GB 5009.149-2016
基本信息
标准号： GB 5009.149-2016
中文名称：食品安全国家标准 食品中栀子黄的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
GB 5009.149-2016 食品安全国家标准 食品中栀子黄的测定
GB5009.149-2016
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB5009.149—2016
食品安全国家标准
食品中子黄的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
本标准代替GB5009.149—2003《食品中子黄的测定》。本标准与GB5009.149—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中子黄的测定”；GB 5009.149—2016
原标准第一法高效液相色谱法测定子苷修改为高效液相色谱法测定藏花素和藏花酸；改进了样品前处理分析方法；
扩大了方法适用范围；
薄层色谱法。
—一删除了第二法
1范围
食品安全国家标准
食品中子黄的测定
本标准规定了食品中栀子黄的代表性成分：藏花素、藏花酸的测定方法GB5009.149—2016
本标准适用于冰淇淋、蜜钱、腌菜、干香仁、巧克力、糕点、熟肉、酱油、果汁、配制酒、果冻、薯片中藏花素和藏花酸的测定。
2原理
试样用甲醇超声提取后，通过Cl反相色谱柱分离，用高效液相色谱/可见光检测器于440nm下检测子黄的主要显色成分藏花素和藏花酸，以保留时间定性，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1甲醇(CH.OH)：色谱纯。
3.1.2乙（CHCN）：色谱纯：
3.1.3冰乙酸（CH,COOH)。
3.1.4乙酸铵（CH,COONH）。
3.2试剂配制
3.2.1乙酸-乙酸铵溶液（pH=4）：准确称取0.77g乙酸铵置于1L容量瓶内，加900mL水溶解，用冰乙酸调节pH=4.0.加水定容至1L，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。3.3标准品
3.3.1藏花素标准品（C4H64O24，CAS号：42553-65-1)，纯度≥90.0%。3.3.2藏花酸标准品（C2H24O4，CAS号：27876-94-4），纯度≥90.0%。3.4标准溶液配制
3.4.1藏花素标准储备液：准确称取5.00mg（精确至0.01mg）藏花素标准品，用甲醇溶解，转移到10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花素浓度为0.5mg/mL，于4℃保存，3.4.2藏花酸标准储备液：准确称取1.00mg（精确至0.01mg）藏花酸标准品，用甲醇溶解，转移到10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花酸浓度为0.1mg/mL，于4℃保存。3.4.3藏花素、藏花酸混合标准曲线工作液：分别均吸取藏花素标准储备液、藏花酸标准储备液0.05mL0.1mL.0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花素系列标准工作液浓度分1
GB5009.149—2016
别均为2.5g/mL、5ug/mL、10μg/mL、25μg/mL、50ug/mL.藏花酸系列标准工作液浓度分别均为0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL.5μg/mL10μg/mL，于4℃保存4仪器和设备
高效液相色谱仪，配置可见检测器分析天平：感量为0.01mg和0.01g。4.2
离心机：转速≥5000r/min。
酸度计。
超声波清洗仪。
食品粉碎机。
有机相型微孔滤膜：孔径0.45um5
分析步骤
试样制备及保存
5.1.1液体样品
将饮料、酒类、酱油等样品摇匀分装，密闭常温或冷藏保存。5.1.2半固态样品
对果冻等样品取可食部分匀浆后，搅拌均匀，分装，密闭冷藏或冷冻保存。5.1.3固体样品
饼干、糕点、熟肉制品、可可制品等低含水量样品，经高速粉碎机粉碎、分装，于室温下避光密闭保存。
5.2试样处理
5.2.1液体样品
称取2g（精确至0.01g)均匀试样（若试样中含二氧化碳应先超声除去)置于烧杯中，用适量甲醇溶解并转移至25ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。吸取1mL溶液过0.45μm有机滤膜，待测。5.2.2半固体试样及固体试样
称取2g（精确至0.01g)均勾试样于50mL离心管中，准确量取25mL甲醇溶液加人其中，超声20min后涡旋2min，4000r/min离心10min.吸取1mL上清液过0.45um有机滤膜.待测5.2.3酱油
称取1g（精确至0.01g）均匀试样置于烧杯中用适量甲醇溶解并转移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。吸取1mL溶液过0.45um有机滤膜，待测。注：5.2过程应在避免强光照射的环境下进行5.3仪器参考条件
仪器参考条件列出如下：
GB5009.149—2016
色谱柱：Cls色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5pm，或同等性能的色谱柱；流动相：A：乙酸-乙酸铵缓冲溶液，B：乙睛，梯度洗脱见表1；进样量：10μL；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm。
表1流动相及梯度洗脱条件
标准曲线的制作
mL/min
流动相A
流动相B
将混合标准工作液分别注人高效液相色谱仪中，测定藏花素和藏花酸相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（标准图谱见图A.1）。5试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，得到藏花素和藏花酸的峰面积根据标准曲线得到待测液中藏花素和藏花酸的浓度。
分析结果的表述
试样中藏花素和藏花酸的含量按式（1)计算：pxVx1000
m×1000X1000
式中：
试样中藏花素或藏花酸的含量，单位为克每千克（g/kg)；.....(1)
由标准曲线求得试样溶液中藏花素或藏花酸的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)；样品溶液定容体积，单位为（mL）；换算系数；
最终样液代表的试样质量，单位为克（g)；标准品的纯度折算系数。
计算结果保留两位有效数字。
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在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。3
GB5009.149—2016
方法检出限（LOD）：酱油样品当称样量为1.0g时，藏花素为50mg/kg，藏花酸为10.0mg/kg，其他样品取样量为2.0g时.藏花素为12.5mg/kg，藏花酸为2.5mg/kg。方法定量限（LOQ）：酱油样品当称样量为1.0g时，藏花素为250mg/kg，藏花酸为50.0mg/kg，其他样品取样量为2.0g时，藏花素为62.5mg/kg，藏花酸为12.5mg/kg。4
附录A
藏花素和藏花酸的标准色谱图
藏花素和藏花酸标准色谱图见图A.1。薇
GB5009.149—2016
2. 5 3. 0 3. 5 1. 0 4. 5 5. 0 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7. 5 8. 0 8. 5 0. 0 0. 5 10 0 10. 5 11. 0 11.5 12. 0 12. 5 13. 0 13. 5 11.0 14 5/mim
藏花素和藏花酸的标准色谱图（藏花素浓度50μg/mL，藏花酸浓度10μg/mL）图A.1
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GB5009.149—2016
食品安全国家标准
食品中子黄的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
本标准代替GB5009.149—2003《食品中子黄的测定》。本标准与GB5009.149—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中子黄的测定”；GB 5009.149—2016
原标准第一法高效液相色谱法测定子苷修改为高效液相色谱法测定藏花素和藏花酸；改进了样品前处理分析方法；
扩大了方法适用范围；
薄层色谱法。
—一删除了第二法
1范围
食品安全国家标准
食品中子黄的测定
本标准规定了食品中栀子黄的代表性成分：藏花素、藏花酸的测定方法GB5009.149—2016
本标准适用于冰淇淋、蜜钱、腌菜、干香仁、巧克力、糕点、熟肉、酱油、果汁、配制酒、果冻、薯片中藏花素和藏花酸的测定。
2原理
试样用甲醇超声提取后，通过Cl反相色谱柱分离，用高效液相色谱/可见光检测器于440nm下检测子黄的主要显色成分藏花素和藏花酸，以保留时间定性，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1甲醇(CH.OH)：色谱纯。
3.1.2乙（CHCN）：色谱纯：
3.1.3冰乙酸（CH,COOH)。
3.1.4乙酸铵（CH,COONH）。
3.2试剂配制
3.2.1乙酸-乙酸铵溶液（pH=4）：准确称取0.77g乙酸铵置于1L容量瓶内，加900mL水溶解，用冰乙酸调节pH=4.0.加水定容至1L，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。3.3标准品
3.3.1藏花素标准品（C4H64O24，CAS号：42553-65-1)，纯度≥90.0%。3.3.2藏花酸标准品（C2H24O4，CAS号：27876-94-4），纯度≥90.0%。3.4标准溶液配制
3.4.1藏花素标准储备液：准确称取5.00mg（精确至0.01mg）藏花素标准品，用甲醇溶解，转移到10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花素浓度为0.5mg/mL，于4℃保存，3.4.2藏花酸标准储备液：准确称取1.00mg（精确至0.01mg）藏花酸标准品，用甲醇溶解，转移到10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花酸浓度为0.1mg/mL，于4℃保存。3.4.3藏花素、藏花酸混合标准曲线工作液：分别均吸取藏花素标准储备液、藏花酸标准储备液0.05mL0.1mL.0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，藏花素系列标准工作液浓度分1
GB5009.149—2016
别均为2.5g/mL、5ug/mL、10μg/mL、25μg/mL、50ug/mL.藏花酸系列标准工作液浓度分别均为0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL.5μg/mL10μg/mL，于4℃保存4仪器和设备
高效液相色谱仪，配置可见检测器分析天平：感量为0.01mg和0.01g。4.2
离心机：转速≥5000r/min。
酸度计。
超声波清洗仪。
食品粉碎机。
有机相型微孔滤膜：孔径0.45um5
分析步骤
试样制备及保存
5.1.1液体样品
将饮料、酒类、酱油等样品摇匀分装，密闭常温或冷藏保存。5.1.2半固态样品
对果冻等样品取可食部分匀浆后，搅拌均匀，分装，密闭冷藏或冷冻保存。5.1.3固体样品
饼干、糕点、熟肉制品、可可制品等低含水量样品，经高速粉碎机粉碎、分装，于室温下避光密闭保存。
5.2试样处理
5.2.1液体样品
称取2g（精确至0.01g)均匀试样（若试样中含二氧化碳应先超声除去)置于烧杯中，用适量甲醇溶解并转移至25ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。吸取1mL溶液过0.45μm有机滤膜，待测。5.2.2半固体试样及固体试样
称取2g（精确至0.01g)均勾试样于50mL离心管中，准确量取25mL甲醇溶液加人其中，超声20min后涡旋2min，4000r/min离心10min.吸取1mL上清液过0.45um有机滤膜.待测5.2.3酱油
称取1g（精确至0.01g）均匀试样置于烧杯中用适量甲醇溶解并转移至50mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。吸取1mL溶液过0.45um有机滤膜，待测。注：5.2过程应在避免强光照射的环境下进行5.3仪器参考条件
仪器参考条件列出如下：
GB5009.149—2016
色谱柱：Cls色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5pm，或同等性能的色谱柱；流动相：A：乙酸-乙酸铵缓冲溶液，B：乙睛，梯度洗脱见表1；进样量：10μL；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm。
表1流动相及梯度洗脱条件
标准曲线的制作
mL/min
流动相A
流动相B
将混合标准工作液分别注人高效液相色谱仪中，测定藏花素和藏花酸相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（标准图谱见图A.1）。5试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，得到藏花素和藏花酸的峰面积根据标准曲线得到待测液中藏花素和藏花酸的浓度。
分析结果的表述
试样中藏花素和藏花酸的含量按式（1)计算：pxVx1000
m×1000X1000
式中：
试样中藏花素或藏花酸的含量，单位为克每千克（g/kg)；.....(1)
由标准曲线求得试样溶液中藏花素或藏花酸的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)；样品溶液定容体积，单位为（mL）；换算系数；
最终样液代表的试样质量，单位为克（g)；标准品的纯度折算系数。
计算结果保留两位有效数字。
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在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。3
GB5009.149—2016
方法检出限（LOD）：酱油样品当称样量为1.0g时，藏花素为50mg/kg，藏花酸为10.0mg/kg，其他样品取样量为2.0g时.藏花素为12.5mg/kg，藏花酸为2.5mg/kg。方法定量限（LOQ）：酱油样品当称样量为1.0g时，藏花素为250mg/kg，藏花酸为50.0mg/kg，其他样品取样量为2.0g时，藏花素为62.5mg/kg，藏花酸为12.5mg/kg。4
附录A
藏花素和藏花酸的标准色谱图
藏花素和藏花酸标准色谱图见图A.1。薇
GB5009.149—2016
2. 5 3. 0 3. 5 1. 0 4. 5 5. 0 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7. 5 8. 0 8. 5 0. 0 0. 5 10 0 10. 5 11. 0 11.5 12. 0 12. 5 13. 0 13. 5 11.0 14 5/mim
藏花素和藏花酸的标准色谱图（藏花素浓度50μg/mL，藏花酸浓度10μg/mL）图A.1
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