GB 5009.261-2016
基本信息
标准号： GB 5009.261-2016
中文名称：食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
GB 5009.261-2016 食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定
GB5009.261-2016
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB5009.261—2016
食品安全国家标准
贝类中神经性贝类毒素的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB5009.261—2016
本标准代替SN/T1573—2013《出口贝类中神经性贝类毒素检验方法小鼠生物法》。
本标准与SN/T1573—2013相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准贝类中神经性贝类毒素的测定”。I
1范围
食品安全国家标准
贝类中神经性贝类毒素的测定
本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法。本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素（NSP)的检测。2原理
GB 5009.261—2016
用乙醚提取贝类中神经性贝类毒素，提取物经减压蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水为分散介质，制备NSP-1%吐温-60生理盐水混悬液，将该混悬液注射人腹腔，观紧小鼠存活情况计算其毒力。试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1盐酸(HCI)。
3.1.2无水乙醚（C,HO)。
3.1.3吐温-60（C64Hi26O26）。氯化钠(NaCI)。
次氯酸钠（NaClO）。
试剂配制
氯化钠溶液（0.85%）：称取0.85gNaCl.加水溶解并定容至100mL3.2.1
1%吐温-60：称取1.0g吐温-60，用0.85%氯化钠溶液溶解并定容至100mL。3.2.3
次氯酸钠溶液（5%）：称取次氯酸钠50g，用水溶解，并稀释至1000mL3.3标准品
短裸甲藻毒素标准品（brevetoxin-2），纯度≥90%。3.4材料
小白鼠：体重为19g21g的健康ICR品系雄性小鼠。4仪器和设备
旋转蒸发器。
均质器。
天平：感量为0.1g。
分液漏斗。
圆底烧瓶。
布氏漏斗。
一次性注射器：1mL。
离心机：转速≥6000r/min。
金属筛网：孔径约2mm。
分析步骤
GB5009.261—2016
注：橡胶手套、玻璃制品等用过的器材，以及废弃的提取液应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上，以使毒素分解。5.1试样制备
5.1.1样品采集
每个分析样品至少要取10个以上贝类，并使贝肉达200g以上。冷冻样品置于保温盒中冷冻送检，或保证其处于低温状态（0℃～10℃）送检。如为带壳样品，应开壳去除水分后冷冻送检。
5.1.2试样制备
5.1.2.1生鲜带壳样品
用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集200g贝肉放在孔径药2mm的金属筛网上沥水5min.捡出碎壳等杂物，将贝肉均质，备用5.1.2.2冷冻样品
在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按5.1.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，除去贝肉外部附着的冰片，抹去水分后，室温缓化。收集200g贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min，将贝肉均质，备用。
贝类罐头
将罐头内容物沥干水分，倒人均质器充分均质，备用。5.1.2.4贝肉干制品
称取100g干制品放入足量清水中浸泡24h～48h（4℃冷藏），沥干、均质、备用5.1.2.5
盐渍品
用清水洗涤，流水脱盐沥干，均质、备用。5.2试样提取
取100g试样到500mL烧杯中，加入5g氯化钠和1mL浓盐酸。搅拌均匀。边搅拌边加热混合物至沸腾，文火煮5min，冷却至室温。将混合物移至500mL离心管中，用50mL乙醚冲洗烧杯，将冲洗液一同移到离心管中。向离心管2
中再加人100mL乙醚，盖塞，充分振摇。6000r/min离心15min。GB5009.261—2016
离心后小心倒出醚层（上层）溶液至1000mL分液漏斗中，用乙醚重复三次抽提离心管中的沉淀三次抽提用总量为250mL乙醚，转移醚层液体至分液漏斗中。轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）及贝肉碎片。将乙醚层移人500mL的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃土1℃）去除乙醚。用1%吐温-60生理盐水将浓缩物在刻度试管中稀释到10mL，充分振摇，制成均匀NSP-1%吐温60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的10g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液进行动物实验。
5.3小白鼠试验
选择体重为19g21g的健康ICR品系雄性小鼠6只，随机分2组：检测样品组和空白对照组（1%吐温-60生理盐水），3只/组。分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，连续观测930min。若小鼠的中位数死亡时间在2h以内，则要用1%吐温-60生理盐水对待测液进行稀释后重新注射，直到小鼠的死亡时间在2h～6h内。
6分析结果的表述
6.1待测样品校正鼠单位（CMU)的确定根据待测样品的小鼠死亡时间（见表A.1）查出相应的鼠单位数MU：根据小鼠的重量（见表A.2）查出其对应的体重校正系数。同一只小鼠的鼠单位与体重校正系数相乘，即得该只小鼠的CMU。选取检测样品受试组中3只小鼠CMU的中位数，即为该样品受试组的中位数CMU.以此值进行6.2的计算6.2毒素毒力的计算与结果表述
6.2.1NSP毒力的计算
试样中NSP毒力按式(1)计算：
CMU×10
式中：
X——试样中NSP毒力，单位为鼠单位每克（MU/g）；CMU一一检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位，单位为鼠单位每毫升（MU/mL)；DF—稀释倍数
注：10—单位为毫升：100—单位为克。6.2.2结果表述
在空白对照组小鼠正常的情况进行如下判断和表述：若小鼠的死亡时间等于360min，则待测样品的NSP毒力即相当于0.2MU/g。.（1)
若实验组中位数死亡时间小于120min，则应对样品提取液进行稀释，再选取3只小鼠进行试验，直至得到中位数死亡时间为120min~360min为正，根据最后的稀释液实验结果计算样品的鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：XX×MU/g。若实验组中位数死亡时间大于360min，则直接计算确定样品鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：××XMU/g。
若实验组中所有小鼠在观察930min内均不死亡，则也可报告该样品的NSP毒力小于0.1MU/g3
附录A
小鼠死亡时间与鼠单位换算关系小鼠死亡时间与鼠单位换算关系见表A.1。小鼠死亡时间与鼠单位换算关系表A.1
死亡时间/min
小鼠体重/g
表A.2小鼠体重校正系数表
鼠单位/MUwww.bzxz.net
体重校正系数
GB5009.261—2016
小鼠体重/g
表A.2（续）
GB 5009.261—2016
体重校正系数
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GB5009.261—2016
食品安全国家标准
贝类中神经性贝类毒素的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB5009.261—2016
本标准代替SN/T1573—2013《出口贝类中神经性贝类毒素检验方法小鼠生物法》。
本标准与SN/T1573—2013相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准贝类中神经性贝类毒素的测定”。I
1范围
食品安全国家标准
贝类中神经性贝类毒素的测定
本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法。本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素（NSP)的检测。2原理
GB 5009.261—2016
用乙醚提取贝类中神经性贝类毒素，提取物经减压蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水为分散介质，制备NSP-1%吐温-60生理盐水混悬液，将该混悬液注射人腹腔，观紧小鼠存活情况计算其毒力。试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水3.1试剂
3.1.1盐酸(HCI)。
3.1.2无水乙醚（C,HO)。
3.1.3吐温-60（C64Hi26O26）。氯化钠(NaCI)。
次氯酸钠（NaClO）。
试剂配制
氯化钠溶液（0.85%）：称取0.85gNaCl.加水溶解并定容至100mL3.2.1
1%吐温-60：称取1.0g吐温-60，用0.85%氯化钠溶液溶解并定容至100mL。3.2.3
次氯酸钠溶液（5%）：称取次氯酸钠50g，用水溶解，并稀释至1000mL3.3标准品
短裸甲藻毒素标准品（brevetoxin-2），纯度≥90%。3.4材料
小白鼠：体重为19g21g的健康ICR品系雄性小鼠。4仪器和设备
旋转蒸发器。
均质器。
天平：感量为0.1g。
分液漏斗。
圆底烧瓶。
布氏漏斗。
一次性注射器：1mL。
离心机：转速≥6000r/min。
金属筛网：孔径约2mm。
分析步骤
GB5009.261—2016
注：橡胶手套、玻璃制品等用过的器材，以及废弃的提取液应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上，以使毒素分解。5.1试样制备
5.1.1样品采集
每个分析样品至少要取10个以上贝类，并使贝肉达200g以上。冷冻样品置于保温盒中冷冻送检，或保证其处于低温状态（0℃～10℃）送检。如为带壳样品，应开壳去除水分后冷冻送检。
5.1.2试样制备
5.1.2.1生鲜带壳样品
用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集200g贝肉放在孔径药2mm的金属筛网上沥水5min.捡出碎壳等杂物，将贝肉均质，备用5.1.2.2冷冻样品
在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按5.1.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，除去贝肉外部附着的冰片，抹去水分后，室温缓化。收集200g贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min，将贝肉均质，备用。
贝类罐头
将罐头内容物沥干水分，倒人均质器充分均质，备用。5.1.2.4贝肉干制品
称取100g干制品放入足量清水中浸泡24h～48h（4℃冷藏），沥干、均质、备用5.1.2.5
盐渍品
用清水洗涤，流水脱盐沥干，均质、备用。5.2试样提取
取100g试样到500mL烧杯中，加入5g氯化钠和1mL浓盐酸。搅拌均匀。边搅拌边加热混合物至沸腾，文火煮5min，冷却至室温。将混合物移至500mL离心管中，用50mL乙醚冲洗烧杯，将冲洗液一同移到离心管中。向离心管2
中再加人100mL乙醚，盖塞，充分振摇。6000r/min离心15min。GB5009.261—2016
离心后小心倒出醚层（上层）溶液至1000mL分液漏斗中，用乙醚重复三次抽提离心管中的沉淀三次抽提用总量为250mL乙醚，转移醚层液体至分液漏斗中。轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）及贝肉碎片。将乙醚层移人500mL的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃土1℃）去除乙醚。用1%吐温-60生理盐水将浓缩物在刻度试管中稀释到10mL，充分振摇，制成均匀NSP-1%吐温60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的10g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液进行动物实验。
5.3小白鼠试验
选择体重为19g21g的健康ICR品系雄性小鼠6只，随机分2组：检测样品组和空白对照组（1%吐温-60生理盐水），3只/组。分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，连续观测930min。若小鼠的中位数死亡时间在2h以内，则要用1%吐温-60生理盐水对待测液进行稀释后重新注射，直到小鼠的死亡时间在2h～6h内。
6分析结果的表述
6.1待测样品校正鼠单位（CMU)的确定根据待测样品的小鼠死亡时间（见表A.1）查出相应的鼠单位数MU：根据小鼠的重量（见表A.2）查出其对应的体重校正系数。同一只小鼠的鼠单位与体重校正系数相乘，即得该只小鼠的CMU。选取检测样品受试组中3只小鼠CMU的中位数，即为该样品受试组的中位数CMU.以此值进行6.2的计算6.2毒素毒力的计算与结果表述
6.2.1NSP毒力的计算
试样中NSP毒力按式(1)计算：
CMU×10
式中：
X——试样中NSP毒力，单位为鼠单位每克（MU/g）；CMU一一检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位，单位为鼠单位每毫升（MU/mL)；DF—稀释倍数
注：10—单位为毫升：100—单位为克。6.2.2结果表述
在空白对照组小鼠正常的情况进行如下判断和表述：若小鼠的死亡时间等于360min，则待测样品的NSP毒力即相当于0.2MU/g。.（1)
若实验组中位数死亡时间小于120min，则应对样品提取液进行稀释，再选取3只小鼠进行试验，直至得到中位数死亡时间为120min~360min为正，根据最后的稀释液实验结果计算样品的鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：XX×MU/g。若实验组中位数死亡时间大于360min，则直接计算确定样品鼠单位毒力，报告该样品的NSP毒力为：××XMU/g。
若实验组中所有小鼠在观察930min内均不死亡，则也可报告该样品的NSP毒力小于0.1MU/g3
附录A
小鼠死亡时间与鼠单位换算关系小鼠死亡时间与鼠单位换算关系见表A.1。小鼠死亡时间与鼠单位换算关系表A.1
死亡时间/min
小鼠体重/g
表A.2小鼠体重校正系数表
鼠单位/MUwww.bzxz.net
体重校正系数
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小鼠体重/g
表A.2（续）
GB 5009.261—2016
体重校正系数
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