GB/T 35800-2018
基本信息
标准号： GB/T 35800-2018
中文名称：化妆品中防腐剂己脒定和氯己定及其盐类的测定 高效液相色谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
GB/T 35800-2018 化妆品中防腐剂己脒定和氯己定及其盐类的测定 高效液相色谱法
GB/T35800-2018
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标准内容
ICS71.100.70
中华人民共和国国家标准
GB/T35800—2018
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及其盐类的测定
高效液相色谱法
Determination of hexamidine, chlorhexidine and their salts as preservatives incosmetics-Highperformanceliquidchromatography2018-02-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-09-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所本标准主要起草人：孟宪双、马强、白桦、张庆、肖海清、赵卫哲、孙雨婷、沈敏，GB/T35800—2018
1范围
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及其盐类的测定
高效液相色谱法
GB/T35800—2018
本标准规定了化妆品中防腐剂已胀定和氯已定及其盐类的高效液相色谱测定方法。本标准适用于水剂、膏霜、香波、散粉和唇膏类化妆品中防腐剂已胀定和氯已定及其盐类的测定。本标准的检出限和定量限：已定和氯己定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.004%2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样经溶剂提取、离心、微孔滤膜过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛：色谱纯。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3四氢喃。
4.4三氟乙酸。
4.5氯化钠。
4.6饱和氯化钠溶液：称取40g氯化钠（4.5），置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用4.7已定二（羟乙基磺酸）盐和氯已定的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量参见附录A中的表A,1,结构式参见附录A中的图A.1。4.8已定和氯已定标准储备溶液（1000mg/L）：称取已胖定二（羟乙基磺酸）盐标准品（4.7）17.1mg（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度称取氯已定标准品10.0mg（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，均于4℃避光保存，可使用3个月。4.9已定和氯已定混合标准溶液：分别移取1ml.已滕定和氯已定标准储备溶液（4.8）至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度，根据需要用甲醇（4.2）稀释成适宜浓度的混合标准工作溶液，于4℃避光保存，可使用3个月。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪（HPLC)：配有二极管阵列检测器。1
TYKAOIKAca
GB/T35800—2018
液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪：配有电喷雾离子源（ESI)。超声波水浴。
5.4离心机：转速不低于5000r/min。5.5涡旋混合器。
分析天平：感量为0.0001g和0.001g。5.6
具塞聚四氟乙烯离心管：50mL。微孔滤膜：0.45mm，材质为尼龙。6
测定步骤
样品处理
水剂、膏霜、香波和散粉类样品称取0.5g（精确至0001g）试样于50mL具塞聚四氟乙烯离心管（5.中，加人1mL饱和氯化钠溶液（4.6），涡旋混合，再加入9mL水，涡旋混合后，以5000/min离心10min，上清液转移至另50mL具塞聚四氟乙烯离心管中。试样残渣继续加人10mL甲醇（4.2）在超产波水洛（5.3）中超声提取20min，以50001/min高心10mm，合开士清液经0.15um微礼滤膜（8）过滤，供高效液相色谱测定。
唇君类样品
0.5g精确至0.001
手手50
涡旋混合，再加人8mL水，辆旋混合后，以5乙烯离心管中。
试样残渣维续加人
5000r/min离心10min，合并
塞聚四第
烯离心管（5.
tomin，
J0omin
峡喃（4.3），
加人2mL四氛
清液转移至另
甲醇（4.2）在超声波水浴（
上清液经61
测定条件
高效液相色谱测定条件如下：
微孔滤膜
具塞聚四氟
50mL具
提取20min，以
8）过滤，供高效液相色谱测定，色谱柱xTerraMsCis，5μm，250mm×4.6mm（内径），或相当a）
流动相：见表1；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：260nm；
进样量：10μL。
流动相
时间/min
水（含0.1%三氟乙酸）/%
乙晴（含0.1%三氟乙酸）/%
irkoNiKca
6.3标准曲线的绘制
GB/T35800—2018
用中醇将已定和氯己定标准储备溶液逐级稀释得到浓度为0.5ug/mL、1ug/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的标准工作溶液，按6.2测定条件浓度由低到高进样测定，以色谱峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作图，得到标准曲线回归方程。已定和氯己定的液相色谱图参见附录B的图B.1。6.4测定
按6.2测定条件对待测样液进行测定，如果检出已定和氛已定的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图电该物质的紫外吸收光谱图与标准品一致，则可初步认定样品中存在相对应的目标分析物，外标法定量，待测试样中二咪定和氯已定及其盐类的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。必要时阳性样品需用液相色谱质谱进行确认试验。确认试验参见附录C。
定的选择离子质量色谱图参见图C.1。已胖定和氯己
6.5空白试验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进有7结果计算
结果按武（1）计算，计竟结
式中：
两位小数
算结果应扣除空白件
战样中被测已定和氛已定及其盐类的旨分比否量（分别以已胀是和象已定），%；从标准工作曲线工查山的试样中己定和氧己定的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)：样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；试样的质量，单位为克（g）。
8检出限和定量限
已胖定和氯己定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.00409回收率和精密度
在添加浓度0.004%～0.3%范围内：已定和氯已定及其盐类的回收率在84.1%～99.7%之间，相对标准偏差为1.1%～7.8%。
10允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。3
-KAoNrKAca
GB/T35800—2018
附录A
（资料性附录）
己胖定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定标准品的基本信息已滕定二（羟乙基磺酸）盐和氯已定标准品的基本信息见表A.1和图A.1。表A,1已胖定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定的CAS号、分子式、结构式及相对分子质量等信息中文名称
已胀定二（羟乙基磺酸）盐
氯己定
英文名称
Hexamidine disethionate
Chlorhexidine
CAS号
659405
55-56-1
已定二（羟乙基磺酸）盐
氯已定
分子式
C2H2N,O,2C,HO,S
CaHa.Cl,Nio
己定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定的结构式相对分子质量
-rKAoNiKAca
附录B
（资料性附录）
已胖定和氯己定的液相色谱图
已咪定和氯已定的液相色谱图见图B.1。20.8
说明：
己定；
氯己定。
己定和氯己定的液相色谱图
GB/T35800—2018
i=260 mm
-rKAoNiKAca
GB/T35800-—2018
液相色谱条件
液相色谱测定的参考条件如下：a)
附录C
（资料性附录）
确认试验
色谱柱：XBridgeCia柱，150mmX2.1mm（内径），3.5μm，或相当者；流动相：0.1%三氟乙酸-水（A）和0.1%三氟乙酸-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；
柱温：30C；
进样量：5μL；
梯度洗脱程序见表C.1。
时间/min
质谱条件
质谱测定的参考条件如下：
电离方式：电喷雾电离；
毛细管电压：3.0kV；
萃取电压：3.0V；
离子源温度：150℃；
梯度洗脱程序
脱溶剂气：氮气，流速1000L/h，温度500℃；锥孔气：氮气，流速50L/h；
碰撞气：氩气；
扫描模式：多反应监测（MRM），定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表C.2。表C.2
物质名称
己滕定
氯己定
电离方式
丰度较高离子。
保留时间
已胖定和氯己定的串联质谱分析参数母离子
子离子
338.2,120.2此内容来自标准下载网
353.2，336.2
锥孔电压
碰撞能量
21，21
16，20
离子丰
84，100
iikAoNiKca
C.3定性判定
GB/T35800—2018
按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（变化范围在土2.5%之内），且试样中目标化合物两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度致，则可判断样品中存在相应的目标化合物。已定和氯己定的选择离子质量色谱图参见图C.1。100
355.0>120.2
说明：
已魅定：
氯已是。
355.0>338.2
505.0>336.2
505.0>353.2
已定和氯己定的选择离子质量色谱图/min
rrKAONrKAca
GB/T35800-2018
中华人民共和国
国家标准
化妆品中防腐剂已定和氯己定及其盐类的测定高效液相色谱法
GB/T35800—2018
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
总编室：（010)68533533发行中心：（010)51780238读者服务部：（010)68523946
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16印张0.75字数16千字2018年2月第一版2018年2月第一次印刷*
书号：1550661-59281定价
由本社发行中心调换
如有印装差错
版权专有
侵权必究
举报电话：（010)68510107
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中华人民共和国国家标准
GB/T35800—2018
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及其盐类的测定
高效液相色谱法
Determination of hexamidine, chlorhexidine and their salts as preservatives incosmetics-Highperformanceliquidchromatography2018-02-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-09-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所本标准主要起草人：孟宪双、马强、白桦、张庆、肖海清、赵卫哲、孙雨婷、沈敏，GB/T35800—2018
1范围
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及其盐类的测定
高效液相色谱法
GB/T35800—2018
本标准规定了化妆品中防腐剂已胀定和氯已定及其盐类的高效液相色谱测定方法。本标准适用于水剂、膏霜、香波、散粉和唇膏类化妆品中防腐剂已胀定和氯已定及其盐类的测定。本标准的检出限和定量限：已定和氯己定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.004%2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样经溶剂提取、离心、微孔滤膜过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙睛：色谱纯。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3四氢喃。
4.4三氟乙酸。
4.5氯化钠。
4.6饱和氯化钠溶液：称取40g氯化钠（4.5），置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用4.7已定二（羟乙基磺酸）盐和氯已定的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量参见附录A中的表A,1,结构式参见附录A中的图A.1。4.8已定和氯已定标准储备溶液（1000mg/L）：称取已胖定二（羟乙基磺酸）盐标准品（4.7）17.1mg（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度称取氯已定标准品10.0mg（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，均于4℃避光保存，可使用3个月。4.9已定和氯已定混合标准溶液：分别移取1ml.已滕定和氯已定标准储备溶液（4.8）至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度，根据需要用甲醇（4.2）稀释成适宜浓度的混合标准工作溶液，于4℃避光保存，可使用3个月。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪（HPLC)：配有二极管阵列检测器。1
TYKAOIKAca
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液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪：配有电喷雾离子源（ESI)。超声波水浴。
5.4离心机：转速不低于5000r/min。5.5涡旋混合器。
分析天平：感量为0.0001g和0.001g。5.6
具塞聚四氟乙烯离心管：50mL。微孔滤膜：0.45mm，材质为尼龙。6
测定步骤
样品处理
水剂、膏霜、香波和散粉类样品称取0.5g（精确至0001g）试样于50mL具塞聚四氟乙烯离心管（5.中，加人1mL饱和氯化钠溶液（4.6），涡旋混合，再加入9mL水，涡旋混合后，以5000/min离心10min，上清液转移至另50mL具塞聚四氟乙烯离心管中。试样残渣继续加人10mL甲醇（4.2）在超产波水洛（5.3）中超声提取20min，以50001/min高心10mm，合开士清液经0.15um微礼滤膜（8）过滤，供高效液相色谱测定。
唇君类样品
0.5g精确至0.001
手手50
涡旋混合，再加人8mL水，辆旋混合后，以5乙烯离心管中。
试样残渣维续加人
5000r/min离心10min，合并
塞聚四第
烯离心管（5.
tomin，
J0omin
峡喃（4.3），
加人2mL四氛
清液转移至另
甲醇（4.2）在超声波水浴（
上清液经61
测定条件
高效液相色谱测定条件如下：
微孔滤膜
具塞聚四氟
50mL具
提取20min，以
8）过滤，供高效液相色谱测定，色谱柱xTerraMsCis，5μm，250mm×4.6mm（内径），或相当a）
流动相：见表1；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：260nm；
进样量：10μL。
流动相
时间/min
水（含0.1%三氟乙酸）/%
乙晴（含0.1%三氟乙酸）/%
irkoNiKca
6.3标准曲线的绘制
GB/T35800—2018
用中醇将已定和氯己定标准储备溶液逐级稀释得到浓度为0.5ug/mL、1ug/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的标准工作溶液，按6.2测定条件浓度由低到高进样测定，以色谱峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作图，得到标准曲线回归方程。已定和氯己定的液相色谱图参见附录B的图B.1。6.4测定
按6.2测定条件对待测样液进行测定，如果检出已定和氛已定的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图电该物质的紫外吸收光谱图与标准品一致，则可初步认定样品中存在相对应的目标分析物，外标法定量，待测试样中二咪定和氯已定及其盐类的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。必要时阳性样品需用液相色谱质谱进行确认试验。确认试验参见附录C。
定的选择离子质量色谱图参见图C.1。已胖定和氯己
6.5空白试验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进有7结果计算
结果按武（1）计算，计竟结
式中：
两位小数
算结果应扣除空白件
战样中被测已定和氛已定及其盐类的旨分比否量（分别以已胀是和象已定），%；从标准工作曲线工查山的试样中己定和氧己定的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)：样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；试样的质量，单位为克（g）。
8检出限和定量限
已胖定和氯己定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.00409回收率和精密度
在添加浓度0.004%～0.3%范围内：已定和氯已定及其盐类的回收率在84.1%～99.7%之间，相对标准偏差为1.1%～7.8%。
10允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。3
-KAoNrKAca
GB/T35800—2018
附录A
（资料性附录）
己胖定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定标准品的基本信息已滕定二（羟乙基磺酸）盐和氯已定标准品的基本信息见表A.1和图A.1。表A,1已胖定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定的CAS号、分子式、结构式及相对分子质量等信息中文名称
已胀定二（羟乙基磺酸）盐
氯己定
英文名称
Hexamidine disethionate
Chlorhexidine
CAS号
659405
55-56-1
已定二（羟乙基磺酸）盐
氯已定
分子式
C2H2N,O,2C,HO,S
CaHa.Cl,Nio
己定二（羟乙基磺酸）盐和氯己定的结构式相对分子质量
-rKAoNiKAca
附录B
（资料性附录）
已胖定和氯己定的液相色谱图
已咪定和氯已定的液相色谱图见图B.1。20.8
说明：
己定；
氯己定。
己定和氯己定的液相色谱图
GB/T35800—2018
i=260 mm
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GB/T35800-—2018
液相色谱条件
液相色谱测定的参考条件如下：a)
附录C
（资料性附录）
确认试验
色谱柱：XBridgeCia柱，150mmX2.1mm（内径），3.5μm，或相当者；流动相：0.1%三氟乙酸-水（A）和0.1%三氟乙酸-乙腈（B）；流速：0.3mL/min；
柱温：30C；
进样量：5μL；
梯度洗脱程序见表C.1。
时间/min
质谱条件
质谱测定的参考条件如下：
电离方式：电喷雾电离；
毛细管电压：3.0kV；
萃取电压：3.0V；
离子源温度：150℃；
梯度洗脱程序
脱溶剂气：氮气，流速1000L/h，温度500℃；锥孔气：氮气，流速50L/h；
碰撞气：氩气；
扫描模式：多反应监测（MRM），定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表C.2。表C.2
物质名称
己滕定
氯己定
电离方式
丰度较高离子。
保留时间
已胖定和氯己定的串联质谱分析参数母离子
子离子
338.2,120.2此内容来自标准下载网
353.2，336.2
锥孔电压
碰撞能量
21，21
16，20
离子丰
84，100
iikAoNiKca
C.3定性判定
GB/T35800—2018
按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（变化范围在土2.5%之内），且试样中目标化合物两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度致，则可判断样品中存在相应的目标化合物。已定和氯己定的选择离子质量色谱图参见图C.1。100
355.0>120.2
说明：
已魅定：
氯已是。
355.0>338.2
505.0>336.2
505.0>353.2
已定和氯己定的选择离子质量色谱图/min
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中华人民共和国
国家标准
化妆品中防腐剂已定和氯己定及其盐类的测定高效液相色谱法
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