GB 4789.15-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 GB4789.15-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB4789.15—2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验
2016-10-19发布
霉菌和酵母计数
2017-04-19实施
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
本标准代替GB4789.15—2010《食品安全国家标准SN/T2552.3—2010《乳及乳制品卫生微生物学检验方法本标准与GB4789.15—2010相比，主要变化如下修改了设备和材料；
修改了培养基和试剂；
一修改了检验程序和操作步骤；修改了结果与报告；
修改了附录A；
—附录B修改为第二法
GB4789.15—2016
食品微生物学检验霉菌和酵母计数》和第3部分：酵母、霉菌菌落计数》。I
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
霉菌和酵母计数
本标准规定了食品中霉菌和酵母（mouldsand yeasts）的计数方法。GB4789.15—2016wwW.bzxz.Net
本标准第一法适用于各类食品中霉菌和酵母的计数，第二法适用于番茄酱罐头、番茄汁中霉菌的计数。n
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：培养箱：28℃±1℃。
拍击式均质器及均质袋。
电子天平：感量0.1g。
无菌锥形瓶：容量500mL
无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。无菌试管：18mm×180mm。
旋涡混合器。
无菌平皿：直径90mm。
恒温水浴箱：46℃土1℃。
显微镜：10倍~100倍。
微量移液器及枪头：1.0mL。
折光仪。
郝氏计测玻片：具有标准计测室的特制玻片。盖玻片。
测微器：具标准刻度的玻片。
3培养基和试剂
生理盐水：见A.1。
马铃薯葡萄糖琼脂：见A.2。
孟加拉红琼脂：见A.3。
磷酸盐缓冲液：见A.4。
法霉菌和酵母平板计数法
第一法
4检验程序
霉菌和酵母平板计数法的检验程序见图1。5操作步骤
样品的稀释
25g（ml.）样品-225mT.无离稀泽液，动质10空列稀网
选择2个9个逆降度为样品与凌，每个亚划入1ml.，每个度做两个平行
每川中如入20mL2mL马铃蒋带苟糖院临或市拉纠.晾28 ±1T
学计数
图1霉菌和酵母平板计数法的检验程序GB4789.15—2016
5.1.1固体和半固体样品：称取25g样品.加入225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液），充分振摇，或用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品勾液。5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1：10的样品勾液。5.1.3取1ml1：10样品匀液注人含有9mL无菌稀释液的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1：100的样品匀液。5.1.4按5.1.3操作，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1支1mL无菌吸管。5.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL无菌稀释液加人2个无菌平Ⅲ作空白对照。5.1.6及时将20mL~25mL冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平血使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固5.2培养
琼脂凝固后，正置平板，置28℃士1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5d的结果。5.3菌落计数
用肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。以菌落形成单位（colony-formingunitsCFU）表示选取菌落数在10CFU～150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。霉菌蔓延生长覆2
盖整个平板的可记录为菌落蔓延。6结果与报告
6.1结果
6.1.1计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。GB4789.15—2016
6.1.2若有两个稀释度平板上菌落数均在10CFU150CFU之间，则按照GB4789.2的相应规定进行计算。
6.1.3若所有平板上菌落数均大于150CFU.则对稀释度最高的平板进行计数其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.4著所有平板上菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU～150CFU之间，其中一部分小于10CFU或大于150CFU时，则以最接近10CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.2报告
6.2.1菌落数按“四舍五人”原则修约。菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10～100之间时，采用两位有效数字报告。6.2.2菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字。
6.2.3若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。6.2.4称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告菌和/或酵母数。
第二法霉菌直接镜检计数法
7操作步骤
7.1检样的制备：取适量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为1.3447~1.3460（即浓度为7.9%~8.8%），备用。
7.2显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率90倍~125倍调节标准视野，使其直径为1.382mm。7.3涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，加盖玻片，以备观察。7.4观测：将制好之载玻片置于显微镜标准视野下进行观测。一般每一检样每人观察50个视野。同一检样应由两人进行观察
7.5结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（1.382mm）的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测微器的一格）时即记录为阳性（十），否则记录为阴性（一）。7.6报告：报告每100个视野中全部阳性视野数为霉菌的视野百分数（视野%）。3
A.1生理盐水
氯化钠
蒸馏水
附录A
培养基和试剂
GB4789.15—2016
1000mL
氯化钠加人1000mL蒸馏水中，搅拌至完全溶解，分装后，121℃灭菌15min，备用。A.2
马铃薯葡萄糖琼脂
马铃薯（去皮切块）
葡萄糖
氯霉素
蒸馏水
1000mL
将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10min~20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加人葡萄糖和琼脂，加热溶解，分装后，121℃灭菌15min，备用。A.3
孟加拉红琼脂
蛋白陈
葡萄糖
磷酸二氢钾
硫酸镁（无水）
孟加拉红
氮霉素
蒸馏水
1000mL
上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至1000mL，分装后，121℃灭菌15min，避光保存备用。
磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾
蒸馏水
GB4789.15—2016
贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2土0.1，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
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