GB 15193.15-2015 食品安全国家标准 生殖毒性试验 GB15193.15-2015 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB15193.15—2015
食品安全国家标准
生殖毒性试验
2015-08-07发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2015-10-07实施
本标准代替GB15193.15—2003《繁殖试验》。本标准与GB15193.15—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准生殖毒性试验”；增加了“生殖毒性”、“发育毒性”和“母体毒性”的术语和定义；GB 15193.15—2015
修改了“试验方法”，将“实验动物”“剂量与分组”“操作步骤”内容并入“试验方法”；修改了“试验报告”内容；
增加了“试验的解释”内容。
1范围
食品安全国家标准
生殖毒性试验
本标准规定了生殖毒性试验的试验方法和技术要求本标准适用于评价受试物的生殖毒性作用。2术语和定义
生殖毒性
GB15193.15—2015
对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。生殖毒性既可发生于妊娠期，也可发生于妊前期和哺乳期。表现为外源化学物对生殖过程的影响，例如生殖器官及内分泌系统的变化，对性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等。2.2
发育毒性
个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡。2.3母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。
3试验目的和原理
凡受试物能引起生殖机能障碍，干扰配子的形成或使生殖细胞受损，其结果除可影响受精卵及其着床而导致不孕外，尚可影响胚胎的发生及发育，如胚胎死亡导致自然流产、胎仔发育迟缓以及胎仔畸形。如果对母体造成不良影响会出现妊娠、分娩和乳汁分泌的异常，也可出现胎仔出生后发育异常4试验方法
4.1受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。将受试物掺入饲料、饮用水或灌胃给予。4.2实验动物wwW.bzxz.Net
实验动物的选择应符合国家标准和有关规定。首选大鼠，选用7周龄～9周龄，试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的土20%。试验前动物在实验动物房应至少进行3d～5d环境适应和检GB15193.15—2015
疫观察。每组应有足够的雌鼠和雄鼠配对，产生约20只受孕雌鼠。为此，一般在试验开始时两种性别每组各需要亲代（F。代）天鼠30只：在继续的试验中用来交配的客代大鼠L子二代（F，代）、子二代（F代）以及子三代（F代）每种性别每组需要25只（至少每窝雌雄各取1只，最多每窝雌雄各取2只）。选用的F。代雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠，4.3剂量及分组
动物按体重随机分组，试验为至少设三个受试物组和一个对照组。应考虑受试物特性（如生物代谢和生物蓄积特性)的影响作用。如果受试物使用溶媒，对照组应给予溶媒的最大使用量。如果受试物引起动物食物摄人量和利用率的下降时，那么对照组动物需要与试验组动物配对喂饲。某些受试物的高剂量受试物组设计应考虑其对营养素平衡的影响，对于非营养成分受试物剂量不应超过饲料的5%在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应使F代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡：中间剂量可引起轻微的毒性反应；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应（可按最大未观察到有害作用剂量的1/30，或人体推荐摄入量的10倍）。4.4实验动物处理
4.4.1受试物的给予
4.4.1.1试验期间，所有动物应采用相同的方式给予受试物；每日在同一时间段给予受试物，每周7d。受试物应在交配前连续给予两种性别的各代大鼠至少10周，并继续给予受试物至试验结束，其中子代的雌鼠和雄鼠在断乳后每日给予。各代大鼠给子的受试物剂量（按动物体重给予，mg/kg体重或g/kg体重）、饲料和饮水相同
4.4.1.2根据受试物的特性或试验目的，选择合适的给予方式。首选掺人饲料，若受试物加人饲料或饮水中影响动物的适口性，则应选择灌胃给予受试物。4.4.1.3受试物灌胃给予，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水，不溶于水的受试物可使用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或糊状物等。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。应每日在同一时间灌胃1次，每周称体重2次，根据体重调整灌胃体积。灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，如为水溶液时，最大灌胃体积可达20mL/kg体重；如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重；各组灌胃体积一致。
4.4.1.4受试物掺入饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺人饲料比例一般小于质量分数的5%，若超过5%时（最大不应超过10%），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成分，且添加比例大于5%时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺人量等同高剂量），使其与剂量组饲料营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；也可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫克（或克）数，即mg/kg体重（或g/kg体重），当受试物掺入饲料其剂量单位也可表示为mg/kg（或g/kg）饲料，掺人饮水则表示为mg/mL水。受试物掺入饲料时，需将受试物剂量（mg/kg体重）按动物每100g体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（mg/kg饲料）。4.4.2交配
每次交配时，每只雌鼠应与从同一受试物组随机选择的单个雄鼠同笼（1：1交配），直到检测到阴栓，或者经过3个发情期或2周。查到阴栓后应将雌、雄鼠分开，如果经过3个发情期或2周还未进行2
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GB15193.15—2015
交配也应将雌雄鼠分开，不再继续同笼。配对同笼的雌雄鼠应作标记。所有雌鼠在交配期应每天检查精子或阴栓，直到证明已交配为止。查到阴栓的当天为受孕0d。预计已受孕的雌鼠应分开放人繁殖笼中，孕鼠临产时应提供筑巢的垫料。4.4.3每窝仔鼠数量的标准化
将每窝仔鼠于出生后第4天调整至相同数量（每窝8只～10只），尽量做到每窝内雌、雄数量相等，也可以窝内雌、雄数量不等，但各窝之间两性别的鼠数应分别相同。原窝中多余的鼠应随机取出，而不应按体重选择。
4.4.4观察代数
观察代数随受检目的而异，可作一代、二代、三代或多代观察。如果在两代生殖试验中观察到受试物对子代有明显的生殖、形态或毒性作用，则需要进行第三代生殖毒性试验，进一步观察受试物的生殖毒性作用。
5一代、二代和三代生殖毒性试验法4.5.1一代生殖毒性试验法
一代生殖毒性试验示意图见图1。雄鼠（20只或10只
F，雌飘（8只~0只）分娩
唯鼠(20只）断乳后，喂含受试彻料3个月雌鼠(8只~9只)20d*前检查肾胎
断乳，有离行鼠一分为二(处死母鼠)统受试物
不给受试彻
60小-卵d观察鼠的各项形标后处死图1一代生殖毒性试验示意图
4.5.2两代生殖毒性试验法
1两代生殖毒性试验示意图见图2。4.5.2.1
风（20H或10H）
o（5只）
产前检上1
查临胎
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难鼠（20只）断乳后，慢含受试物例料3个月，交配国断乳后，喂基仙问料3个月迹行观察，可逃部分动物迹行FL斯弱片10d，Fo进行第一次交能5
日然分露，产
姚察仔鼠
Fo（10
m斯乳后，渠含受试物何料3个刀，交配原（20只或10只）
上16(10只）
F后检查硫胎
雄朗（20）
H2a核1.处
F2断乳后10a，Fm进行第二次交配F16(10只）自然分
12,断乳后，喂含受试物饲料3个H，并观察图2两代生殖毒性试验示意图
4.5.2.2F。代断乳后，给予受试物3个月，雌一雄即可交配，所产仔鼠为F1s。Fl.断乳后不再给予受试物，观察3个月。
4.5.2.3F断乳后10d将F。再次交配，所产仔鼠为F，将20只孕鼠（F）中5只产前2d～3d剖腹检查胎鼠有无畸形；另5只自然分观察产后仔鼠情况；作10只孕鼠自然分娩，所产F1继续繁殖4.5.2.4F断乳后，给予含受试物饲料3个月，进行交配，所产F2.在断乳后喂不含受试物的饲料，观察3个月。
5F2断乳后10d将Fl再次交配，产F2前将F孕鼠分两群，每群10只，同4.5.2.3。4.5.3三代生殖毒性试验法
三代生殖毒性试验法示意图见图3。TiiKAoNhiKAca
品（20只或10H）
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雌鼠(20)断乳后，喂含受试物词料3个月，交配HI、斯乳后，喂基仙饲料3个H，并观察F斯乳后d，「进行第二次交配
上断乳后股价个受试物创料3个月后这（20或1）
20只】
F断乳后，呕格础饲料3个几，并观蔡上断乳后10d，上进行第一次交配-,断乳片喂含受试物饲料3个厅后交配舱瓶
（20只或10只）
（20只）
下断犯后，带础份料3个月双察
F，断乳后d，进行第，次交配
断氧后慢含受试物饲科3个月，并对案图3三代生殖毒性试验示意图
4.5.4亲代、一代、二代、三代繁殖试验4.5.4.1亲代、一代、二代、三代繁殖试验可参考4.5.2.2、4.5.2.3进行。4.5.4.2根据情况可繁殖两窝以上。5观察指标
5.1对实验动物做全面的临床检查，记录一般健康状况、受试物的所有的毒性和功效作用所产生的症状、相关的行为改变、分娩困难或延迟的迹象、所有的毒性体征及死亡率，通过每日检查（F，F.代雌鼠）阴道和子宫颈，以及雌鼠的发情周期有无异常。5.2F、F1代和F2代动物在给予受试物的第1天称重，以后每周称重2次，母鼠应在受孕的第0天、第7天、第14天和第21天称重，在哺乳期应同时称仔鼠的窝重。5.3在交配前及受孕期，记录每周摄食量，如经饮水给予受试物，还应记录每周饮水量。5.4试验结束时，根据试验设计，各代雄鼠均应对附辜的精子进行检查，对精子的形状、数量以及活动能力进行评价。精子的活动能力和精子形态，可只检查对照组和高剂量受试物组的各代雄鼠，每只动物至少检查200个精子。
5.5在分娩后（哺乳0d)应尽快检查记录每窝仔鼠的数量、性别、死产数、活产数及肉眼可见的异常，在出生当天死广的，应尽可能检查其缺陷和死广原因。记录活产数量、性别，并在出生当天对单个活产仔5
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鼠称重，此后在哺乳期的第4天、第7天、第14天和第21天，以及阴道开放或龟头包皮分开和试验结束时对仔鼠进行称重。用来进行交配的F代断乳鼠，观察并记录阴道开放或龟头包皮分开的日龄，观察性成熟情况
5.6试验结束时所有F。、F1代动物脏器称重：子宫（包括输卵管和子宫颈）、卵巢；睾丸、附睾；脑、肝、肾、脾和已知的靶器官。
5.7试验结束时和试验期间死亡的所有F。代动物均应作大体解剖和组织病理学检查，观察各种形态结构异常及病理改变，特别注意生殖器官。如果每窝仔鼠的数量足够，F代、F，代（和F代）每窝每种性别至少取3只仔鼠进行同样检查。检查的器官及组织应包括子宫、卵巢、睾丸、附睾以及靶器官脏器。
6数据处理和结果评价
6.1繁殖指数
受孕率的计算见式（1)：
受孕率
妊娠率的计算见式（2）：
怀孕动物数
交配雌性动物数
分娩有活体幼仔的动物数
妊娠率一
怀孕动物数
出生活仔率的计算见式（3）：
出生活仔率：
出生存活率的计算见式（4）：
出生时活的仔鼠数
出生时仔鼠总数
产后4d仔鼠存活数
出生存活率二4
出生时活的仔鼠数
哺乳存活率的计算见式（5)：
哺乳存活率=
性别比的计算见式（6）：
21d断乳时存活的仔鼠数
出生4d后存活的仔鼠数
性别比
6.2数据处理
仔鼠出生后雄鼠数
仔鼠出生后雌鼠数
.（1)
（2）
.（3）
·（4）
.（6）
应将所有的数据和结果以表格形式进行总结，数据可以用表格进行统计，表中应显示每组的实验动物数、交配的雄性动物数、受孕的雌性动物数、各种毒性反应及其出现动物百分数。数据应进行统计分析，可采用适当的统计方法进行处理。6.3结果评价
逐一比较受试物组动物与对照组动物繁殖指数是否有显著性差异，以评定受试物有无生殖毒性，并确定其生殖毒性的未观察到有害作用剂量（NOAEL）和最小观察到有害作用剂量（LOAEL）。同时还可根据出现统计学差异的指标（如体重、观察指标、大体解和病理组织学检查结果等），进一步估计生殖毒性的作用特点。
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7试验报告
试验名称、试验单位名称和联系方式、报告缩号。7.2试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。7.3
试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期、7.4
试验摘要。
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受试物：名称、批号、剂型、状态（包括感官、性状、包装完整性、标识）、数量、前处理方法、溶媒实验动物：物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物生产许可证号）、动物检7.6
疫、适应情况、饲养环境（温度、相对湿度、实验动物设施使用许可证号）、饲料来源（供应商名称、实验动物饲料生产许可证号）。
7.7试验方法：试验分组、每组动物数、剂量选择依据、受试物给予途径及期限、观察指标、统计学方法。7.8试验结果：
按性别和剂量组分别记录的毒性反应，包括繁殖、妊娠和发育能力的异常；a)
试验期动物死亡的时间或试验动物是否生存到试验结束：)
每窝仔鼠的体重和仔鼠的平均体重，以及试验后期单只仔鼠的重量；任何有关繁殖，仔鼠及其生长发育的毒性和其他健康损害效应；观察到的各种异常症状的出现时间和持续过程；亲代（F，）和选作交配的子代动物的体重数据；病理大体解剖的发现；
h）病理组织学检查结果的详细描述；i
结果的统计处理。
7.9试验结论：受试物生殖毒作用的特点，剂量反应关系，并得出生殖毒性的NOAEL和（或）LOAEL结论等。
8试验的解释
生殖毒性试验检验动物经口重复暴露于受试物产生的对雄性和雌性生殖功能的损害及对后代的有害影响，并从剂量-效应和剂量-反应关系的资料，得出LOAEL和NOAEL。试验结果应该结合亚慢性试验、致畸试验、毒物动力学及其他试验结果综合解释。由于动物和人存在物种差异，故试验结果外推到人存在一定的局限性，但也能为初步确定人群的允许接触水平提供有价值的信息，7
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