GB∕T 15670.3-2017
基本信息
标准号： GB∕T 15670.3-2017
中文名称：农药登记毒理学试验方法 第3部分：急性经口毒性试验 序贯法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
GB∕T 15670.3-2017 农药登记毒理学试验方法 第3部分：急性经口毒性试验 序贯法
GB∕T15670.3-2017
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标准内容
ICS65.100
中华人民共和国国家标准
GB/T15670.3—2017
农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验
序贯法
Toxicological test methods for pesticides registration-Part 3:Acute oral toxicity test-Up-and-down-procedure2017-07-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-02-01实施
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：第1部分：总则；
第2部分：急性经口毒性试验
崔恩氏法：
第3部分：急性经口毒性试验序贯法；第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；
第6部分：急性吸人毒性试验；
第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验；第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验；第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验；第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验：第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验：第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验：第13部分：亚慢性毒性试验，
第14部分：细菌回复突变试验；第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验；第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验；第18部分：啮齿类动物显性致死试验；第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验；第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验；第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验；GB/T15670.3—2017
第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验；第23部分：致畸试验；
第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第26部分：慢性毒性试验；
第27部分：致癌试验；
第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验。本部分为GB/T15670的第3部分。本部分按照GB/T'1.1-2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：贺锡雯、张丽英、曲莞、陶传江。I
1范围
农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验序贯法GB/T15670.3—2017
GB/T15670的本部分规定了急性经口毒性试验序贯法的基本原则、方法和要求。本部分适用于为农药登记而进行的急性经口毒性试验。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用丁本文件。GB14925实验动物环境及设施
农药登记资料规定（中华人民共和国农业部令【20077第10号）3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
acute oral toxicity
急性经口毒性
一次或在24h内多次经口给于实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。3.2
剂量dose
所给受试物的量，以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。3.3
半数致死剂量
medianlethaldose
一次或在24h内多次给予实验动物受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量。以实验动物单位体重接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。3.4
dose-responserelationship
剂量-反应关系
剂量与特定效应的发生率间的关系。4试验目的
急性经口毒性试验是评估受试物毒性的第一步。通过短时间经口染毒初步了解受试物的毒性特征和剂量-反应关系，为急性毒性分级、标签管理和其他毒理学试验剂量选择提供依据。5
试验概述
序贯法（up-and-down-procedureUDP）是一个阶梯式的染毒程序。使用单一性别的动物，一次染1
TKAoNrKAca
GB/T15670.3-—2017
毒一只。第一只动物的染毒剂量最好低于LD。的估计值。后续动物染毒剂量的增减，取决于前一只动物的染毒结果（存活或死亡）；在不能获得受试物LDsc的初步估计值及剂量-反应曲线斜率资料时，计算机摸拟结果提示起始剂量可选择175mg/kg体重，采用0.5的反对数（对应于个默认的剂量级数因子3.2)计算剂量间距。以最大似然法计算LD5的点估计值和95%可信区间。注：剂量级数因子由剂量-反应曲线斜率的倒数的反对数决定（3.2是斜率为2时的级数因子）。正式试验使用的动物数大约6只～9只。限量试验不超过5只。本方法仅适用于动物染毒后1d~2d内死亡的受试物，对预期染毒后死亡延迟至5d以上（含5d)的受试物不适用。6试验方法
6.1受试物
受试物可配制成水溶液、油溶液或悬浮液。尽可能选用水或食用油（如玉米油）作溶剂，其他如羧甲基纤维素钠、明胶和滤粉可将受试物配制成混悬液或糊剂。除水以外的溶剂，用前应了解其毒理学特性，必要时设立溶剂对照组。染毒时，不同浓度受试物现用现配。一次染毒容量不超过1mL/100g体重，水溶液可达到2mL/100g体重，通过调整受试物溶液的浓度，使各剂量组经口染毒的容量一致。如-次染毒容量太大可在24h内分2次～3次给予6.2实验动物
6.2.1种属和性别
啮齿类动物中可选用SU大鼠或Wist大鼠。
性别，通常
采用雕性动物（应为未妊娠和未经产的)，比较敏感。如有相关续的的化学物的毒理学、代谢和毒物动力力学研究证明雄性大鼠更敏感，可选择后者。
年龄和体重
8周一10周内，动物体重变异不超过动物平均体重的上20。按随机原则健康成年大鼠鼠龄在
逐只进入试验
6.3饲养环境和条件
动物饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定。喂饲常规动物饲料饮水量不限。试验前，人选动物在饲养环境中至少检疫、适应3d。6.4试验步骤
6.4.1限量试验
6.4.1.1受试物的一次染毒剂量为5000mg/kg体重。先给一只动物染毒，在染毒48h内动物存活，再给2只动物相同的剂量，观察14d，如动物依然存活可终止试验或在给相同剂量的2.只动物中，1只存活1只死亡，再追加2只动物，染毒的5只动物有大于或等于3只动物存活，可结束试验，表明该受试物的LDso>5000mg/kg体重。
6.4.1.2上述5只染毒动物中有3只动物分别在48h内死亡或死亡时间延迟在11d观察期内，终止染毒，进入正式试验。
6.4.2正式试验下载标准就来标准下载网
6.4.2.1试验前，大鼠禁食过夜，饮水不限。2
TTTKAONIKAca
GB/T15670.3—2017
6.4.2.2起始剂量和剂量级数因子的选择。在无法得到受试物致死剂量的估计值时，默认的起始剂量为175mg/kg体重。对应于剂量-反应斜率为2的级数因子3.2所设定的剂量序列为：1.75mg/kg体重，5.5mg/kg体重，17.5mg/kg体重，55mg/kg体重，175mg/kg体重，555mg/kg体重和2000mg/kg体重或1.75mg/kg体重，5.5mg/kg体重，17.5ing/kg体重，55mg/kg体重，175mg/kg体重，555mg/kg体重，1750mg/kg体重和5000mg/kg体重。如已知受试物的剂量-反应曲线斜率比较陡峭或较平坦，剂量级数因子可以缩小或加大。附录A列出了起始剂量为175mg/kg体重，斜率在1～8的剂量级数可供选择。
6.4.2.3试验开始，称量禁食后动物的体重，使用灌胃针头经口染毒，一次一只动物，每只动物的染毒间隔时间为48h。第二只动物染毒剂量取决于第一只动物的染毒结果，如动物死亡或呈濒死状态，剂量按级数因子下调一级；如动物存活，剂量上调一级。当后续剂量出现与起始剂量相反的染毒结果时，再追加4只动物序贯染毒后结束试验，或当达到任一终止试验的规定（见6.4.2.6）时，可结束试验。染毒后大鼠应继续禁食3h~1h、对每只动物的观察期为14d。6.4.2.4如染毒48h内动物存活，而在后续观察期内出现延迟死亡，表明剂量选择不合适，可考虑再给2只动物低于引起死二的剂量，重新开始试验，延长观察期。6.4.2.5试验结果以最大似然法（见附录B)计算该受试物的LDs。和95%可信区间。6.4.2.6符合下述任条件即可结束试验：a）在上限剂量范围的序优染毒中有3只动物存活时，b）在任取的6只序贯婴毒动物中出现，次相友结果时c）
在第一
次出现相反结果后至少有只动物序贯染毒，从带量的似然值，其给定的拟然化超过临界值LDso和斜率的变异大出现相反结果只一
次相反结果后，开始计算每一个剂动物序责染责即符合终止试验的规定。在有些情况下，受试物的剂量发顶曲线斜率平妞，可能需要追加动物达到15真6.5试验观察和检查
临床观察
在染毒后24h(特别在染毒后30mm内和第记录每只动物的中毒反应。
临床观察至少包括：
0及141的观察期内特天定时观察并详细a）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、震颤、抽措、麻痹、运动失调、对外反应过缴或迟钝异常行为如过度反复抓挠口周、梳理、转圈，甚至自残、倒退行走等；植物神经系统：脏孔扩大或缩小、流涎和流泪：b）
呼吸系统：鼻孔流液、鼻、鼻舆扇动呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰c
泌尿生殖系统：会阴部污移、有分泌物、阴道或乳房肿胀d)
皮肤和被毛：皮肤充血、紫、被毛蓬松或潮湿、污移e）
眼：眼球突出、结膜充血、溢血性分泌物、角膜浑浊；f）
消化系统：腹泻、厌食。
记录出现震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡和香迷的时间、严重程度，死广时间或恢复时间。濒临死亡和剧烈痛苦的动物以及试验结束尚存活的动物，最终应给予人道处死。6.5.2体重称量
应分别在染毒前、染毒后（至少每周次)和处死前称量并记录动物体重。6.5.3
病理学检查
在试验期内中毒死亡的和人道处死的动物应做大体解剖，记录每只动物的大体病理改变。染毒后3
KAONiKAca
GB/T15670.3—2017
存活时间大于或等于24h的动物其器官显示有大体病理改变，则需进行组织病理学检查，以便获取有关毒作用的信息。
7试验结果和评价
7.1结果统计
7.1.1最大似然比应用软件包（AOT425StatPgm）可直接计算正式试验LDs的点估计值和95%可信区间。
7.1.2将试验数据以表格形式列出，包括染毒剂量序列、使用动物数、每只动物的中毒表现、中毒表现出现时间、死亡动物数和时间、恢复时间以及大体解剖检查结果7.1.3软件包将根据上述表格列出的内容自动完成统计分析过程，7.2结果评价
LD。值是受试物毒性分级和标签标识的依据。急性经口毒性级别按照《农药登记资料规定》中3.3.2.8的相应标准判定。
评价试验结果时，应考虑LD与观察到的毒性效应（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应及其他毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。引用LDs值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒途径和观察期限等。8试验报告
试验报告至少应包括以下内容
试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号；a
试验委托单位和联系方式、样品受理日期和封样情况：b)
试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期；d)
试验摘要：
受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号（CAS号）（如已知）、代码（如有）、纯度（或含量）、e
剂型、生产日期（批号）、理化性质、配制所用溶剂和方法；实验动物的种属、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物质量合格证号、实f
验动物生产许可证号），检疫、适应情况，实验动物饲养环境，包括温度、相对湿度、饲料、单笼饲养或群养、实验动物设施许可证号；剂量和组别：包括选择剂量的原则或依据、动物分组方式、性别和动物数；g
h）试验条件和方法：包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标和计算LD%的方法等；
试验结果：以文字描述和表格逐项进行汇总，包括临床中毒表现，中毒表现出现、持续和恢复时间，染毒后出现死亡的时间，体重变化，与剂量的相关性以及大体解剖和组织病理学改变等，指出结果的统计处理方法；
试验结论：给出明确结论，如LD50，95%可信区间和毒性分级，必要时对有关问题进行讨论；i）
k）原始记录保存情况的说明。
iKAoNiKAca
附录A
（规范性附录
GB/T15670.32017
起始剂量为175mg/kg体重、斜率在1~8的剂量级数（mg/kg体重）表表A.1走
起始剂量为175mg/kg体重、斜率在1~8的剂量级数（mg/kg体重）表斜率1
斜率2
斜率3
斜率4
”如需要设计更低的剂量，可按剂量梯度递推斜率5
斜率6
斜率7
斜率8
-KAoNiKAca
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B.1最大似然法
附录B
（规范性附录）
正式试验LDso的计算
急性经口毒性试验应用软件包（AOT425StatPgm）是按照最大似然法编制的软件，可直接计算B.1.1
出LDso。在假定sigma（o）条件下进行最大似然比计算。所有的死亡动物，包括染毒后立即、延迟和人道处死的动物，均作为最大似然法分析的基本数据。B.1.2Dixons似然函数公式为：
式中：
在给定（总体均数)和。（标准差)的条件下，使用n只动物试验结果的似然函数；L,=1-F（Z,)(第i只存活动物的函数）,或L=F（Z.)（第i只死亡动物的函数)；F
累计标准正态分布；
Z,(logd,-μ)/as
第只动物的染毒剂量，
剂量对数单位的标准差（不是对数标准差）。(B.1)
注：用最大似然函数L的μ值计算LDs。真值的估计值，的估计值可设定为0.5,除非可以得到最佳的和指定的值。
以下情况不适宜统计学运算，可能给出错误的结果：B.1.3
用一个临界剂量重复试验并按终止试验的规定结束试验或在较高剂量终止试验，因此报告受a
试物的LDs超过上限值，并作出危害分类；引起动物死亡的剂量高于动物存活的剂量，LDs。则介乎二者之问，此试验不会给出精确的b)
LDs值（如果提供。值，也能计算最人似然比LDso估计值）；如果染毒动物的死亡和存活仅出现在同一剂量中，高于此剂量，动物全部死亡，低于此剂量，动C
物全部存活，LDs相当于此剂量。B.1.4除以上情况外，均可使用急性经口毒性试验应用软件包（AOT425StatPgm）进行最大似然函数计算。亦可使用SAS(即PROCNLIN)或BMDP(即programAR）或其他计算机程序包完成最大似然函数计算。在BASIC程序中需将作为参数编入程序，输出的结果是对数（LDs）的估计值及其标准误。
B.2可信区间（CD计算
B.2.1用AOT425StatPgm软件包运算得到正式试验的LDso估计值后，才有可能进行可信区间的计算，并为正式试验的可靠性、有效性提供有意义的信息。LDs可信区间范国大，表明所估计的LDs。可靠性和有效性存在较多的不确定性；可信区间范围较窄时，LDs。的不确定性微不足道，可靠性和有效性较高。当重复正式试验时，得到的LD的估计值更接近于原来测定的估计值，并且两者都更接近于LDs真值。
B.2.2估算真值LDso的区间估计值的两种方式：6
-TKAONIKAca
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至少进行了3个不同剂量的染毒试验，其中间的剂量至少有一只动物存活和一只动物死亡。a)
使用最大似然法计算可得到真值LDs和95%可信区间。由于使用实验动物数量的减少，可信区间值不太准确。随机终止试验的规定对此有一定的改善，但仍与真实的可信区间存在一些差异。
b）如果在某一剂量或比该剂量低一个级数剂量染毒的动物全部存活，而下一个较高剂量染毒的动物全部死亡，可信区间在二者之间。应视为近似区间，这种情况仅在剂量-反应斜率陡峭时出现。绝大多数情况下，真值LD。在计算区间内或者很接近。此区间相对较窄，其精确度能满足实际应用的需要。
B.2.3如试验中所用动物全部死亡或全部存活，可信区间可能报告为无限大或低端包括0在内的无限小，或两个结果皆有。
B.2.4如计算过程需要特殊程序完成，可借助于美国环保署（USEPA)和经济合作与发展组织（OECD）的相关软件专用程序进行运算。-KAoNiKAca
GB/T15670.3-2017
中华人民共和国
国家标准
农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验
序贯法
GB/T15670.3—2017
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16印张0.75字数17千字2017年7月第一次印刷
2017年7月第一版
书号：155066·1-54198定价16.00元由本社发行中心调换
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农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验
序贯法
Toxicological test methods for pesticides registration-Part 3:Acute oral toxicity test-Up-and-down-procedure2017-07-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-02-01实施
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：第1部分：总则；
第2部分：急性经口毒性试验
崔恩氏法：
第3部分：急性经口毒性试验序贯法；第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；
第6部分：急性吸人毒性试验；
第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验；第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验；第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验；第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验：第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验：第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验：第13部分：亚慢性毒性试验，
第14部分：细菌回复突变试验；第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验；第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验；第18部分：啮齿类动物显性致死试验；第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验；第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验；第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验；GB/T15670.3—2017
第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验；第23部分：致畸试验；
第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第26部分：慢性毒性试验；
第27部分：致癌试验；
第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验。本部分为GB/T15670的第3部分。本部分按照GB/T'1.1-2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：贺锡雯、张丽英、曲莞、陶传江。I
1范围
农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验序贯法GB/T15670.3—2017
GB/T15670的本部分规定了急性经口毒性试验序贯法的基本原则、方法和要求。本部分适用于为农药登记而进行的急性经口毒性试验。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用丁本文件。GB14925实验动物环境及设施
农药登记资料规定（中华人民共和国农业部令【20077第10号）3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
acute oral toxicity
急性经口毒性
一次或在24h内多次经口给于实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。3.2
剂量dose
所给受试物的量，以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。3.3
半数致死剂量
medianlethaldose
一次或在24h内多次给予实验动物受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量。以实验动物单位体重接受受试物的质量表示（mg/kg体重）。3.4
dose-responserelationship
剂量-反应关系
剂量与特定效应的发生率间的关系。4试验目的
急性经口毒性试验是评估受试物毒性的第一步。通过短时间经口染毒初步了解受试物的毒性特征和剂量-反应关系，为急性毒性分级、标签管理和其他毒理学试验剂量选择提供依据。5
试验概述
序贯法（up-and-down-procedureUDP）是一个阶梯式的染毒程序。使用单一性别的动物，一次染1
TKAoNrKAca
GB/T15670.3-—2017
毒一只。第一只动物的染毒剂量最好低于LD。的估计值。后续动物染毒剂量的增减，取决于前一只动物的染毒结果（存活或死亡）；在不能获得受试物LDsc的初步估计值及剂量-反应曲线斜率资料时，计算机摸拟结果提示起始剂量可选择175mg/kg体重，采用0.5的反对数（对应于个默认的剂量级数因子3.2)计算剂量间距。以最大似然法计算LD5的点估计值和95%可信区间。注：剂量级数因子由剂量-反应曲线斜率的倒数的反对数决定（3.2是斜率为2时的级数因子）。正式试验使用的动物数大约6只～9只。限量试验不超过5只。本方法仅适用于动物染毒后1d~2d内死亡的受试物，对预期染毒后死亡延迟至5d以上（含5d)的受试物不适用。6试验方法
6.1受试物
受试物可配制成水溶液、油溶液或悬浮液。尽可能选用水或食用油（如玉米油）作溶剂，其他如羧甲基纤维素钠、明胶和滤粉可将受试物配制成混悬液或糊剂。除水以外的溶剂，用前应了解其毒理学特性，必要时设立溶剂对照组。染毒时，不同浓度受试物现用现配。一次染毒容量不超过1mL/100g体重，水溶液可达到2mL/100g体重，通过调整受试物溶液的浓度，使各剂量组经口染毒的容量一致。如-次染毒容量太大可在24h内分2次～3次给予6.2实验动物
6.2.1种属和性别
啮齿类动物中可选用SU大鼠或Wist大鼠。
性别，通常
采用雕性动物（应为未妊娠和未经产的)，比较敏感。如有相关续的的化学物的毒理学、代谢和毒物动力力学研究证明雄性大鼠更敏感，可选择后者。
年龄和体重
8周一10周内，动物体重变异不超过动物平均体重的上20。按随机原则健康成年大鼠鼠龄在
逐只进入试验
6.3饲养环境和条件
动物饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定。喂饲常规动物饲料饮水量不限。试验前，人选动物在饲养环境中至少检疫、适应3d。6.4试验步骤
6.4.1限量试验
6.4.1.1受试物的一次染毒剂量为5000mg/kg体重。先给一只动物染毒，在染毒48h内动物存活，再给2只动物相同的剂量，观察14d，如动物依然存活可终止试验或在给相同剂量的2.只动物中，1只存活1只死亡，再追加2只动物，染毒的5只动物有大于或等于3只动物存活，可结束试验，表明该受试物的LDso>5000mg/kg体重。
6.4.1.2上述5只染毒动物中有3只动物分别在48h内死亡或死亡时间延迟在11d观察期内，终止染毒，进入正式试验。
6.4.2正式试验下载标准就来标准下载网
6.4.2.1试验前，大鼠禁食过夜，饮水不限。2
TTTKAONIKAca
GB/T15670.3—2017
6.4.2.2起始剂量和剂量级数因子的选择。在无法得到受试物致死剂量的估计值时，默认的起始剂量为175mg/kg体重。对应于剂量-反应斜率为2的级数因子3.2所设定的剂量序列为：1.75mg/kg体重，5.5mg/kg体重，17.5mg/kg体重，55mg/kg体重，175mg/kg体重，555mg/kg体重和2000mg/kg体重或1.75mg/kg体重，5.5mg/kg体重，17.5ing/kg体重，55mg/kg体重，175mg/kg体重，555mg/kg体重，1750mg/kg体重和5000mg/kg体重。如已知受试物的剂量-反应曲线斜率比较陡峭或较平坦，剂量级数因子可以缩小或加大。附录A列出了起始剂量为175mg/kg体重，斜率在1～8的剂量级数可供选择。
6.4.2.3试验开始，称量禁食后动物的体重，使用灌胃针头经口染毒，一次一只动物，每只动物的染毒间隔时间为48h。第二只动物染毒剂量取决于第一只动物的染毒结果，如动物死亡或呈濒死状态，剂量按级数因子下调一级；如动物存活，剂量上调一级。当后续剂量出现与起始剂量相反的染毒结果时，再追加4只动物序贯染毒后结束试验，或当达到任一终止试验的规定（见6.4.2.6）时，可结束试验。染毒后大鼠应继续禁食3h~1h、对每只动物的观察期为14d。6.4.2.4如染毒48h内动物存活，而在后续观察期内出现延迟死亡，表明剂量选择不合适，可考虑再给2只动物低于引起死二的剂量，重新开始试验，延长观察期。6.4.2.5试验结果以最大似然法（见附录B)计算该受试物的LDs。和95%可信区间。6.4.2.6符合下述任条件即可结束试验：a）在上限剂量范围的序优染毒中有3只动物存活时，b）在任取的6只序贯婴毒动物中出现，次相友结果时c）
在第一
次出现相反结果后至少有只动物序贯染毒，从带量的似然值，其给定的拟然化超过临界值LDso和斜率的变异大出现相反结果只一
次相反结果后，开始计算每一个剂动物序责染责即符合终止试验的规定。在有些情况下，受试物的剂量发顶曲线斜率平妞，可能需要追加动物达到15真6.5试验观察和检查
临床观察
在染毒后24h(特别在染毒后30mm内和第记录每只动物的中毒反应。
临床观察至少包括：
0及141的观察期内特天定时观察并详细a）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、震颤、抽措、麻痹、运动失调、对外反应过缴或迟钝异常行为如过度反复抓挠口周、梳理、转圈，甚至自残、倒退行走等；植物神经系统：脏孔扩大或缩小、流涎和流泪：b）
呼吸系统：鼻孔流液、鼻、鼻舆扇动呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰c
泌尿生殖系统：会阴部污移、有分泌物、阴道或乳房肿胀d)
皮肤和被毛：皮肤充血、紫、被毛蓬松或潮湿、污移e）
眼：眼球突出、结膜充血、溢血性分泌物、角膜浑浊；f）
消化系统：腹泻、厌食。
记录出现震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡和香迷的时间、严重程度，死广时间或恢复时间。濒临死亡和剧烈痛苦的动物以及试验结束尚存活的动物，最终应给予人道处死。6.5.2体重称量
应分别在染毒前、染毒后（至少每周次)和处死前称量并记录动物体重。6.5.3
病理学检查
在试验期内中毒死亡的和人道处死的动物应做大体解剖，记录每只动物的大体病理改变。染毒后3
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存活时间大于或等于24h的动物其器官显示有大体病理改变，则需进行组织病理学检查，以便获取有关毒作用的信息。
7试验结果和评价
7.1结果统计
7.1.1最大似然比应用软件包（AOT425StatPgm）可直接计算正式试验LDs的点估计值和95%可信区间。
7.1.2将试验数据以表格形式列出，包括染毒剂量序列、使用动物数、每只动物的中毒表现、中毒表现出现时间、死亡动物数和时间、恢复时间以及大体解剖检查结果7.1.3软件包将根据上述表格列出的内容自动完成统计分析过程，7.2结果评价
LD。值是受试物毒性分级和标签标识的依据。急性经口毒性级别按照《农药登记资料规定》中3.3.2.8的相应标准判定。
评价试验结果时，应考虑LD与观察到的毒性效应（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应及其他毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。引用LDs值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒途径和观察期限等。8试验报告
试验报告至少应包括以下内容
试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号；a
试验委托单位和联系方式、样品受理日期和封样情况：b)
试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期；d)
试验摘要：
受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号（CAS号）（如已知）、代码（如有）、纯度（或含量）、e
剂型、生产日期（批号）、理化性质、配制所用溶剂和方法；实验动物的种属、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物质量合格证号、实f
验动物生产许可证号），检疫、适应情况，实验动物饲养环境，包括温度、相对湿度、饲料、单笼饲养或群养、实验动物设施许可证号；剂量和组别：包括选择剂量的原则或依据、动物分组方式、性别和动物数；g
h）试验条件和方法：包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标和计算LD%的方法等；
试验结果：以文字描述和表格逐项进行汇总，包括临床中毒表现，中毒表现出现、持续和恢复时间，染毒后出现死亡的时间，体重变化，与剂量的相关性以及大体解剖和组织病理学改变等，指出结果的统计处理方法；
试验结论：给出明确结论，如LD50，95%可信区间和毒性分级，必要时对有关问题进行讨论；i）
k）原始记录保存情况的说明。
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附录A
（规范性附录
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起始剂量为175mg/kg体重、斜率在1~8的剂量级数（mg/kg体重）表表A.1走
起始剂量为175mg/kg体重、斜率在1~8的剂量级数（mg/kg体重）表斜率1
斜率2
斜率3
斜率4
”如需要设计更低的剂量，可按剂量梯度递推斜率5
斜率6
斜率7
斜率8
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B.1最大似然法
附录B
（规范性附录）
正式试验LDso的计算
急性经口毒性试验应用软件包（AOT425StatPgm）是按照最大似然法编制的软件，可直接计算B.1.1
出LDso。在假定sigma（o）条件下进行最大似然比计算。所有的死亡动物，包括染毒后立即、延迟和人道处死的动物，均作为最大似然法分析的基本数据。B.1.2Dixons似然函数公式为：
式中：
在给定（总体均数)和。（标准差)的条件下，使用n只动物试验结果的似然函数；L,=1-F（Z,)(第i只存活动物的函数）,或L=F（Z.)（第i只死亡动物的函数)；F
累计标准正态分布；
Z,(logd,-μ)/as
第只动物的染毒剂量，
剂量对数单位的标准差（不是对数标准差）。(B.1)
注：用最大似然函数L的μ值计算LDs。真值的估计值，的估计值可设定为0.5,除非可以得到最佳的和指定的值。
以下情况不适宜统计学运算，可能给出错误的结果：B.1.3
用一个临界剂量重复试验并按终止试验的规定结束试验或在较高剂量终止试验，因此报告受a
试物的LDs超过上限值，并作出危害分类；引起动物死亡的剂量高于动物存活的剂量，LDs。则介乎二者之问，此试验不会给出精确的b)
LDs值（如果提供。值，也能计算最人似然比LDso估计值）；如果染毒动物的死亡和存活仅出现在同一剂量中，高于此剂量，动物全部死亡，低于此剂量，动C
物全部存活，LDs相当于此剂量。B.1.4除以上情况外，均可使用急性经口毒性试验应用软件包（AOT425StatPgm）进行最大似然函数计算。亦可使用SAS(即PROCNLIN)或BMDP(即programAR）或其他计算机程序包完成最大似然函数计算。在BASIC程序中需将作为参数编入程序，输出的结果是对数（LDs）的估计值及其标准误。
B.2可信区间（CD计算
B.2.1用AOT425StatPgm软件包运算得到正式试验的LDso估计值后，才有可能进行可信区间的计算，并为正式试验的可靠性、有效性提供有意义的信息。LDs可信区间范国大，表明所估计的LDs。可靠性和有效性存在较多的不确定性；可信区间范围较窄时，LDs。的不确定性微不足道，可靠性和有效性较高。当重复正式试验时，得到的LD的估计值更接近于原来测定的估计值，并且两者都更接近于LDs真值。
B.2.2估算真值LDso的区间估计值的两种方式：6
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至少进行了3个不同剂量的染毒试验，其中间的剂量至少有一只动物存活和一只动物死亡。a)
使用最大似然法计算可得到真值LDs和95%可信区间。由于使用实验动物数量的减少，可信区间值不太准确。随机终止试验的规定对此有一定的改善，但仍与真实的可信区间存在一些差异。
b）如果在某一剂量或比该剂量低一个级数剂量染毒的动物全部存活，而下一个较高剂量染毒的动物全部死亡，可信区间在二者之间。应视为近似区间，这种情况仅在剂量-反应斜率陡峭时出现。绝大多数情况下，真值LD。在计算区间内或者很接近。此区间相对较窄，其精确度能满足实际应用的需要。
B.2.3如试验中所用动物全部死亡或全部存活，可信区间可能报告为无限大或低端包括0在内的无限小，或两个结果皆有。
B.2.4如计算过程需要特殊程序完成，可借助于美国环保署（USEPA)和经济合作与发展组织（OECD）的相关软件专用程序进行运算。-KAoNiKAca
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中华人民共和国
国家标准
农药登记毒理学试验方法
第3部分：急性经口毒性试验
序贯法
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开本880×12301/16印张0.75字数17千字2017年7月第一次印刷
2017年7月第一版
书号：155066·1-54198定价16.00元由本社发行中心调换
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