GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 GB5009.111-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB5009.111—2016
食品安全国家标准
食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
及其乙酰化衍生物的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB5009.111—2016
本标准代替GB/T5009.111—2003《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》、GB/T235032009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、SN/T1571-2005《进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》。本标准与GB/T5009.111一2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定”；
增加了方法的适用范围：
一增加了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰化衍生物的测定；增加了同位素稀释液相色谱-串联质谱法；一增加了固相萃取柱净化的前处理方式；增加了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法增加了商业化免疫亲和柱评价技术参数要求I
1范围
食品安全国家标准
食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
及其乙酰化衍生物的测定www.bzxz.net
本标准规定了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定方法GB5009.111—2016
第一法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法，适用于谷物及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法，适用于谷物及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定
第三法为薄层色谱测定法，第四法为酶联免疫吸附筛查法，适用于谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。
第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2原理
试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和乙睛的混合溶液提取，提取上清液经固相萃取柱或免疫亲和柱净化，浓缩、定容和过滤后，超高压液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
3.1.1乙睛（CH.CN)：色谱纯。
3.1.2甲醇(CH.OH)：色谱纯。
3.1.3正已烷（CH14）。
3.1.4氨水(NH·HO)。
3.1.5甲酸(HCOOH)。
3.1.6氮气（N2)：纯度≥99.9%。3.2试剂配制
3.2.1乙睛-水溶液（84+16）：量取160mL水加人到840mL乙睛中，混匀3.2.2乙睛饱和的正已烧溶液：量取200mL正已烷于250mL分液漏斗中，加入少量乙睛，剧烈振摇数分钟，静置分层，弃去下层乙睛层即得1
3.2.3甲醇-水溶液（5十95）：量取5mL甲醇加入到95mL水中.混匀。GB5009.111—2016
3.2.40.01%氨水溶液：取100μL氨水加人到1000mL水中，混匀（仅供离子源模式为ESI-时使用）。3.2.50.1%甲酸溶液：取1mL甲酸加人到1000mL水中，混匀（仅供离子源模式为ESI+时使用）。3.3标准品
3.3.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON.C1H2.O。.CAS号：51481-10-8）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.23-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-ADON.C1H22O，CAS号：50722-38-8）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.315-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-ADON，C1.H22O，CAS号：88337-96-6）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.4C15-脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液（13C-DON，13C1sH20O）：25μg/mL，纯度≥99%3.3.513Ciz-3-乙酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液（1\C-3-ADON，13C1Hz2O）：25μg/mL，纯度≥99%。
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备溶液（100μg/mL）：分别称取DON、3-ADON和15-ADON1mg（准确至0.01mg），分别用乙溶解并定容至10mL。将溶液转移至试剂瓶中，在一20℃下密封保存，有效期1年。3.4.2混合标准工作溶液（10μg/mL）：准确吸取100μg/mLDON.3-ADON和15-ADON标准储备液各1.0mL于同一10mL容量瓶中，加乙睛定容至刻度。在一20℃下密封保存，有效期半年。3.4.3混合同位素内标工作液（1μg/mL）：准确吸取13Cis-DON和13C1z-3-ADON同位素内标（25ug/mL）各1mL于同一25mL容量瓶中，加乙睛定容至刻度。在－20℃下密封保存，有效期半年。
3.4.4标准系列工作溶液：准确移取适量混合标准工作溶液和混合同位素内标工作液，用初始流动相配制成10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL.320ng/mL、640ng/mL的混合标准系列，其中同位素内标浓度为100ng/mL。标准系列溶液于4℃保存，有效期7d。4仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源。4.2日
电子天平：感量0.01g和0.00001g。4.3
高速粉碎机：转速10000r/min。匀浆机。
筛网：0.5mm~1mm孔径。
超声波/涡旋振荡器或摇床。
氮吹仪。
高速离心机：转速不低于12000r/min。移液器：量程10uL～100μL和100μL1000μL。4.9
4.10固相萃取装置。
4.11通用型固相萃取柱：兼具亲水基团（吡略咯烷酮基团）和疏水基团（二乙烯基苯）吸附剂填料的固相萃取小柱，200mg，6mL，或相当者4.12DONs专用型固相净化柱，或相当者。4.13脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱：柱容量≥1000ng（柱容量和柱回收率验证方法参见A2）。2
4.14水相微孔滤膜：0.22um。
5分析步骤
5.1试样制备
GB5009.111—2016
5.1.1谷物及其制品：取至少1kg样品，用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于0.5mm1mm孔径试验筛，混合均匀后缩分至100g，储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。5.1.2酒类：取散装酒至少1L，对于袋装、瓶装等包装样品至少取3个包装（同一批次或号），将所有液体试样在一个容器中用均质机混匀后，缩分至100g（mL）储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。含二氧化碳的酒类样品使用前应先置于4℃冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气后方可使用5.1.3酱油、醋、酱及酱制品：取至少1L样品，对于袋装、瓶装等包装样品至少取3个包装（同一批次或号），将所有液体样品在一个容器中用匀浆机混匀后，缩分至100g（mL)储存于样品瓶中，密封保存，供检测用。
5.2试样提取
5.2.1谷物及其制品：称取2g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人400μL混合同位素内标工作液振荡混合后静置30min。加人20.0mL乙睛-水溶液（84十16），置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。10000r/min离心5min，收集上清液A于干净的容器中备用。5.2.2酒类：称取5g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中.加入200μL混合同位素内标工作液振荡混合后静置30min，用乙睛定容至10mL，混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。10000r/min离心5min，收集上清液B于干净的容器中备用。5.2.3酱油、醋、酱及酱制品：称取2g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人400uL混合同位素内标工作液振荡混合后静置30min。加人20.0mL乙睛-水溶液（84十16），置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。10000r/min离心5min，收集上清液C于干净的容器中备用5.3试样净化
注：下述试样的净化方法，可根据实际情况，选择其中一种方法即可。5.3.1通用型固相萃取柱净化
取5mL上清液A或上清液B或上清液C置于50mL离心管中，加入10mL乙睛饱和正已烷溶液，涡旋混合2min，5000rmin离心2min，弃去正已烷层后，于40℃~50℃下氮气吹干，加人4mL水充分溶解残渣，待净化
将固相萃取柱连接到固相萃取装置.先后用3mL甲醇和3mL水活化平衡。将4mL上述水复溶液上柱，控制流速为每秒1滴～2滴。用3mL水、1mL5%甲醇-水溶液依次淋洗柱子后彻底抽干。用4mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液后在40℃～50℃下氮气吹干。加人1.0mL初始流动相溶解残留物，涡旋混匀10s，用0.22um微孔滤膜过滤于进样瓶中.待进样。5.3.2DONs专用型固相净化柱净化取8mL上清液A或上清液B或上清液C至DONs专用型固相净化柱的玻璃管内.将净化柱的填料管插人玻璃管中并缓慢推动填料管至净化液析出，移取5mL净化液于40℃～50℃下氮气吹干。加人1.0mL初始流动相溶解残留物，涡旋混匀10s，用0.22um微孔滤膜过滤于进样瓶中，待进样注：使用不同厂商的DONs专用型固相净化柱，在上样、净化等操作方面可能略有不同，可按照说明书要求进行操作。
5.3.3免疫亲和柱净化
事先将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。GB5009.111—2016
准确移取5mL上清液A或上清液B或上清液C，于40℃~50℃下氮气吹干，加人2mL水充分溶解残渣，待免疫亲和柱内原有液体流尽后，将上述样液移至玻璃注射器简中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节下滴速度，控制样液以每秒1滴的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱中。用5mLPBS缓冲盐溶液和5mL水先后淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1滴～2滴，直至空气进入亲和注中，弃去全部流出液，抽干小柱。准确加人2mL甲醇洗脱亲和柱，控制每秒1滴的下滴速度，收集全部洗脱液至试管中，在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，加入1.0mL初始流动相，涡旋30s溶解残留物，0.22um滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。注：使用不同厂商的免疫亲和柱，在样品上样、淋洗和洗脱的操作方面可能略有不同，应该按照说明书要求进行操作。
5.4液相色谱-串联质谱参考条件（可根据实际情况参考其中一种方法即可）5.4.1离子源模式：ESI+
液相色谱-质谱参考条件列出如下：a）液相色谱柱：Cls柱（柱长100mm，柱内径2.1mm；填料粒径1.7um），或相当者；流动相：A相：0.1%甲酸溶液；B相：0.1%甲酸-乙睛；b)
梯度洗脱:2%B（0min~0.8min),24%B（3.0min~4.0min),100%B（6.0min~6.9min).2%B(6.9min~7.0min);
流速：0.35mL/min；
柱温：40℃；
进样体积：10μL；
毛细管电压：3.5kV；锥孔电压：30V；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：900L/h；脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱条件参考表1。h)
表1脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱参考条件（ESI*）化合物
3-ADON
15-ADON
\C-DON
13C-3-ADON
母离子
(m/z）
锥孔电压
定量离子
碰撞电压
定性离子
碰撞电压
注：3-ADON和15-ADON为同分异构体，15-ADON可选用\3C-3-ADON作为同位素内标进行相应的定量计算。离子源模式：ESI
液相色谱-质谱参考条件列出如下：a）液相色谱柱：Cls柱（柱长100mm.柱内径2.1mm；填料粒径1.7μm），或相当者；b)
流动相：A相：0.01%氨水溶液；B相：乙晴；4
GB5009.111—2016
梯度洗脱：2%B（0min~0.8min).24%B（3.0min~4.0min).100%B（6.0min~6.9min），2%B(6.9min~7.0min);
流速：0.35mL/min；
柱温：40℃；
进样体积：10uL；
毛细管电压：2.5kV：锥孔电压：45V；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：900L/h；脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱条件参考表2。表2脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱参考条件（ESI-）化合物
3-ADON
15-ADON
\C-DON
13C-3-ADON
母离子
锥孔电压
定量离子
碰撞电压
定性离子
碰撞电压
注：3-ADON和15-ADON为同分异构体，15-ADON可选用C-3-ADON作为同位素内标进行相应的定量计算各化合物的离子扫描图、多反应监测（MRM)离子通道图参见图B.1图B.8。5.5定性测定
试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在土2.5%之内。
每种化合物的质谱定性离子应出现，至少应包括二个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围。
表3定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
标准曲线的制作
20%~50%
10%~20%
≤10%
在5.4液相色谱串联质谱仪分析条件下，将标准系列溶液由低到高浓度进样检测，以DON、3-ADON和15-ADON色谱峰与各对应内标色谱峰的峰面积比值-浓度作图，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数应大于0.99。
5.7试样溶液的测定
取5.2、5.3处理得到的待测溶液进样，内标法计算待测液中目标物质的质量浓度，按6计算样品中待测物的含量。试液中待测物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当减少取样量后重新测定。
5.8空白试验
GB5009.111—2016
除不加试样外，按5.3和5.4的步骤做空白实验。应确认不含有干扰待测组分的物质。分析结果的表述
试样中DON、3-ADON或15-ADON的含量按式（1)计算：X=p×V×V,×1 000
V, Xm X1 000
式中：
试样中DON、3-ADON或15-ADON的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；.（1)
试样中DON、3-ADON或15-ADON按照内标法在标准曲线中对应的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
试样提取液体积，单位为毫升（mL）；试样最终定容体积，单位为毫升（mL）)；换算系数：
用于净化的分取体积，单位为毫升（mL）；试样的称样量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的23%。8其他
当称取谷物及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品试样2g时，方法中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出限为10μg/kg，定量限为20ug/kg，当称取酒类试样5g时，方法中的脱氧雪腐镶刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出限为5ug/kg，定量限为10ug/kg。第二法
免疫亲和层析净化高效液相色谱法9原理
试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水提取，经免疫亲和柱净化后，用高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水6
10.1试剂
甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙腈（CH,CN)：色谱纯。
聚乙二醇相对分子质量为8000，HO（CHCH.O)，H氯化钠（NaCI）。
磷酸氢二钠（NazHPO.）。
磷酸二氢钾（KH,PO,）。
氯化钾（KCD)。
盐酸（HCI）。
10.2试剂配制
GB5009.111—2016
磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解，用盐酸调节pH至7.0.用水定容至1000mL。2甲醇-水溶液（20十80）：量取200mL甲醇加入到800mL水中，混匀。10.2.2
乙睛-水溶液（10+90）：量取100mL乙睛加入到900mL水中，混匀。10.3标准品
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（C1,H2O，CAS号：51481-10-8）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.4标准溶液配制
10.4.1标准储备溶液（100μg/mL）：称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇1mg（准确至0.01mg），用乙溶解并定容至10mL。将溶液转移至试剂瓶中，在一20℃下密封保存，有效期1年。10.4.2标准系列工作溶液：准确移取适量脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液用初始流动相稀释，配制成100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL5000ng/mL的标准系列工作液，4℃保存，有效期7d。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器电子天平：感量0.01g和0.00001g。高速粉碎机：转速10000r/min。筛网：1mm~2mm孔径。
超声波/涡旋振荡器或摇床。
氮吹仪。
高速离心机：转速≥12000r/min移液器：量程10μL～100μL和100μL～1000μL。脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱：柱容量≥1000ng。（柱容量和柱回收率验证方法参见A.2)。注：对于不同批次的亲和柱在使用前需质量验证。11.10
玻璃纤维滤纸：直径11cm.孔径1.5μm水相微孔滤膜：0.45μm。
聚丙烯刻度离心管：具塞，50mL玻璃注射器：10mL。
空气压力泵。
分析步骤
GB5009.111—2016
使用不同厂商的免疫亲和柱，在试样上样、淋洗和洗脱的操作方面可能略有不同，应该按照说明丰要求进行操作。
12.1试样制备
同5.1。
12.2试样提取
12.2.1谷物及其制品：称取25g（准确到0.1g）磨碎的试样于100mL具塞三角瓶中加人5g聚乙二醇，加水100mL，混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清（或6000r/min下离心10min），收集滤液A于干净的容器中。10000r/min离心5min。12.2.2酒类：取酒样20g（准确到0.1g），加入1g聚乙二醇，用水定容至25.0mL，混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清（或6000r/min下离心10min），收集滤液B于干净的容器中。12.2.3酱油、醋、酱及酱制品：称取样品25g（准确到0.1g），加入5g聚乙二醇，用水定容至100mL，混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中超声或振荡20min。以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清（或6000r/min下离心10min），收集滤液C于干净的容器中。12.3净化
事先将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。待免疫亲和柱内原有液体流尽后，将上述样液移至玻璃注射器筒中，准确移取上述滤液A或滤液B或滤液C2.0mL，注人玻璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节下滴速度，控制样液以每秒1滴的流速通过免疫亲和柱，直至空气进人亲和柱中。用5mLPBS缓冲盐溶液和5mL水先后淋洗免疫亲和柱，流速约为每秒1滴～2滴，直至空气进人亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。12.4洗脱
准确加入2mL甲醇洗脱亲和柱·控制每秒1滴的下滴速度，收集全部洗脱液至试管中，在50C下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，加入1.0mL初始流动相.涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜过滤收集滤液于进样瓶中以备进样。12.5液相色谱参考条件
液相色谱参考条件列出如下：
液相色谱柱：Cis柱（柱长150mm，柱内径4.6mm；填料粒径5um）.或相当者：a）
流动相：甲醇十水（20十80）；b)
流速；0.8mL/min；
柱温：35℃；
进样量：50μL；
检测波长：218nm。
12.6定量测定
标准曲线的制作
GB 5009.111—2016
以脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液浓度为横坐标，以峰面积积分值纵坐标.将系列标准溶液由低到高浓度依次进样检测，得到标准曲线回归方程。12.6.2试样溶液的测定
试样液中待测物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当减少称样量，重新按12.2、12.3和12.4进行处理后再进样分析。12.7空白试验
除不称取试样外，按12.2、12.3和12.4做空白试验。确认不含有干扰待测组分的物质3分析结果的表述
试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量按式（2)计算：X=(pi-p)×vx/×1000
mx1000
式中：
试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为微克每千克（ug/kg）；试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的质量浓度，单位纳克每毫升（ng/mL）；空白试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的质量浓度，单位纳克每毫升（ng/mL）；样品洗脱液的最终定容体积，单位毫升（mL）；样液稀释因子；
换算系数；
试样的称样量，单位克（g）。
计算结果保留三位有效数字。
14精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的23%。15其他
当称取谷物及其制品、酱油、醋、酱及酱制品试样25g时，脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为100ug/kg，定量限为200μg/kg；当称取酒类试样20g时，脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为50pg/kg定量限为100μg/kg
第三法薄层色谱测定法
16原理
试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后，加热薄层展开后，加热薄GB 5009.111—2016
层板。由于在制备薄层板时加人了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光，与标准比较。
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯17.1试剂
三氯甲烷（CHCI）。
无水乙醇（CH，CH,OH)。
甲醇(CH,OH)。
石油醚（C,Hzu+2）。
乙酸乙酯（CH,COOCH,CH）。
乙腈(CH,CN)。
丙酮（CH,COCH）。
异丙醇CH,CH,OHCH）。
乙醚（CH,CHOCH,CH）。
氯化铝（AICl·6H,O）：化学纯中性氧化铝：经300℃活化4h，置干燥器中备用。活性炭：20g活性炭，用3mol/L盐酸溶液浸泡过夜，抽滤后，用热蒸馏水洗至无氯离子，在120℃烘干备用。
硅胶G：薄层层析用。
标准品
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（C15H2.O，CAS号：51481-10-8）：纯度≥99%。17.3标准溶液配制
标准储备溶液（25μg/mL）：称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇5.0mg（准确到0.1mg）.加乙酸乙酯-甲醇(19+1)溶解，转人10mL容量瓶中，并定容至10mL吸取此溶液0.5mL，用乙酸乙酯-甲醇（19+1）稀释至10mL。
仪器和设备
小型粉碎机。
电动振荡器。
玻璃蒸发皿：75mL。
层析柱：内径2cm，长10cm，不具活塞。具塞浓缩瓶：10mL，底部具0.2mL刻度尾管。玻璃板：5cmX20cm。
薄层涂布器：0.3mm。
展开槽：内长26cm，宽6cm，高4cm。紫外光灯：365nm。
微量注射器：10ul，50μL。
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