GB 30615-2014 食品安全国家标准 食品添加剂 竹叶抗氧化物 GB30615-2014 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB306152014
食品安全国家标
食品添加剂
竹叶抗氧化物
2014-04-29发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2014-11-01实施
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂竹叶抗氧化物
GB30615—2014
本标准适用于以刚竹属（PhyllostachysSiet.EtZucc）竹种的叶为原料，经提取、精制而成的食品添加剂竹叶抗氧化物。
注：用于生产食品添加剂竹叶抗氧化物的竹叶原料为被子植物门（Angiospermae）、单子叶植物纲（Monocotyledonae）禾本目（Graminales）、禾本科（Graminae）、竹亚科（Bambusoideae）、刚竹属（Phyllostachys）品种1～2年生的叶子。2分类
竹叶抗氧化物根据其溶解性分为水溶性产品和脂溶性产品。其水溶性产品的主要有效成分为竹叶碳苷黄酮（异草苷、草苷、牡荆苷、异牡荆苷）和对香豆酸、绿原酸等；脂溶性产品的主要有效成分为对香豆酸、阿魏酸、首素以及竹叶黄酮的酯化产物等。主要成分的化学名称、结构式、分子式和相对分子质量3
3.1异草苷
3.1.1化学名称
5,7,3°，4°-四羟基黄酮-6-C-葡萄糖苷3.1.2分子式
C2/H20Oul
3.1.3结构式
3.1.4相对分子质量
448.38（按2007年国际相对原子质量）3.2对香豆酸
化学名称
3-（4-羟基苯基）-2丙烯酸
分子式
3结构式
相对分子质量
164.16（按2007年国际相对原子质量）技术要求
感官要求：
应符合表1的规定。
感官要求
黄色至黄棕色或黄褐色，吸湿时色渐变深水溶性产品具有典型的竹叶清香：脂溶性产品清香淡、略带酯味
粉末状，
允许有少量颗粒
理化指标：
总酚，w/%
异草苷，w/%
对香豆酸，w/%
应符合表2的规定。
检验方法
GB30615—2014
取适量试样置于50mL烧杯中，在自然光下观察色泽和状态，嗅其气味
2理化指标
水溶解度（25℃）/（g/100g)
乙酸乙酯溶解度（25℃），（g/100g）灼烧残渣，w/%
干燥减量，w/%
总（以As计)/（mg/kg）
铅（Pb）／（mg/kg）
注：水溶性产品可用糊精稀释。水溶性
脂溶性
检验方法
附录A中A.4
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.8
附录A中A.9
GB/T5009.11
或GB/T5009.76
GB5009.12或GB/T5009.75
A.1安全提示
附录A
检验方法
GB30615—2014
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风柜中进行。A.2
：一般规定
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.3鉴别试验
A.3.1化学试剂鉴别
A.3.1.1试剂和材料
A.3.1.1.1乙醇水溶液（95+5)。A.3.1.1.2三氯化铁乙醇溶液：10g/L。三氯化铝乙醇溶液：10g/L。
A.3.1.1.3
A.3.1.2鉴别方法
A.3.1.2.1称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加23滴三氯化铁乙醇溶液，溶液显深蓝色或蓝紫色
A.3.1.2.2称取约0.5g试样溶于100mL乙醇中，取此溶液1mL滴加2～3滴三氯化铝乙醇溶液，溶液显鲜黄色。
A.3.2光谱学鉴别
A.3.2.1红外透射光谱鉴别
采用溴化钾压片法，按照GB/T6040的规定进行试验，试样的红外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录B）。
A.3.2.2紫外吸收光谱鉴别
称取约15mg试样溶于100mL色谱纯甲醇中，在200nm～600nm波长范围内进行紫外扫描，试样的紫外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录C）。A.3.3有效成分分析及其指纹图谱A.3.3.1方法提要
GB30615—2014
试样用色谱纯甲醇溶解，以乙睛-乙酸水溶液（1+99）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二级管阵列检测器，用含异草苷、草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等八个对照品的标准图谱和试样图谱进行对照，确定竹叶抗氧化物产品的有效成分及类别差异。A.3.3.2试剂和材料
A.3.3.2.1乙腈（色谱纯）。
A.3.3.2.2甲醇（色谱纯）。
A.3.3.2.3冰乙酸（优级纯）。
A.3.3.2.4水（超纯水）。
A.3.3.2.5异草苷、草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸标准品：纯度》98.0%。
A.3.3.2.6混标溶液：分别称取上述8个对照品（A.3.3.2.5）各5mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存，此溶液为八个对照品的混标溶液。A.3.3.3仪器和设备
A.3.3.3.1高效液相色谱仪。
A.3.3.3.2紫外光检测器：可变波长。A.3.3.3.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.3.3.4参考色谱条件
推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，竹叶抗氧化物指纹图谱测定典型高效液相色谱图见附录D中D.1和D.2。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱
柱温/℃
流动相
梯度洗脱条件
流动速度/（mL/min）
检测器检测波长/nm
进样量/μL
A.3.3.5分析步骤
A.3.3.5.1试样处理
C18ODS柱，柱长250mm，内径4.6mm，内装Ci填充物，粒径5μm或是相当者40
A.乙晴；B.乙酸水溶液（1+99）0min~15min，A15%，B85%;15min~25min，A15%~40%，B85%~60%:25min~34minA40%,B60%:34min~40min，A40%~15%，B60%~85%330
准确称取试样100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜（0.45um）过滤即得试样溶液。
A.3.3.5.2试样测定
准确吸取试样溶液10，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性。试样的高效液相色谱图应与对照图谱一致（对照图谱见附录D）。A.4总酚测定
A.4.1方法提要
GB30615—2014
福林（Folin）试剂在碱性条件下极不稳定，可使酚类化合物还原而呈蓝色反应。在对羟基苯甲酸浓度0.0005mg/mL～0.016mg/mL范围内，其浓度与吸光度符合比尔定律，可用对羟基苯甲酸为对照品进行定量比色测定得试样的总酚含量。
A.4.2试剂和材料
A.4.2.1乙醇水溶液（3+7)。
A.4.2.2乙醇水溶液（9+1）。
A.4.2.3碳酸钠溶液：200g/L。
A.4.2.4对羟基苯甲酸标准品：纯度≥98.0%。A.4.2.5对羟基苯甲酸标准溶液：0.250mg/mL，称取干燥至恒重的对羟基苯甲酸标准品25.0mg，用乙醇水溶液（A.4.2.1）溶解并定容至100mL。A.4.2.6福林试剂（自行配制或外购）：于2000mL磨口烧瓶中放入100g钨酸钠（Na2WO4-2H20）、25g钼酸钠（Na2MoO42H,O）、700mL水、50mL85%磷酸（H;PO4）、100mL盐酸，小火沸腾回流10h，去除冷凝器后，加入50g硫酸锂（LizSO4）、50mL水和数滴溴水（99%），摇匀，在通风柜内进行，再煮沸15min以去除过量的溴，冷却后加水定容至1000mL，混合均匀，过滤。试剂呈金黄色，储存于棕色瓶内，使用时以1份原液于2份水稀释均匀。A.4.3仪器和设备
A.4.3.1分光光度计。
A.4.3.2万分之一电子天平：感量0.0001gA.4.3.3移液枪（或移液管）。
A.4.3.4容量瓶。
A.4.4测定步骤
A.4.4.1试样处理
准确称取竹叶抗氧化物试样100mg（精确至0.0001g），水溶性产品用乙醇水溶液（A.4.2.1）溶解并定容至100mL，脂溶性产品用少量乙醇水溶液（A.4.2.2）溶解后、再用乙醇水溶液（A.4.2.1）定容至100mL；用定性滤纸过滤，即得试样溶液。A.4.4.2标准曲线的绘制
准确吸取对羟基苯甲酸标准溶液0mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.20mL，相当于对羟基苯甲酸0mg、0.0125mg、0.025mg、0.050mg、0.10mg、0.20mg、0.30mg移入25mL具塞试管中，分别用水稀释至10.0mL；各加入1.0mL福林试剂和2.0mL20%碳酸钠溶液，试管在50℃土1℃的恒温水浴中加热30min，然后用水冷却并稀释至25mL。室温放置30min，用1cm比色杯测定745nm的吸光度。以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。A.4.4.3试样测定
准确吸取试样溶液1mL，按上述标准曲线制作中的操作步骤（A.4.4.2）于745nm处进行吸光度测定。根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的对羟基本甲酸含量。A.4.5结果计算
总酚（以对羟基苯甲酸计）的质量分数Wi按公式（A.1）计算：式中：
m×V2×100
依据标准曲线计算出的待测液中总酚含量的数值，单位为毫克（mg）：待测液总体积的数值，单位为毫升（mL）；供试样取样质量的数值，单位为毫克（mg）；待测液分取体积的数值，单位为毫升（mL）。GB30615—2014
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0%。
A.5异草苷测定
A.5.1方法提要
试样经甲醇溶解，以乙晴-乙酸水溶液（1+99）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二极管阵列检测器，对试样中的异草苷进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。
A.5.2试剂和材料
A.5.2.1乙腈（色谱纯）。
A.5.2.2甲醇（色谱纯）。
A.5.2.3冰乙酸（优级纯）。
A.5.2.4水（超纯水）。
A.5.2.5异草苷标准品：纯度98.0%A.5.2.6异草苷标准溶液：准确称取异草苷标准品5mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含异草苷0.5mg。A.5.3仪器和设备
A.5.3.1高效液相色谱仪。
A.5.3.2紫外光检测器：可变波长。A.5.3.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.5.4
参考色谱条件
推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.2，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.2色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱
柱温/℃
流动相
梯度洗脱条件
流动速度/（mL/min）
检测器检测波长/nm
进样量/uL
ClODs柱，柱长250mm，内径4.6mm，内装Cls填充物，粒径5μm或是相当者40
A.乙晴；B.乙酸水溶液（1+99）0min~15min，A15%，B85%;15min~25min，A15%40%,B85%~60%;25min~34min，A40%，B60%：34min~40min，A40%~15%，B60%~85%1
A.5.5分析步骤
A.5.5.1试样处理
GB30615—2014
准确称取竹叶抗氧化物试样100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜（0.45μm）过滤，即得试样溶液。
A.5.5.2标准曲线的绘制
准确吸取一定量的异草苷标准溶液，分别稀释4、8、10、16、20和40倍，进样10uL，在规定色谱条件下，进行色谱分析。根据异草苷标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、异草苷浓度为横坐标，绘制标准曲线。A.5.5.3试样测定
准确吸取试样溶液10uL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A.5.6结果计算
异草苷的质量分数W2按公式（A.2）计算：w, (%) =*×100.wwW.bzxz.Net
式中：
cl—依据标准曲线计算出的待测液中的异获草苷浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）：V3—供试样定容体积的数值，单位为毫升（mL)；m供试样取样质量的数值，单位为毫克（mg）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过2.5%。
A.6对香豆酸测定
A.6.1方法提要
试样经甲醇溶解，以乙-乙酸水溶液（1+99）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二极管阵列检测器，对试样中的对香豆酸进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。
A.6.2试剂和材料
A.6.2.1乙腈（色谱纯）。
A.6.2.2甲醇（色谱纯）。
A.6.2.3冰乙酸（优级纯）。
A.6.2.4水（超纯水）。
A.6.2.5对香豆酸标准品：纯度≥98.0%A.6.2.6对香豆酸标准溶液：准确称取对香豆酸标准品10mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含对香豆酸1.0mg。A.6.3仪器和设备
A.6.3.1高效液相色谱仪。
A.6.3.2紫外光检测器：可变波长。A.6.3.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.6.4参考色谱条件
GB30615—2014
推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.3，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.3色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱
柱温/℃
流动相
梯度洗脱条件
流动速度/（mL/min）
检测器检测波长/nm
进样量/μL
A.6.5分析步骤
试样处理
CisODS柱，柱长250mm，内径4.6mm，内装Cig填充物，粒径5μum或是相当者40
A.乙腈：B.乙酸水溶液（1+99）0min~15min,A15%,B85%:15min~25minA15%~40%,B85%~60%:25min~34min,A40%,B60%;34min~40min，A40%~15%,B60%~85%310
准确称取竹叶抗氧化物试样100mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至100mL，经微孔滤膜（0.45μm）过滤，即得试样溶液。
A.6.5.2标准曲线的绘制
准确吸取一定量的对香豆酸标准溶液，分别稀释8、10、16、32、64、128和256倍，进样10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，根据对香豆酸标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、对香豆酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。A.6.5.3试样测定
准确吸取试样溶液10μL，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A.6.6结果计算
对香豆酸的质量分数w3按公式（A.3）计算：ws(%)=
式中：
c,×V4×100
依据标准曲线计算出的待测液中对香豆酸浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；供试样定容体积的数值，单位为毫升（mL）；供试样取样质量的数值，单位为毫克（mg）。(A.3)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过2.5%。
A.7水溶解度测定
仪器和设备
A.7.1.1电热恒温干燥箱。
A.7.1.2百分之一电子天平：感量0.01g。A.7.2分析步骤
GB30615—2014
取200mL的具塞锥形瓶，干燥至恒重（ms）后，准确称取100g蒸馏水（精确至0.01g），然后加入6g~10g水溶性竹叶抗氧化物（精确至0.01g），在25℃条件下边加边搅拌，在5min内使其充分溶解，静置10min，倒出上清液，瓶及残渣干燥至恒重（m），根据减轻的质量计算水溶解度。A.7.3结果计算
水溶解度以w4表示，其数值以克每百克（g/100g）表示，按公式（A.4）计算Wy=ms +mg-m.
式中：
干燥后锥形瓶质量的数值，单位为克（g）；ms
供试样取样量的数值，单位为克（g）：干燥后锥形瓶和残渣质量的数值，单位为克（g）。(A.4)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0%。
A.8乙酸乙酯溶解度测定
A.8.1试剂和材料
乙酸乙酯。
A.8.2仪器和设备
A.8.2.1电热恒温干燥箱。
A.8.2.2百分之一电子天平：感量0.01g。A.8.3分析步骤
取200mL的具塞锥形瓶，干燥至恒重（m）后，准确称取100g乙酸乙酯（精确至0.01g），然后加入5g～10g脂溶性竹叶抗氧化物（精确至0.01g），在25℃条件下边加边搅拌，在5min内使其充分溶解，静置10min，倒出上清液，瓶及残渣干燥至恒重（mio），根据减轻的质量计算乙酸乙酯溶解度。A.8.4结果计算
乙酸乙酯溶解度以ws表示，其数值以克每百克（g/100g）表示，按公式（A.5）计算：Ws=mg+mg-mio
式中：
干燥后锥形瓶质量的数值，单位为克（g）：ms
供试样取样量的数值，单位为克（g）：干燥后锥形瓶和残渣质量的数值，单位为克（g）。(A.5)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0%。
灼烧残渣测定
分析步骤
GB30615—2014
称取约2g试样（精确至0.0001g），置于预先恒重的埚内，先用小火缓缓加热至完全炭化，然后小心移入高温炉内于600℃土25℃灼烧至恒重。A.9.2结果计算
灼烧残渣的质量分数w6按公式（A.6）计算：mil-m2×100
w (%)=
mi3-mi2
式中：
-增和灼烧残渣质量的数值，单位为克（g）：-埚质量的数值，单位为克（g）；埚和供试样质量的数值，单位为克（g）。(A.6)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过5.0%。
附录B
竹叶抗氧化物红外透射光谱图
B.1水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图见图B.1100
波数/cm
图B.1水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图B.2脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图见图B.2。100
波数cm
图B.2脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图U
GB30615—2014
注：水溶性竹叶抗氧化物在3400cm、2930cm、1610cml、1075cml等附近有特征性吸收，分别示酚羟基、苯环上碳氢键、苯环骨架及羰基的伸缩振动：脂溶性竹叶抗氧化物在3400cm左右的酚羟基峰大大减弱，1700cml附近出现强的羰基吸收峰。
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