GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 GB5009.22-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB5009.22—2016
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB5009.22—2016
本标准代替GB/T5009.22—2003《食品中黄曲霉毒素B的测定》、GB/T5009.23—2006《食品中黄曲霉毒素B.、B2、G1、G的测定》、GB5009.24一2010《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M,和B的测定》、GB/T23212—2008《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B、B2.GI、G2、MM2的测定液相色谱-荧光检测法》GB/T189792003《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》、SN0339—1995《出口茶叶中黄曲霉毒素B检验方法》、SN/T1664—2005《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素MI、Bi、B,、GlG2含量的测定》、SN/T1101一2002《进出口油籽及粮谷中黄曲霉毒素的检验方法》、SN0637一1997《出口油籽、坚果及坚果制品中黄曲霉毒素的检验方法液相色谱法》、SN/T17362006《进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法高效液相色谱法》、NY/T1286-2007《花生黄曲霉毒素B,的测定高效液相色谱法》。
本标准与GB/T5009.22—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定”；根据GB2761一2011的要求，增加了方法的适用范围：增加了同位素稀释液相色谱-串联质谱法为第一法：增加了高效液相色谱-柱前衍生法为第二法；一增加了高效液相色谱-柱后衍生法为第三法；一修改了酶联免疫法，并将方法名称更改为酶联免疫吸附筛查法；一增加了免疫亲和柱以及酶联免疫试剂盒质量判定要求与方法；一修改了测定组分为黄曲霉毒素B族和G族化合物。I
1范围
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定GB5009.22—2016
本标准规定了食品中黄曲舞毒素B、黄曲霉毒素B、黄曲毒素G、黄曲霉毒素G（以下简称AFTB、AFTB、AFTG和AFTG)的测定方法。本标准第一法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法，适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB、AFTB2、AFTG和AFTG的测定。
本标准第二法为高效液相色谱-柱前衍生法，适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTBI、AFTB2、AFTG和AFTG的测定。
本标准第三法为高效液相色谱-柱后衍生法，适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB、AFTB2、AFTG和AFTG2的测定。
本标准第四法为酶联免疫吸附筛查法，适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB,的测定本标准第五法为薄层色谱法，适用于容物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品中AFTB的测定。
第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2原理
试样中的黄曲霉毒素Bi、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素GI、黄曲霉毒素G2,用乙腊-水溶液或甲醇-水溶液提取，提取液用含1%TritonX-100（或吐温-20)的磷酸盐缓冲溶液稀释后（必要时经黄曲霉毒素固相净化柱初步净化），通过免疫亲和柱净化和富集，净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离，串联质谱检测,同位素内标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1乙（CH,CN)：色谱纯。
3.1.2甲醇(CH,OH)：色谱纯。
3.1.3乙酸铵（CH,COONH4）：色谱纯。3.1.4氯化钠(NaCI)。
3.1.5磷酸氢二钠（NazHPO,）。3.1.6磷酸二氢钾（KH,PO,)。
3.1.7氯化钾（KCI)。
3.1.8盐酸(HCI)。
3.1.9TritonX-100[CHz2O(C,H,O),J(或吐温-20,CssH11O2）。3.2试剂配制
GB5009.22—2016
乙酸铵溶液（5mmol/L）：称取0.39g乙酸铵，用水溶解后稀释至1000mL，混匀。乙晴-水溶液（84干16）：取840mL乙加入160mL水，混匀。甲醇-水溶液（70十30）：取700mL甲醇加入300mL水，混匀。乙睛-水溶液（50十50）：取50mL乙加人50mL水，混匀。3.2.4
3.2.5乙-甲醇溶液（50+50）：取50mL乙腈加人50mL甲醇，混勾。3.2.610%盐酸溶液：取1mL盐酸，用纯水稀释至10mL，混匀3.2.7磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS)：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠（或2.92g十二水磷酸氢二钠）、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解，用盐酸调节pH至7.4土0.1.加水稀释至1000mL
3.2.81%TritonX-100（或吐温-20）的PBS：取10mLTritonX-100（或吐温-20），用PBS稀释至1000mL。3.3标准品
3.3.1AFTB,标准品（C17H12O.CAS:1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.2AFTB,标准品（C1HiO6.CAS：7220-81-7）：纯度≥98%.或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.3AFTG标准品（C1H12O.CAS：1165-39-5）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.4AFTG2标准品（C1HOzCAS：7241-98-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.5同位素内标3C17-AFTB（CHi2O.CAS：157449-45-0）：纯度≥98%.浓度为0.5μg/mL。3.3.6同位素内标\Ci-AFTB,（C,Hl.OCAS：157470-98-8）：纯度≥98%.浓度为0.5μg/mL。3.3.7同位素内标13C1-AFTG（C1H1.O；，CAS：157444-07-9）：纯度≥98%.浓度为0.5μg/mL。3.3.8同位素内标13Cl-AFTG2（CiHO.CAS：157462-49-7）：纯度≥98%.浓度为0.5μg/mL。注：标准物质可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备溶液（10μg/mL）：分别称取AFTB、AFTBz、AFTG,和AFTG1mg（精确至0.01mg）。用乙睛溶解并定容至100mL。此溶液浓度约为10uμg/mL。溶液转移至试剂瓶中后，在一20℃下避光保存，备用。临用前进行浓度校准（校准方法参见附录A）。3.4.2混合标准工作液（100ng/mL）：准确移取混合标准储备溶液（1.0μg/mL）1.00mL至100mL容量瓶中，乙睛定容。此溶液密封后避光一20℃下保存，三个月有效。3.4.3混合同位素内标工作液（100ng/mL)：准确移取0.5uμg/mLC-AFTB、C17-AFTBz、C17AFTG和3Cz-AFTG，各2.00mL，用乙晴定容至10mL。在一20℃下避光保存，备用。3.4.4标准系列工作溶液：准确移取混合标准工作液（100ng/mL）10μL、50μL、100μL、200μL、500μL、800μL、1000μL至10mL容量瓶中，加人200μL100ng/mL的同位素内标工作液，用初始流动相定容至刻度.配制浓度点为0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、8.0ng/mL、2
10.0ng/mL的系列标准溶液。
4仪器和设备
勾浆机。
4.2高速粉碎机。
组织捣碎机。
超声波/涡旋振荡器或摇床。
天平：感量0.01g和0.00001g。
涡旋混合器。
高速均质器：转速6500r/min~24000r/min。离心机：转速≥6000r/min。
玻璃纤维滤纸：快速、高载量、液体中颗粒保留1.6um。固相萃取装置（带真空泵）。
氮吹仪。
液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源4.13液相色谱柱。
GB5009.22—2016
4.14免疫亲和柱：AFTB柱容量≥200ng，AFTB,柱回收率≥80%，AFTG的交叉反应率≥80%（验证方法参见附录B)。
注：对于不同批次的亲和柱在使用前需进行质量验证。4.15黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱或功能相当的固相萃取柱（以下简称净化柱）：对复杂基质样品测定时使用
4.16微孔滤头：带0.22μm微孔滤膜（所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象，方可使用）。4.17筛网：1mm~2mm试验筛孔径。4.18pH计。
5分析步骤
使用不同厂商的免疫亲和柱，在样品上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同，应该按照供应商所提供的操作说明书要求进行操作。警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施5.1样品制备
5.1.1液体样品（植物油、酱油、醋等）采样量需大于1L，对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号），将所有液体样品在一个容器中用匀浆机混匀后，其中任意的100g（mL)样品进行检测。5.1.2固体样品（谷物及其制品、坚果及籽类、婴幼儿谷类辅助食品等）采样量需大于1kg，用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于2mm孔径试验筛，混合均匀后缩分至100g，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。5.1.3半流体（腐乳、豆豉等）
采样量需大于1kg（L），对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号），用组织3
捣碎机捣碎混匀后，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。5.2样品提取
5.2.1液体样品
5.2.1.1植物油脂
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称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100uL同位素内标工作液（3.4.3）振荡混合后静置30min。加人20mL乙腈-水溶液（84十16）或甲醇-水溶液（70+30），涡旋混勾，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min，取上清液备用5.2.1.2酱油、醋
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入125uL同位素内标工作液振荡混合后静置30min。用乙腈或甲醇定容至25mL（精确至0.1mL），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。
5.2.2固体样品
5.2.2.1一般固体样品
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100μL同位素内标工作液振荡混合后静置30min。加入20.0mL乙睛-水溶液（84+16）或甲醇-水溶液（70+30），涡旋混勾，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。
5.2.2.2婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100uL同位素内标工作液振荡混合后静置30min。加入20.0mL乙睛-水溶液（50十50）或甲醇-水溶液（70十30），涡旋混勺，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用
5.2.3半流体样品
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人100μL同位素内标工作液振荡混合后静置30min。加人20.0mL乙腈-水溶液（84+16）或甲醇-水溶液（70十30），置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min）在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。
5.3样品净化
5.3.1免疫亲和柱净化
5.3.1.1上样液的准备
准确移取4mL上清液，加人46mL1%TritionX-100（或吐温-20）的PBS（使用甲醇-水溶液提取时可减半加人），混勾。
5.3.1.2免疫亲和柱的准备
将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。4
5.3.1.3试样的净化
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待免疫亲和柱内原有液体流尽后，将上述样液移至50mL注射器筒中，调节下滴速度，控制样液以1mL/min～3mL/min的速度稳定下滴。待样液滴完后，往注射器筒内加人2×10mL水，以稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后，用真空泵抽干亲和柱。脱离真空系统，在亲和柱下部放置10mL刻度试管，取下50mL的注射器筒，加人2×1mL甲醇洗脱亲和柱，控制1mL/min～3mL/min的速度下滴，再用真空泵抽干亲和柱，收集全部洗脱液至试管中。在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，加人1.0mL初始流动相，涡旋30s溶解残留物.0.22m滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。5.3.2黄曲霉毒素固相净化柱和免疫亲和柱同时使用（对花椒、胡椒和辣椒等复杂基质）5.3.2.1净化柱净化
移取适量上清液，按净化柱操作说明进行净化，收集全部净化液。5.3.2.2免疫亲和柱净化
用刻度移液管准确吸取上述净化液4mL加人46mL1%TritionX-100（或吐温-20)的PBS[使用甲醇-水溶液提取时，加人23mL1%TritionX-100（或吐温-20)的PBS].混匀。按5.3.1.2和5.3.1.3处理。注：全自动（在线）或半自动（离线）的固相萃取仪器可优化操作参数后使用。液相色谱参考条件
液相色谱参考条件列出如下：
流动相：A相：5mmol/L乙酸铵溶液；B相：乙睛-甲醇溶液（50+50）；a)
b）梯度洗脱：32%B（0min~0.5min）.45%B(3min~4min).100%B（4.2min~4.8min）32%B(5.0min~7.0min);
色谱柱：C8柱（柱长100mm，柱内径2.1mm；填料粒径1.7um），或相当者；c
流速：0.3mL/min；
柱温：40℃；
进样体积：10μL。
5.5质谱参考条件
质谱参考条件列出如下：
检测方式：多离子反应监测（MRM）；a
离子源控制条件：参见表1；
离子选择参数：参见表2；
子离子扫描图：参见图C.1～图C.8；d)
液相色谱-质谱图：见图C.9。
表1离子源控制条件
电离方式
毛细管电压/kV
锥孔电压/V
射频透镜1电压/V
射频透镜2电压/V
化合物名称
13C17-AFTB
BCit-AFTB
1Ci-AFTG,
1Ci2-AFTG
定性测定
离子源温度/℃
锥孔反吹气流量/（L/h）
脱溶剂气温度/℃
脱溶剂气流量/(L/h）
电子倍增电压/V
母离子
(m/z）
定量离子
表1（续）
离子选择参数表
碰撞能量
定性离子
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碰撞能量
离子化方式
试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在士2.5%之内。
每种化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括二个母离子和两个子离子，而且同一检测批次对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围。
定性时相对离子丰度的最大充许偏差表3
相对离子丰度/%
允许相对偏差/%
标准曲线的制作
在5.4、5.5的液相色谱串联质谱仪分析条件下，将标准系列溶液由低到高浓度进样检测，以AFTB、AFTB2、AFTG,和AFTG2色谱峰与各对应内标色谱峰的峰面积比值-浓度作图，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数应大于0.99。试样溶液的测定
取5.3处理得到的待测溶液进样，内标法计算待测液中目标物质的质量浓度，按第6章计算样品中待测物的含量。待测样液中的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当减少取样量重新测定。
9空白试验
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不称取试样，按5.2和5.3的步骤做空白实验。应确认不含有干扰待测组分的物质。6分析结果的表述
试样中AFTBr、AFTB2、AFTG,和AFTG的残留量按式(1)计算：X=eXViXVX1 000
V,XmX1 000
式中：
（1）
—一试样中AFTB、AFTBz、AFTG或AFTG的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；一进样溶液中AFTB、AFTBz、AFTG,或AFTG2按照内标法在标准曲线中对应的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样提取液体积（植物油脂、固体、半固体按加入的提取液体积；酱油、醋按定容总体积）。单位为毫升(mL)；
一一样品经净化洗脱后的最终定容体积，单位为毫升（mL）；1000—换算系数；
V用于净化分取的样品体积，单位为毫升（mL)；m
试样的称样量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8其他
当称取样品5g时，AFTB的检出限为：0.03μg/kg，AFTBz的检出限为0.03μg/kg，AFTG的检出限为0.03ug/kg，AFTGz的检出限为0.03μg/kg；AFTB的定量限为0.1ug/kg，AFTBz的定量限为0.1μg/kg，AFTG的定量限为0.1μg/kg，AFTGz的定量限为0.1ug/kg。第二法高效液相色谱-柱前衍生法9原理
试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取，提取液经黄曲霉毒素固相净化柱净化去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质，净化液用三氟乙酸柱前衍生，液相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量。试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水7
10.1试剂
甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙睛（CH;CN）：色谱纯。
正己烷CHu）：色谱纯。
三氟乙酸（CF,COOH)。
10.2试剂配制
乙腈-水溶液（84十16）：取840mL乙加人160mL水。甲醇-水溶液（70十30）：取700mL甲醇加人300mL水。乙睛-水溶液（50+50）：取500mL乙睛加入500mL水。乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500mL乙腈加人500mL甲醇。10.3标准品
GB 5009.22—2016
10.3.1AFTB标准品（C1H2O，CAS号：1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.3.2AFTB2标准品（Cl.HOg，CAS号：7220-81-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.3.3AFTG标准品（CIHi2O,，CAS号：1165-39-5）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.3.4AFTG2标准品（CHuOCAS号：7241-98-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
注：标准物质可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。10.4标准溶液配制
10.4.1标准储备溶液（10μg/mL)：分别称取AFTB、AFTBz、AFTG和AFTG21mg（精确至0.01mg），用乙溶解并定容至100mL。此溶液浓度约为10μg/mL。溶液转移至试剂瓶中后，在一20℃下避光保存，备用。临用前进行浓度校准（校准方法参见附录A）。10.4.2混合标准工作液（AFTB和AFTGi：100ng/mL，AFTB,和AFTGz：30ng/mL）：准确移取AFTB和AFTG标准储备溶液各1mL，AFTBz和AFTGz标准储备溶液各300μL至100mL容量瓶中，乙睛定容。密封后避光一20℃下保存，三个月内有效10.4.3标准系列工作溶液：分别准确移取混合标准工作液10uL、50μL、200L、500uL、1000uL、2000uL、4000μL至10mL容量瓶中，用初始流动相定容至刻度（含AFTB和AFTG浓度为0.1ng/mL.0.5ng/mL、2.0ng/mL.5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL,AFTB,和AFTGz浓度为0.03ng/mL.0.15ng/mL0.6ng/mL、1.5ng/mL、3.0ng/mL、6.0ng/mL12ng/mL的系列标准溶液）。
仪器和设备
11.1勾浆机。
11.2高速粉碎机。
组织捣碎机。
11.4超声波/涡旋振荡器或摇床。8
天平：感量0.01g和0.00001g。
涡旋混合器
高速均质器：转速6500r/min~24000r/min离心机：转速≥6000r/min。
玻璃纤维滤纸：快速、高载量、液体中颗粒保留1.6um11.9
氮吹仪。
液相色谱仪：配荧光检测器。
色谱分离柱。
黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱（以下简称净化柱)，或相当者，GB5009.22—2016
一次性微孔滤头：带0.22μum微孔滤膜（所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象，方可使用）。
筛网：1mm~2mm试验筛孔径
恒温箱。
pH计。
分析步骤
12.1样品制备
液体样品（植物油、酱油、醋等）12.1.1
采样量需大于1L，对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号），将所有液体样品在一个容器中用勾浆机混勾后，其中任意的100g（mL)样品进行检测。12.1.2固体样品（谷物及其制品、坚果及籽类、婴幼儿谷类辅助食品等）采样量需大于1kg，用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于2mm孔径试验筛，混合均匀后缩分至100g，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。12.1.3半流体（腐乳、豆豉等）采样量需大于1kg（L），对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号）.用组织捣碎机捣碎混匀后，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。12.2样品提取免费标准bzxz.net
12.2.1液体样品
12.2.1.1植物油脂
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙睛-水溶液（84十16）或甲醇-水溶液（70+30），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min，取上清液备用。12.2.1.2酱油、醋
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，用乙腈或甲醇定容至25mL（精确至0.1mL），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。9
12.2.2固体样品
12.2.2.1一般固体样品
GB5009.22—2016
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人20.0mL乙-水溶液（84十16)或甲醇-水溶液（70+30），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。12.2.2.2婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人20.0mL乙-水溶液（50十50）或甲醇-水溶液（70+30），涡旋混勾，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。12.2.3半流体样品
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20.0mL乙晴-水溶液（84十16）或甲醇-水溶液（70十30），置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用。12.3样品黄曲霉毒素固相净化柱净化移取适量上清液，按净化柱操作说明进行净化，收集全部净化液。12.4衍生
用移液管准确吸取4.0mL净化液于10mL离心管后在50℃下用氮气缓缓地吹至近干，分别加人200uL正已烷和100μL三氟乙酸，涡旋30s，在40℃土1℃的恒温箱中衍生15min，衍生结束后，在50℃下用氮气缓缓地将衍生液吹至近干，用初始流动相定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，过0.22μm滤膜，收集滤液于进样瓶中以备进样。12.5色谱参考条件
色谱参考条件列出如下：
流动相：A相：水.B相：乙腈-甲醇溶液（50十50）：b）梯度洗脱：24%B（0min~6min).35%B（8.0min~10.0min)100%B(10.2min~11.2min).24%B(11.5min~13.0min);色谱柱：Cls柱（柱长150mm或250mm，柱内径4.6mm，填料粒径5.0um），或相当者；c)
d）流速：1.0mL/min；
柱温：40℃：
进样体积：50μL；
检测波长：激发波长360nm；发射波长440nm；g）
液相色谱图：参见图D.1。
12.6样品测定
12.6.1标准曲线的制作
系列标准工作溶液由低到高浓度依次进样检测，以峰面积为纵坐标-浓度为横坐标作图，得到标准曲线回归方程。
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