瓶中，稀释至刻度，现用现配。
A.7.3.3色谱参考条件
色谱柱：Cis柱，250mmX4.6mm，5μm，或是同等分离效果的色谱柱。流动相：磷酸钾溶液。
检测波长：210nm。
柱温：40℃。
流速：2.0mL/min。
A.7.3.4测定
吸取5-基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液、其他相关物质标准溶液和试样溶液各20μL进行液相色谱分析，并分别记录其他相关物质标准溶液和试样溶液中天门冬酰苯内氨酸甲酯出峰时间两倍的色谱图（约30min）。5-芋基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的液相色谱图见图A.4。300
5-芒基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的液相色谱图15
结果计算
试样中5-芋基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸的质量分数w，按式（A.7)计算：ws
式中：
A,cXVs
AXmX1000
测定用试样溶液中5-苯基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸的峰面积：GB1886.69—2016
...(A.7)
5-苄基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样的定容体积，单位为毫升（mL）；5-苄基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的峰面积：试样的质量，单位为克（g)；
换算系数。
试样中其他相关物质的质量分数W，按式（A.8)计算：wg
式中：
...(A.8)
测定用试样溶液中除5-芋基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸、乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯外的其他二级峰的峰面积和；
其他相关物质标准溶液中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的峰面积。A
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于10%。10
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GB1886.69—2016
食品安全国家标准
食品添加剂
2016-08-31发布
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
乙酰磺胺酸
2017-01-01实施
人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸
GB1886.692016
本标准适用于以天门冬酰苯丙氨酸甲酯和乙酰磺胺酸盐为原料，经反应、离心干燥等步骤加工制得的食品添加剂天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸2化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1
化学名称
[2-羧基-β-（N-（6-甲氧羰基-2-苯基)乙基氨甲酰基)]乙胺正离子-6-甲基-4-氧代-1,2,3-噻嗪-3-负离子化物-2，2-二氧化物
2.2分子式
CH2O,N,S
2.3结构式
HOOCCH
相对分子质量
457.46（按2007年国际相对原子质量）3技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
COOCHa
理化指标
结晶性粉末
理化指标应符合表2的规定。
含量（以干基计).2/%
乙酰磺胺酸
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
干燥失重，w/%
比旋光度αm（20℃D）
钾+w/%
5-苯基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸，w/%其他相关物质，/%
铅（Pb)/（mg/kg）
感官要求
表2理化指标
GB1886.69—2016
检验方法
取适量试样置于清洁、干燥的玻璃皿中，在自然光线下，观察其色泽和状态，嗅其气味标
34.0~37.0
63.0~66.0
+14.5~+16.5
干燥温度为105℃，干燥时间为4h。检验方法
附录A中A.4
GB5009.3直接干燥法
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.7
GB5009.12
A.1警示
附录A
检验方法
GB1886.692016
试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况，操作者应采取适当的安全和防护措施A.2一般规定
本标准所使用试剂和水：在没有注明其他要求时.均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的二级水试验中所使用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3鉴别试验
试样在漠化钾分散剂下，在红外吸收光谱中呈现的最大波数与天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸的标准品相同，标准品红外光谱图见图A.1100
/本题
2 000)
波数/em！
天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸标准品红外光谱图A.4含量(以干基计)的测定
A.4.1滴定法
试剂和材料
苯甲酸：纯度≥99%。
A.4.1.1.1
A.4.1.1.2
乙醇。
N,N-二甲基甲酰胺。
A.4.1.1.3
GB 1886.69—2016
A.4.1.1.4百里酚蓝甲醇溶液：称取0.30g百里酚蓝于烧杯中，用甲醇溶解并稀释至100mL。A.4.1.1.5四丁基氢氧化铵甲醇溶液：0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液（0.1mol/L)的标定：量取10mLN，N-二甲基甲酰胺于锥形瓶中，加0.05mL百里酚蓝甲醇溶液，用0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定直至纯蓝色产生。立即加入0.2g（精确到0.001g)苯甲酸，搅拌，蓝色消失.在氮气保护下用0.1mol/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定直至纯蓝色产生。记录第二次滴定所消耗的滴定液体积（V）。四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度ci，以摩尔每升（mol/L)计，按式（A.1)计算：C
式中：
苯甲酸的质量，单位为克（g)；一换算系数；
m×1000
第二次滴定所消耗的四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL)；苯甲酸的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)，[M,（C,H.Oz）=122.12]。A.4.1.2
仪器和设备
pH计或电位滴定仪。
A.4.1.3分析步骤
称取约0.1g~0.15g试样，精确至0.001g。置于200mL烧杯中，用50mL乙醇溶解，在氮气保护下，用0.1mo1/L四丁基氢氧化铵甲醇溶液滴定，用PH计或电位滴定仪测定电位值，记录第一突跃点和第二突跃点的滴定体积（Vi，Vz）,同时量取50mL乙醇进行空白滴定，记录体积（V。）。A.4.1.4结果计算
乙酰磺胺酸的质量分数W1，按式（A.2)计算：ViXcXM2
mlx1000
式中：
试样中第一突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)；（A.2)
乙酰磺胺酸的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)，[M,（C,H,NO,S)=163.15]；试样的质量，单位为克（g）；
换算系数
天门冬酰苯丙氨酸甲酯的质量分数w2.按式（A.3)计算：w2
式中：
(V2-Vi-V.) Xci XM,
mX1000
试样中第二突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；试样中第一突跃点所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；空白所消耗四丁基氢氧化铵甲醇溶液的体积，单位为毫升（mL）；四丁基氢氧化铵甲醇溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)；(A.3)
GB1886.69—2016
一一天门冬酰苯丙氨酸甲酯的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol).[M，（C14HiN,O,）=294.31]；
试样的质量，单位为克（g）；
1000换算系数。
高效液相色谱法
试剂和材料
A.4.2.1.1乙酰磺胺酸：纯度≥99.0%。A.4.2.1.2天门冬酰苯丙氨酸甲酯：纯度≥99.0%。A.4.2.1.3磷酸钾溶液：称取5.6g磷酸钾，加入820mL水.用磷酸调节pH=4.3.加人180mL甲醇，混匀.过0.45um滤膜，脱气备用。A.4.2.1.4甲醇溶液：1+9。
A.4.2.2仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器。A.4.2.3分析步骤
A.4.2.3.1标准溶液制备
A.4.2.3.1.1乙酰磺胺酸标准储备溶液：1000mg/L，精确称取0.100g乙酰磺胺酸标准品，用甲醇溶液定容到100mL，混匀备用，
A.4.2.3.1.2天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准储备溶液：1000mg/L，精确称取0.100g天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准品，用甲醇溶液定容至100mL，混匀备用。A.4.2.3.1.3乙酰磺胺酸和天门冬酰苯内氨酸甲酯混合标准溶液：100.0mg/L，分别吸取乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准储备溶液10.0mL至100mL容量瓶，用甲醇溶液定容，混匀备用。A.4.2.3.1.4乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准系列溶液：分别移取乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯标准混合标准溶液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL至10mL容量瓶用甲醇溶液定容.混勾.即得10.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L、75.0mg/L、100.0mg/L混合标准系列溶液。A.4.2.3.2试样溶液制备
称取约0.1g试样，精确至0.001g。置于100mL烧杯中，用少量甲醇溶液溶解。移入100mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0mL上述溶液，用甲醇溶液定容至10mL，供液相色谱仪测定，本试样溶液需现配现测。A.4.2.3.3色谱参考条件
色谱柱：C1s柱，250mmX4.6mm，5um，或是同等分离效果的色谱柱。流动相：磷酸钾溶液。
检测波长：210nm。
柱温：40℃。
流速：2.0mL/min
A.4.2.3.4测定
分别吸取混合标准系列溶液和试样溶液各10uL进行液相色谱测定，根据标准工作曲线计算试样5
GB1886.692016
中乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯的含量。乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准溶液的液相色谱图见图A.2，天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸试样溶液的液相色谱图见图A.3。300 -+
i/murl
说明：
乙酰磺胺酸：
天门冬酰苯丙氨酸甲酯
乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯混合标准溶液的液相色谱图150
说明：
乙酰磺胺酸：
天门冬酰苯丙氨酸甲酯。
A.4.2.4结果计算
天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸试样溶液的液相色谱图试样中乙酰磺胺酸或天门冬酰苯丙氨酸甲酯的质量分数w3，按式（A.4)计算：ws
cxV,xf
×100%
m2x1000x1000
.（A.4)
式中：
GB1886.69—2016
从标准工作曲线得到的乙酰磺胺酸或天门冬酰苯丙氨酸甲酯溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液的稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）；
换算系数
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于5.0%，比旋光度α.（20℃.D)的测定
试剂和材料
甲酸溶液：15mol/L。
2仪器和设备
旋光仪。
分析步骤
称取6.200g试样，用甲酸溶液溶解并稀释至100mL。在30min内恒温到20℃，按GB/T613规定的方法用旋光仪进行测定，获得天门冬酰苯丙氨酸甲酯的比旋光度4结果计算
试样中天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸比旋光度αm（20℃,D).按式（A.5)计算：αm（20℃.D)=
式中：
试样中测得天门冬酰苯丙氨酸甲酯的比旋光度；0.646天门冬酰苯丙氨酸甲酯换算成天门冬酰苯丙氨酸甲酯乙酰磺胺酸的系数。A.6
钾的测定
试剂和材料
氯化钾：标准物质.使用前在105℃干燥2h。盐酸：优级纯。
氯化钠溶液：200g/L。
仪器和设备
原子吸收光谱仪。
分析步骤
标准溶液制备
..（A.5)
钾标准储备溶液：100mg/L，准确称取0.1907g氯化钾，用水溶解于1000mL容量瓶，并稀A.6.3.1.1
释至刻度，混匀。
GB1886.69—2016
A.6.3.1.2钾标准溶液：10.0mg/L，取钾标准储备溶液10.00mL至100mL容量瓶，用水稀释至刻度，混匀。
A.6.3.1.3钾标准系列溶液：分别取2.50mL、5.00mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL钾标准溶液（A.6.3.1.2）至100mL容量瓶中，加2.0mL氯化钠溶液，1.0mL盐酸，然后用水稀释至刻度。即得浓度分别为0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的钾标准系列溶液。A.6.3.2试样溶液制备
称取约3g试样，精确0.001g。置于烧杯中，用水溶解，转移至500mL容量瓶，稀释至刻度。移取10.00mL试样溶液至100mL容量瓶，加人氯化钠溶液2.0mL，盐酸1.0mL，用水稀释至刻度，混匀。A.6.3.3测定
使用配有钾空心阴极灯和空气乙炔火焰的原子吸收光谱仪，在766.5nm钾发射谱线下，调节仪器达最佳测定条件，分别测定标准系列溶液和试样溶液及空白的吸收值。用钾标准溶液的吸光值和浓度绘制标准工作曲线。
A.6.4结果计算
钟的质量分数w，：按式（A.6）计算：w
式中：
(C-C)XV,X
msX1000×1000
测定用试样溶液中钾的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；测定用空白溶液中钾的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：一一试样的定容体积，单位为毫升（mL)；—试样溶液的稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）；
1000换算系数。
..(A.6)
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不天于10%。A.75-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸和其他相关物质的测定A.7.1i
试剂和材料
A.7.1.15-芊基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸：纯度99.5%。A.7.1.2甲醇：色谱纯。
A.7.1.3磷酸钾溶液：称取5.6g磷酸钾，加入820mL水，用磷酸调节pH4.3，加人180mL甲醇，混匀，过0.45μm滤膜，脱气备用。A.7.1.4甲醇溶液：1十9。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器，8bzxZ.net
分析步骤
标准溶液制备
GB 1886.69—2016
A.7.3.1.15-芋基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液：0.25mg/mL，精确称取0.025g5-芋基-3，6-二氧-2哌嗪乙酸，加人10mL甲醇，用水稀释到100mL。A.7.3.1.25-芊基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准使用溶液：0.075mg/mL，吸取0.25mg/mL5-苄基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液15mL于50mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，混匀备用A.7.3.1.3其他相关物质标准溶液：取A.7.3.2中试样溶液1.5mL于100mL容量瓶，用甲醇溶液稀释至刻度，混匀。
A.7.3.2试样制备
称取约0.05g试样，准确至0.0001g.用甲醇溶液溶解.转移至10mL容量瓶中，稀释至刻度，现用现配。
A.7.3.3色谱参考条件
色谱柱：Cis柱，250mmX4.6mm，5μm，或是同等分离效果的色谱柱。流动相：磷酸钾溶液。
检测波长：210nm。
柱温：40℃。
流速：2.0mL/min。
A.7.3.4测定
吸取5-基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液、其他相关物质标准溶液和试样溶液各20μL进行液相色谱分析，并分别记录其他相关物质标准溶液和试样溶液中天门冬酰苯内氨酸甲酯出峰时间两倍的色谱图（约30min）。5-芋基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的液相色谱图见图A.4。300
5-芒基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的液相色谱图15
结果计算
试样中5-芋基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸的质量分数w，按式（A.7)计算：ws
式中：
A,cXVs
AXmX1000
测定用试样溶液中5-苯基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸的峰面积：GB1886.69—2016
...(A.7)
5-苄基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样的定容体积，单位为毫升（mL）；5-苄基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸标准溶液的峰面积：试样的质量，单位为克（g)；
换算系数。
试样中其他相关物质的质量分数W，按式（A.8)计算：wg
式中：
...(A.8)
测定用试样溶液中除5-芋基-3.6-二氧-2-哌嗪乙酸、乙酰磺胺酸和天门冬酰苯丙氨酸甲酯外的其他二级峰的峰面积和；
其他相关物质标准溶液中天门冬酰苯丙氨酸甲酯的峰面积。A
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于10%。10
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