GB/T 34757-2017
基本信息
标准号： GB/T 34757-2017
中文名称：猪流行性腹泻 病毒RT-PCR检测方法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 34757-2017 猪流行性腹泻 病毒RT-PCR检测方法
GB/T34757-2017
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标准内容
ICS11.220
中华人民共和国国家标准
GB/T34757—2017
猪流行性腹泻
病毒RT-PCR检测方法
Porcine epidemic diarrhea-RT-PCR for detecting virus acid2017-11-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-05-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。GB/T34757—2017
本标准起草单位：东北农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、河南收业经济学院、河南农业大学。
本标准主要起草人：李一经、邵卫星、魏荣、宋建德、姜艳平、袁丽萍、唐丽杰、乔薪瑷、崔文、徐耀辉、吴发兴、张志、孙映雪、魏战勇、李晓成。1范围
猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法GB/T34757—2017
本标准规定了猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的仪器、试剂、样品的采集和处理、RT-PCR程序、电泳及结果判定的技术要求。本标准适用于快速检测猪临床样品（猪小肠和新鲜粪便）或细胞培养物中猪流行性腹泻病毒核酸，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AMV：鸟类RNA病毒反转录酶（avianmyeloblastosisvirus）bp：碱基对（basepair）
DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）dNTPs：4种脱氧核糖核苷三磷酸混合物（deoxyribonucleosidetriphosphates）PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatc-huffcrcdsalinebuffer）RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（reversetranscriptase-polymerasechainreaction）RRI:RNA酶抑制剂(rnaseribonucleaseinhibitor)Tag酶：TaqDNA聚合酶（TagDNApolymerase)4仪器
PCR扩增仪。
高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000r/min以上。4.2
组织研磨器或者研钵
冰箱2℃~8℃冰箱和一70℃以下超低温冰箱。4.4
4.5核酸电泳仪和水平电泳槽。
4.6微量移液器量程分别0.2~2μ、110、10100、20L~200和100μ~1000μL的移液器，并配备与移液器相匹配的吸头。高压灭菌锅
凝胶成像系统（或紫外透射仪）。1
KAoNiKAca
GB/T34757—2017
5耗材
5.11.5mL无RNA酶离心管，
5.20.2mLPCR管。
6试剂
除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯。提取病毒RNA所用试剂应使用无RNA酶的容器进行分装。
6.1水GB/T6682，三级水
病毒裂解液：商品化RNA提取试剂盒，4℃～8℃保存6.3
氯仿：常温保存
6.4异丙醇：使用前预冷至
无水乙醇
20顶冷。
75%乙醇：无水
醇和双蒸水配制，一20C预冷。
塑转录酶及倍逆转录酶反应缓冲液条20保存，避免反复漆水：购买商品化DEPC水
10倍Taq酶反应缓冲液
C保存，避免反复冻融。
含 dATPdGTPdOTP,dT
保存，避免反复冻融
10mmalm，一20保存避免反复冻融手量标准：DL20006p
磷酸盐缓冲液（PBS）配制现
电泳缓冲液（TAE）：配方及配制方法见处理液
配方及配制见A3
1%琼脂糖凝胶板配制见A.4
引物：见附录
猪流行性腹泻病毒阳性样品及阴性样品：阳性样品的制备参见C.1，阳性样品的制备参见C.2.6.18
阳性样品和阴性样品可由标准编制单位或国家指定实验室提供。7样品采集和处理
采样工具
手术刀、剪刀，镊子，经160℃干热灭菌2h。7.1.2
注射器。
一次性无菌采样拭子。
组织研磨器或者研钵，经160C干热灭菌2h。样品采集
宜采集腹泻急性期的小肠（5.0cm~10.0cm）或新鲜粪便（5.0g~10.0g），放到密封袋中。7.3样品运输
将含有样品的密封袋置于带有冰袋的样品运输箱中，送至实验室。样品的运送应在低温保存条件2
TTiKAONhiKAca
下进行，样品被运到实验室时，所附带的冰袋应没有完全融化，7.4样品保存
7.4.1采样点保存
GB/T34757—2017
样品不能被及时送到实验空时，应置于一20℃冰箱中保存，保存期应不超过1个月；如需长期保存样品，应置于一70℃冰箱。
7.4.2实验室保存
7.2中采集的样品可立即用于检测。不能立即检测的样品，在2℃～8℃下保存应不超过24h，一20℃±5℃下应不超过1个月，一70℃以下可长期保存。7.5样品处理
7.5.1小肠样品的处理
取5.0cm10.0cm小肠组织，用剪刀剪碎，加人5.0mL～10.0mL的PBS，用组织研磨器或研体研磨后转移到小玻璃瓶中，一20℃反复冻融3次后摇匀，取1.0mL小肠组织液到1.5mL离心管中，经12000r/min离心5min，取500μL上清备用。7.5.2粪便样品的处理
取0.5g~1.0g新鲜类便，加入到含5.0mL~10.0mL样品处理液（配方见A.3）的玻璃瓶中，一20℃反复冻融3次后摇匀，取1.0mL处理过的类便样品到1.5mL离心管中，经12000r/min离心5min，取500uL上清备用。
8RT-PCR操作程序
8.1RNA的提取
选择市售商品化RNA提取试剂盒，按照试剂盒操作说明书提取样品中的RNA，在提取RNA时，应设立阳性和阴性对照样品，按同样的方法提取RNA。RNA提取操作应在通风柜或生物安全柜中进行，避免RNA气溶胶的污染。
8.2反转录（RT）
反转录引物序列下游引物P2，见附录B。8.2.2RT反应体系反转录的反应体系参见附录D8.2.3RT反应程序42C水浴1h，70C灭活15min，结束反应。可以直接进行PCR，或者放于一20℃保存备用。试验中设阳性和阴性对照，8.3聚合酶链式反应（PCR）
PCR引物序列
见附录B。
2PCR反应体系参见附录D。
3PCR反应程序95C预变性5min后进入PCR循环，94℃变性30s，52.5℃C退火30s，72℃C延8.3.3
伸30s，30个循环，最后72℃终延伸10min，结束反应。同时设空白对照。1%琼脂糖电泳分析结果。3Www.bzxZ.net
-iKAoNrKAca
GB/T34757—2017
9电泳
9.1制备1.0%琼脂糖凝胶板，见附录A。9.2取10.0LPCR产物与2.0μL市售的DNA上样缓冲液（6×）混合，加人到琼脂糖凝胶板的加样孔中，同时加人DNA分子量标准作对照9.3盖好电泳仪，插好电极，电压为5V/cm~10V/cm，时间为30min。9.4用紫外凝胶成像系统对图片拍照、存档。9.5
用分子量标比较判断PCR片段大小。10
结果判定
试验成立的条件
315bp的扩增条带，阴性对照没有相应条带，否则试验不成立。阳性对照有
10.2样品检测结果
在阳性对照，阴性对照都成立的前提下，若检测样品有315肺的条带，则判定该样品猪流行性腹泻（参见图工1如需要，可对增的条带进行回收，克隆到工载体，进行测病毒核酸阳性，否则为阴性
序，所得序列与附录E中的猪流行性腹与病毒M基因的序列近行同源性比较以进步确定样品检测结果。
KAoMiKAca
附录A
（规范性附录）
溶液的配制
磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol/L、pH7.4）的配制A.1
GB/T34757—2017
准确称量下面各试剂，加入到800mL蒸馏水中溶解，用盐酸调节溶液的pH至7.4.加水至1L。分装后在121℃灭菌20min，或过滤除菌，保存于室温。磷酸二氢钾（KH,PO）
磷酸氢二钠（NazHPO：12H.O)
氯化钠（NaCI
氯化钾（KCI）
蒸馏水
1×电泳缓冲液（TAE的配制
加至1000.00mL
AE50×）忙液使用时再用蒸逼水稀释成+美电泳缓冲液1TAE的配制（50X）：准先配制
确称量242gTris碱、57.1m的冰艺酸100m0.5mOVLEDTAH80加人蒸罐水至1L，室温放置备用。
3样品处理液的配制
准确称量下面各试剂，加丢离子水定容至200mL，121氯化钠
氯化钾
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
乙二胺四乙酸
1%琼脂糖凝胶板的制备
灭菌20min后室温放量备用
准确称取1g琼脂糖，加入100mL1XTAE，在微波炉中加热，使琼脂糖充分溶解，取出，加入适量的染料，混勾，倒入制胶板中。5
-KAoNiKAca
GB/T347572017
附录B
（规范性附录）
检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列见表B.1。表B.1
检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列引物名称
上游引物PI
下游引物P?
引物浓度
20pmol/μL
20pmol/uL
注：扩增片段为M基因保守区，大小为315bp。6
引物序列
5-TATGGCTTGCATCACTCTTA-3
5-TTGACTGAACGACCAACACG3
irkAoNrKAca
阳性样品制备
附录C
（资料性附录）
猪流行性腹泻病毒阳性样品和阴性样品GB/T34757—2017
取猪流行性腹泻病毒（PEDV)，用100mL的PBS稀释至1个病毒半数组织细胞感染量（TCIDs。），向其中加入不含PEDV的猪粪便10g，摇匀，分装，0.5mL/管，备用C.2
阴性样品制备
o的比例稀释不含PEDV的猪粪便，播勾，分装，0.5mL/管，备用用PBS按10
-KAoNiKAca
GB/T34757—2017
RT反应体系
dNTPs (10 mmol/L)
RNA酶抑制剂(RRD)
5×反应缓冲液
AMV反转录酶
下游引物P2(见附录B)
DEPC水
总体积
PCR反应体系
反转录产物
附录D
（资料性附录）
检测方法的RT和PCR反应体系
20 μL
TaqDNA聚合酶反应缓冲液（10X）dNTPs(10mmol/L)
上游引物P1（见附录B）
下游引物P2（见附录B）
TaqDNA聚合酶
灭菌去离子水
总体积
附录E
（资料性附录）
检测样品电泳例图及核苷酸序列检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳例图E.1
检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳例图见图E.1。M
说明：
DNA分子量标准DL2000
小肠组织样品；
粪便样品；
阳性样品对照；
阴性对照。
检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳图图E.1
E.2猪流行性腹泻病毒M基因第249~563位核苷酸序列（参考CV777株）GB/T34757—2017
TATGGCCTGCATCACTCTTATGCTGCGGATAATGTATTTTGTCAATAGCATTCGGTTGTGGCGCAGGACACATTCTTGGTGGTCTTTCAACCCTGAAACTGACGCGCTTCTCACTACTTCTGTGATGGGCCGACAGGTTTGCATTCCAGTGCTTGGAGCACCAACTGGTGTAACGCTAACACTCCTTAGTGGTACGTTGCTTGTAGAGGGCTATAAGGTTGCTACTGGCGTACAGGTAAGTCAATTACCTAATTTCGTCACAGTCGCCAAGGCCACTACAACAATTGTCTACGGACGTGTTGGTCGTTCAGTCAA(315bp)
GB/T34757-2017
中华人民共和国
国家标准
猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法GB/T34757—2017
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
总编室：（010)68533533
发行中心：（010)51786238
读者服务部：(010)68523946
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×1230
印张1
字数20千学
2017年11月第一版
2017年11月第一次印刷
书号：155066·1-57508
8定价
如有印装差错
由本社发行中心调换
版权专有
侵权必究
举报电话：（010)68510107
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中华人民共和国国家标准
GB/T34757—2017
猪流行性腹泻
病毒RT-PCR检测方法
Porcine epidemic diarrhea-RT-PCR for detecting virus acid2017-11-01发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-05-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。GB/T34757—2017
本标准起草单位：东北农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、河南收业经济学院、河南农业大学。
本标准主要起草人：李一经、邵卫星、魏荣、宋建德、姜艳平、袁丽萍、唐丽杰、乔薪瑷、崔文、徐耀辉、吴发兴、张志、孙映雪、魏战勇、李晓成。1范围
猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法GB/T34757—2017
本标准规定了猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的仪器、试剂、样品的采集和处理、RT-PCR程序、电泳及结果判定的技术要求。本标准适用于快速检测猪临床样品（猪小肠和新鲜粪便）或细胞培养物中猪流行性腹泻病毒核酸，2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AMV：鸟类RNA病毒反转录酶（avianmyeloblastosisvirus）bp：碱基对（basepair）
DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）dNTPs：4种脱氧核糖核苷三磷酸混合物（deoxyribonucleosidetriphosphates）PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatc-huffcrcdsalinebuffer）RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（reversetranscriptase-polymerasechainreaction）RRI:RNA酶抑制剂(rnaseribonucleaseinhibitor)Tag酶：TaqDNA聚合酶（TagDNApolymerase)4仪器
PCR扩增仪。
高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000r/min以上。4.2
组织研磨器或者研钵
冰箱2℃~8℃冰箱和一70℃以下超低温冰箱。4.4
4.5核酸电泳仪和水平电泳槽。
4.6微量移液器量程分别0.2~2μ、110、10100、20L~200和100μ~1000μL的移液器，并配备与移液器相匹配的吸头。高压灭菌锅
凝胶成像系统（或紫外透射仪）。1
KAoNiKAca
GB/T34757—2017
5耗材
5.11.5mL无RNA酶离心管，
5.20.2mLPCR管。
6试剂
除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯。提取病毒RNA所用试剂应使用无RNA酶的容器进行分装。
6.1水GB/T6682，三级水
病毒裂解液：商品化RNA提取试剂盒，4℃～8℃保存6.3
氯仿：常温保存
6.4异丙醇：使用前预冷至
无水乙醇
20顶冷。
75%乙醇：无水
醇和双蒸水配制，一20C预冷。
塑转录酶及倍逆转录酶反应缓冲液条20保存，避免反复漆水：购买商品化DEPC水
10倍Taq酶反应缓冲液
C保存，避免反复冻融。
含 dATPdGTPdOTP,dT
保存，避免反复冻融
10mmalm，一20保存避免反复冻融手量标准：DL20006p
磷酸盐缓冲液（PBS）配制现
电泳缓冲液（TAE）：配方及配制方法见处理液
配方及配制见A3
1%琼脂糖凝胶板配制见A.4
引物：见附录
猪流行性腹泻病毒阳性样品及阴性样品：阳性样品的制备参见C.1，阳性样品的制备参见C.2.6.18
阳性样品和阴性样品可由标准编制单位或国家指定实验室提供。7样品采集和处理
采样工具
手术刀、剪刀，镊子，经160℃干热灭菌2h。7.1.2
注射器。
一次性无菌采样拭子。
组织研磨器或者研钵，经160C干热灭菌2h。样品采集
宜采集腹泻急性期的小肠（5.0cm~10.0cm）或新鲜粪便（5.0g~10.0g），放到密封袋中。7.3样品运输
将含有样品的密封袋置于带有冰袋的样品运输箱中，送至实验室。样品的运送应在低温保存条件2
TTiKAONhiKAca
下进行，样品被运到实验室时，所附带的冰袋应没有完全融化，7.4样品保存
7.4.1采样点保存
GB/T34757—2017
样品不能被及时送到实验空时，应置于一20℃冰箱中保存，保存期应不超过1个月；如需长期保存样品，应置于一70℃冰箱。
7.4.2实验室保存
7.2中采集的样品可立即用于检测。不能立即检测的样品，在2℃～8℃下保存应不超过24h，一20℃±5℃下应不超过1个月，一70℃以下可长期保存。7.5样品处理
7.5.1小肠样品的处理
取5.0cm10.0cm小肠组织，用剪刀剪碎，加人5.0mL～10.0mL的PBS，用组织研磨器或研体研磨后转移到小玻璃瓶中，一20℃反复冻融3次后摇匀，取1.0mL小肠组织液到1.5mL离心管中，经12000r/min离心5min，取500μL上清备用。7.5.2粪便样品的处理
取0.5g~1.0g新鲜类便，加入到含5.0mL~10.0mL样品处理液（配方见A.3）的玻璃瓶中，一20℃反复冻融3次后摇匀，取1.0mL处理过的类便样品到1.5mL离心管中，经12000r/min离心5min，取500uL上清备用。
8RT-PCR操作程序
8.1RNA的提取
选择市售商品化RNA提取试剂盒，按照试剂盒操作说明书提取样品中的RNA，在提取RNA时，应设立阳性和阴性对照样品，按同样的方法提取RNA。RNA提取操作应在通风柜或生物安全柜中进行，避免RNA气溶胶的污染。
8.2反转录（RT）
反转录引物序列下游引物P2，见附录B。8.2.2RT反应体系反转录的反应体系参见附录D8.2.3RT反应程序42C水浴1h，70C灭活15min，结束反应。可以直接进行PCR，或者放于一20℃保存备用。试验中设阳性和阴性对照，8.3聚合酶链式反应（PCR）
PCR引物序列
见附录B。
2PCR反应体系参见附录D。
3PCR反应程序95C预变性5min后进入PCR循环，94℃变性30s，52.5℃C退火30s，72℃C延8.3.3
伸30s，30个循环，最后72℃终延伸10min，结束反应。同时设空白对照。1%琼脂糖电泳分析结果。3Www.bzxZ.net
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9电泳
9.1制备1.0%琼脂糖凝胶板，见附录A。9.2取10.0LPCR产物与2.0μL市售的DNA上样缓冲液（6×）混合，加人到琼脂糖凝胶板的加样孔中，同时加人DNA分子量标准作对照9.3盖好电泳仪，插好电极，电压为5V/cm~10V/cm，时间为30min。9.4用紫外凝胶成像系统对图片拍照、存档。9.5
用分子量标比较判断PCR片段大小。10
结果判定
试验成立的条件
315bp的扩增条带，阴性对照没有相应条带，否则试验不成立。阳性对照有
10.2样品检测结果
在阳性对照，阴性对照都成立的前提下，若检测样品有315肺的条带，则判定该样品猪流行性腹泻（参见图工1如需要，可对增的条带进行回收，克隆到工载体，进行测病毒核酸阳性，否则为阴性
序，所得序列与附录E中的猪流行性腹与病毒M基因的序列近行同源性比较以进步确定样品检测结果。
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附录A
（规范性附录）
溶液的配制
磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol/L、pH7.4）的配制A.1
GB/T34757—2017
准确称量下面各试剂，加入到800mL蒸馏水中溶解，用盐酸调节溶液的pH至7.4.加水至1L。分装后在121℃灭菌20min，或过滤除菌，保存于室温。磷酸二氢钾（KH,PO）
磷酸氢二钠（NazHPO：12H.O)
氯化钠（NaCI
氯化钾（KCI）
蒸馏水
1×电泳缓冲液（TAE的配制
加至1000.00mL
AE50×）忙液使用时再用蒸逼水稀释成+美电泳缓冲液1TAE的配制（50X）：准先配制
确称量242gTris碱、57.1m的冰艺酸100m0.5mOVLEDTAH80加人蒸罐水至1L，室温放置备用。
3样品处理液的配制
准确称量下面各试剂，加丢离子水定容至200mL，121氯化钠
氯化钾
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
乙二胺四乙酸
1%琼脂糖凝胶板的制备
灭菌20min后室温放量备用
准确称取1g琼脂糖，加入100mL1XTAE，在微波炉中加热，使琼脂糖充分溶解，取出，加入适量的染料，混勾，倒入制胶板中。5
-KAoNiKAca
GB/T347572017
附录B
（规范性附录）
检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列见表B.1。表B.1
检测猪流行性腹泻病毒RT-PCR方法的引物序列引物名称
上游引物PI
下游引物P?
引物浓度
20pmol/μL
20pmol/uL
注：扩增片段为M基因保守区，大小为315bp。6
引物序列
5-TATGGCTTGCATCACTCTTA-3
5-TTGACTGAACGACCAACACG3
irkAoNrKAca
阳性样品制备
附录C
（资料性附录）
猪流行性腹泻病毒阳性样品和阴性样品GB/T34757—2017
取猪流行性腹泻病毒（PEDV)，用100mL的PBS稀释至1个病毒半数组织细胞感染量（TCIDs。），向其中加入不含PEDV的猪粪便10g，摇匀，分装，0.5mL/管，备用C.2
阴性样品制备
o的比例稀释不含PEDV的猪粪便，播勾，分装，0.5mL/管，备用用PBS按10
-KAoNiKAca
GB/T34757—2017
RT反应体系
dNTPs (10 mmol/L)
RNA酶抑制剂(RRD)
5×反应缓冲液
AMV反转录酶
下游引物P2(见附录B)
DEPC水
总体积
PCR反应体系
反转录产物
附录D
（资料性附录）
检测方法的RT和PCR反应体系
20 μL
TaqDNA聚合酶反应缓冲液（10X）dNTPs(10mmol/L)
上游引物P1（见附录B）
下游引物P2（见附录B）
TaqDNA聚合酶
灭菌去离子水
总体积
附录E
（资料性附录）
检测样品电泳例图及核苷酸序列检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳例图E.1
检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳例图见图E.1。M
说明：
DNA分子量标准DL2000
小肠组织样品；
粪便样品；
阳性样品对照；
阴性对照。
检测样品中猪流行性腹泻病毒电泳图图E.1
E.2猪流行性腹泻病毒M基因第249~563位核苷酸序列（参考CV777株）GB/T34757—2017
TATGGCCTGCATCACTCTTATGCTGCGGATAATGTATTTTGTCAATAGCATTCGGTTGTGGCGCAGGACACATTCTTGGTGGTCTTTCAACCCTGAAACTGACGCGCTTCTCACTACTTCTGTGATGGGCCGACAGGTTTGCATTCCAGTGCTTGGAGCACCAACTGGTGTAACGCTAACACTCCTTAGTGGTACGTTGCTTGTAGAGGGCTATAAGGTTGCTACTGGCGTACAGGTAAGTCAATTACCTAATTTCGTCACAGTCGCCAAGGCCACTACAACAATTGTCTACGGACGTGTTGGTCGTTCAGTCAA(315bp)
GB/T34757-2017
中华人民共和国
国家标准
猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法GB/T34757—2017
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开本880×1230
印张1
字数20千学
2017年11月第一版
2017年11月第一次印刷
书号：155066·1-57508
8定价
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