GB 1886.322-2021
基本信息
标准号： GB 1886.322-2021
中文名称：食品安全国家标准 食品添加剂 可溶性大豆多糖
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
GB 1886.322-2021 食品安全国家标准 食品添加剂 可溶性大豆多糖
GB1886.322-2021
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB1886.322—2021
食品安全国家标准
食品添加剂
2021-02-22发布
可溶性大豆多糖
2021-08-22实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂
可溶性大豆多糖
GB1886.322—2021
本标准适用于以大豆或大豆粕为原料，经脱脂、提取、纯化、灭菌、干燥等工艺生产的食品添加剂可溶性大豆多糖。
主成分的结构式
(,Rhai—GalA,)2(,GalA,)m(,Rhai—GalA,),Gal,—Aras)。
Gal,—(,Gal,),
3技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
表1感官要求
理化指标
白色至微黄色
粉末状
Gal—Gal,)
Rha：鼠李糖wwW.bzxz.Net
Gal：半乳糖
GalA：半乳糖酸
Ara：阿拉伯糖
检验方法
将适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下采用目测方法观察色泽及状态，并膜气味气味正常，无异味
理化要求应符合表2的规定。
可溶性多糖含量，/%
水分，0/%
灰分，w/%
蛋白质20/%
黏度（10%水溶液，20℃±0.5℃）/（mPa：s）成胶性（10%水溶液）
PH(1%溶液）
铅（Pb)/（mg/kg）
总砷（以As计)/（mg/kg）
微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
菌落总数/(CFU/g）
大肠菌群/（MPN/g）
霉菌和醇母计数/(CFU/g）
沙门氏菌/25g
金黄色葡萄球菌/25g
理化指标
溶于热水和冷水，不形成凝胶
微生物指标
不得检出
不得检出
GB1886.322—2021
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
附录A中A.4
附录A中A.4
GB5009.75或GB5009.12
GB5009.11
检验方法
GB4789.15
GB4789.10
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB1886.322—2021
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时.均指水溶液鉴别试验
试剂和材料
氢氧化钠。
磷酸二氢钠。
标准相对分子质量对照品：普鲁兰多糖，P-5（MW6200Da）、P-20（MW23000Da）、P-50（MW48800Da）P-400（MW348000Da）P-800（MW805000Da）。或者在普鲁兰多糖P-5～P-800之间选择5个以上标准品制定标准曲线。A.2.2
试剂配制
A.2.2.14mol/L氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠，用水溶解至100mL，混匀A.2.2.20.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液：称取15.6g磷酸二氢钠（A.2.1.2），用水溶解至1L，混匀，用4mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8。A.2.2.3标准相对分子质量溶液：分别称取标准相对分子质量对照品（A.2.1.3)10.0mg，加0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（A.2.2.2)溶解并定容至10mL。A.2.3
仪器和设备
高效液相色谱仪，附示差折光检测器。A.2.3.1
分析天平，感量0.1mg。
参考色谱条件
色谱柱：TSK-gelG5000PWXL7.8mmX300mm，或者满足条件的其他凝胶柱。柱温：40℃。
流动相：0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（pH6.8）。A.2.4.4
流速：0.6mL/min。
进样量：10μL.20μL。
分析步骤
标准曲线
分别取20μL标准相对分子质量溶液（A.2.2.3）注人高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析记录色谱峰保留时间tR（min）。用lg（MW）对色谱峰保留时间作标准曲线，见图A.1。3
GB1886.322—2021
图A.1标准品相对分子质量与保留时间测定标准曲线示意图A.2.5.2试样溶液制备
称取样品1.0g.用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（A.2.2.2）溶解并定容至100mL，混勾，用0.2μm0.45μm水系膜过滤，收集滤液，作为试样溶液。A.2.5.3测定
在相同条件下，取10μL试样溶液（A.2.5.2)注人高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱峰保留时间t（min）。根据保留时间tr（min）在图A.1中查出试样液各峰lg（MW）并计算出MW。A.2.5.4判断
可溶性大豆多糖典型高效液相色谱图见图A.2.其中4个峰相对分子质量范围分别为4.00×1056.50×10%、1.00×105~3.00×1051.50×10+~3.50×10+2.00×10*~1.00×104。如果试样溶液高效液相色谱图出现2～4个色谱峰，并且峰值在上述相对分子质量范围内，则判断试样是可溶性大豆多糖。如果谱图中色谱峰是1个，或者色谱峰是2～4个，但峰值不在上述相对分子质量范围内，则判断试样不是可溶性大豆多糖。
[.48×105
可溶性大豆多糖典型高效液相色谱图24.00 min
A.3可溶性多糖含量的测定
A.3.1方法提要
GB1886.3222021
试样经酶解，收集滤液并用乙醇沉淀，过滤、洗涤残渣并干燥至恒质后，减去其中蛋白质、灰分和试剂空白含量，即为试样中可溶性多糖含量。2试剂
氢氧化钠。
2-（N-吗嘛代）乙烷磺酸（MES）。A.3.2.3三羟甲基氨基甲烷（TRIS)。热稳定α-淀粉酶液：CAS9000-85-5，酶活力为10000U/mL土1000U/mL，于0℃~5℃冰A.3.2.4
箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.88一2014附录A的要求。A.3.2.5蛋白酶液：CAS9014-01-1.酶活力为300U/mL~400U/mL，于0℃~5℃冰箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.882014附录A的要求A.3.2.6淀粉葡萄糖苷酶液：CAS9032-08-0.酶活力为2000U/mL~3300U/mL，于0℃~5℃冰箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.882014附录A的要求。A.3.2.7
盐酸。
A.3.2.8硅藻土：CAS68855-54-9。A.3.2.9
重铬酸钾。
硫酸。
95%乙醇。
丙酮。
试剂配制
6mol/L氢氧化钠溶液：称取24g氢氧化钠，用水稀释至100mL，混匀。A.3.3.1
0.05mo1/LMES-TRIS缓冲液：称取19.52g2-（N-吗琳代）乙烷磺酸（MES）和12.2g三羟甲基氨基甲烷（TRIS)，用1.7L水溶解，根据室温用6mol/L氢氧化钠溶液调pH,20℃时调pH为8.3，24℃时调pH为8.2,28℃时调pH为8.1,20℃~28℃之间其他室温用插人法校正pH。加水稀释至2L
A.3.3.3蛋白酶溶液：用0.05mol/LMES-TRIS缓冲液稀释蛋白酶液（A.3.2.5）至50mg/mL，使用前现配并于0℃～5℃冰箱暂存。
A.3.3.42mol/L盐酸溶液：取167mL盐酸，用水稀释至1L，混匀。A.3.3.5酸洗硅藻土：取200g硅藻土于600mL的2mol/L盐酸溶液中，浸泡过夜，过滤，用水洗至滤液为中性，置于525℃士5℃马弗炉中灼烧灰分后备用。A.3.3.6重铬酸钾洗液：称取100g重铬酸钾，用200mL水溶解，加人1800mL浓硫酸混合。A.3.3.7
6mol/L盐酸溶液：取50mL盐酸，用50mL水稀释，混匀。A.3.3.80.6mol/L盐酸溶液：取93.5mL6mol/L盐酸溶液，用水稀释至1L。A.3.3.91mol/L盐酸溶液：取8.33mL盐酸，用水稀释至100mL，混匀。A.3.3.10
78%乙醇溶液：取821mL95%乙醇，用水稀释并定容至1L容量瓶中，混匀。仪器和设备
高型烧杯：500mL。
A.3.4.2马弗炉：525℃±5℃。
A.3.4.3烘箱：130℃±3℃，105℃±2℃GB1886.3222021
A.3.4.4过滤埚：孔径40μm~60μm，清洗后的埚在525℃马弗炉中灼烧6h，炉温降至130℃以下取出，于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h，用水冲洗干净，再用15mL内酮冲洗后风干。用前，加入约1.0g硅藻土（A.3.3.5），在130℃烘箱中烘2h，取出，置于干燥器中冷却约0.5h，称量，再复烘0.5h，直至恒质，记录埚及硅藻土质量（m。），精确到0.1mg。A.3.4.5真空抽滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器。备1L抽滤瓶，侧壁有抽滤口，带有与抽滤瓶配套的橡胶塞，用于酶解液抽滤。A.3.4.6恒温水浴锅：控温范围25℃~100℃，温度波动士1℃。A.3.4.7磁力搅拌器。
A.3.4.8分析天平：感量0.1mg和1mg。A.3.4.9干燥器：装有有效的二氧化硅或同等的干燥剂。A.3.4.10pH计：具有温度补偿功能，精度士0.1。用前用pH4.0、pH7.0和pH10的标准缓冲液校准。
A.3.5操作步骤
A.3.5.1称量：准确称取双份试样（m）约1g（精确至0.1mg），双份试样质量差≤0.005g。将试样分别置于500mL高型烧杯中，加入0.05mol/LMES-TRSI缓冲溶液（A.3.3.2）40mL，磁力搅拌直至试样完全分散在缓冲液中（搅拌均匀，避免试样结成团块，以防止试样酶解过程中不能与酶充分接触）。同时制备两个空白样液与试样液进行同步操作，用于校正试剂对测定的影响。A.3.5.2热稳定α-淀粉酶酶解：用移液枪向试样液中分别加人50uL热稳定α-淀粉酶液（A.3.2.4），用铝箔覆盖（或加盖表面血）后置于95℃水浴锅中持续拌，当水浴温度升至95℃开始计时，连续反应30min。将烧杯取出，冷却至60℃，打开铝箔盖，用刮勺轻轻将附着于烧杯内壁上的胶状物刮下，并用10mL水冲洗烧杯壁和刮勺。
A.3.5.3蛋白酶酶解：将试样溶液置于60℃水浴中，向每个烧杯中加人100μL蛋白酶溶液（A.3.3.3），用铝箔覆盖（或加盖表面皿）后连续搅拌，反应30min。打开铝箔盖，边搅拌边加人5mL0.6mol/L盐酸溶液，在60℃条件下，用1mol/L盐酸溶液调节试样溶液pH至4.0～4.7。A.3.5.4淀粉葡萄糖苷酶酶解：加入300μL淀粉葡萄糖苷酶液（A.3.2.6）.用铝箔覆盖（或加盖表面血）后，继续于60℃水浴中持续搅拌，反应30min。A.3.5.5抽滤洗涤：取丙酮处理的过滤埚（A.3.4.4），加人1g硅藻土（A.3.3.5），用3mL水湿润过滤璃中的硅藻土，并用抽滤装置将硅藻土均匀铺在璃滤层上，继续抽气，将上述酶消化液转移至珀璃中抽滤。用10mL70℃水洗涤烧杯、残渣两次。合并滤液并转移至预先称量的500mL高型烧杯中，称量并记录滤液的体积。
A.3.5.6沉淀：加人4倍于滤液体积并预热至60℃的95%乙醇，或用水将滤液调整至总质量为80g后，加人320mL60℃的95%乙醇，室温静置1.0h。A.3.5.7抽滤：用15mL78%乙醇溶液湿润已恒质的过滤璃及硅藻主（m。）（A.3.4.4），通过抽滤将硅藻土均匀铺在埚滤层上，继续抽气，将经醇处理的酶消解液全部转移至过滤中抽滤，并用78%的乙醇将高型烧杯中的所有残留物转至埚中。A.3.5.8洗涤：用15mL78%乙醇溶液洗涤残留物两次，再用15mL95%乙醇洗涤残留物两次，之后用丙酮15mL洗涤残留物两次，抽滤去除洗涤液后，将含有残留物的及硅藻土置于105℃烘箱中干燥过夜，将埚置干燥器中冷却0.5h后，称量（m1），精确到0.1mgA.3.5.9蛋白质和灰分的测定：取两份试样中的一份按GB5009.5测定氮（N）含量，以6.25为换算系数计算残留物中蛋白质质量（m：）。另外一份试样测定灰分，即在525℃马弗炉中灼烧5h，于干燥器6
中冷却至室温后称量埚和残留物的质量（mz），精确至0.1mg。A.3.6
结果计算
可溶性多糖（SPS）含量质量分数w按式（A.1)计算。m-m3ms-(mzm3-ms)
式中：
GB1886.322—2021
.(A.1)
两份试样测定时残留物质量（m一m）的平均值如两份试样酶处理后的残留物质量(ml一m。）相差超过20mg，需要重新取样测定」，单位为毫克（mg）；试样残留物中的蛋白质质量，单位为毫克（mg）；试样残留物中灰分的质量（m4一m。），单位为毫克（mg）；空白实验残留物质量的平均值，单位为毫克（mg）；空白实验残留物中的蛋白质质量，单位为毫克（mg）；空白实验残留物中灰分的质量，单位为毫克（mg）；两份试样质量的平均值，单位为毫克（mg）。计算结果保留三位有效数字。
以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A.4
可溶性大豆多糖黏度、成胶性和pH的测定方法A.4.1
仪器和设备
低温恒温槽：控温范围0℃~90℃.温度波动士0.5℃旋转黏度计：量程10mPa·s~1X10°mPa·s，精度士1%。A.4.1.2
A.4.1.3pH计：精度0.05。
操作方法
黏度测定：称取20.00g试样，加人到180.0mL水中，搅拌均匀，制成10%的溶液。将上述溶液置于20℃的低温恒温槽中，恒温至20℃士0.5℃。用旋转黏度计测定溶液黏度，并记录黏度值A.4.2.2成胶性测定：将测定黏度后的样液加热至100℃，缓慢冷却至4℃，观察其是否成凝胶状（需要时可用玻璃棒轻轻搅拌后观察）。A.4.2.3pH测定：称取1.00g试样，加入到99.0mL水中，搅拌均匀.制成1.0%的溶液。用pH计测定溶液pH。
A.4.2.4结果计算
试样测定两次，取平均值。
黏度测定时，双试验绝对差值≤2mPa·s。pH测定时，双试验绝对差值≤0.3。
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GB1886.322—2021
食品安全国家标准
食品添加剂
2021-02-22发布
可溶性大豆多糖
2021-08-22实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂
可溶性大豆多糖
GB1886.322—2021
本标准适用于以大豆或大豆粕为原料，经脱脂、提取、纯化、灭菌、干燥等工艺生产的食品添加剂可溶性大豆多糖。
主成分的结构式
(,Rhai—GalA,)2(,GalA,)m(,Rhai—GalA,),Gal,—Aras)。
Gal,—(,Gal,),
3技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
表1感官要求
理化指标
白色至微黄色
粉末状
Gal—Gal,)
Rha：鼠李糖wwW.bzxz.Net
Gal：半乳糖
GalA：半乳糖酸
Ara：阿拉伯糖
检验方法
将适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下采用目测方法观察色泽及状态，并膜气味气味正常，无异味
理化要求应符合表2的规定。
可溶性多糖含量，/%
水分，0/%
灰分，w/%
蛋白质20/%
黏度（10%水溶液，20℃±0.5℃）/（mPa：s）成胶性（10%水溶液）
PH(1%溶液）
铅（Pb)/（mg/kg）
总砷（以As计)/（mg/kg）
微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
菌落总数/(CFU/g）
大肠菌群/（MPN/g）
霉菌和醇母计数/(CFU/g）
沙门氏菌/25g
金黄色葡萄球菌/25g
理化指标
溶于热水和冷水，不形成凝胶
微生物指标
不得检出
不得检出
GB1886.322—2021
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
附录A中A.4
附录A中A.4
GB5009.75或GB5009.12
GB5009.11
检验方法
GB4789.15
GB4789.10
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB1886.322—2021
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时.均指水溶液鉴别试验
试剂和材料
氢氧化钠。
磷酸二氢钠。
标准相对分子质量对照品：普鲁兰多糖，P-5（MW6200Da）、P-20（MW23000Da）、P-50（MW48800Da）P-400（MW348000Da）P-800（MW805000Da）。或者在普鲁兰多糖P-5～P-800之间选择5个以上标准品制定标准曲线。A.2.2
试剂配制
A.2.2.14mol/L氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠，用水溶解至100mL，混匀A.2.2.20.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液：称取15.6g磷酸二氢钠（A.2.1.2），用水溶解至1L，混匀，用4mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8。A.2.2.3标准相对分子质量溶液：分别称取标准相对分子质量对照品（A.2.1.3)10.0mg，加0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（A.2.2.2)溶解并定容至10mL。A.2.3
仪器和设备
高效液相色谱仪，附示差折光检测器。A.2.3.1
分析天平，感量0.1mg。
参考色谱条件
色谱柱：TSK-gelG5000PWXL7.8mmX300mm，或者满足条件的其他凝胶柱。柱温：40℃。
流动相：0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（pH6.8）。A.2.4.4
流速：0.6mL/min。
进样量：10μL.20μL。
分析步骤
标准曲线
分别取20μL标准相对分子质量溶液（A.2.2.3）注人高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析记录色谱峰保留时间tR（min）。用lg（MW）对色谱峰保留时间作标准曲线，见图A.1。3
GB1886.322—2021
图A.1标准品相对分子质量与保留时间测定标准曲线示意图A.2.5.2试样溶液制备
称取样品1.0g.用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（A.2.2.2）溶解并定容至100mL，混勾，用0.2μm0.45μm水系膜过滤，收集滤液，作为试样溶液。A.2.5.3测定
在相同条件下，取10μL试样溶液（A.2.5.2)注人高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析，记录色谱峰保留时间t（min）。根据保留时间tr（min）在图A.1中查出试样液各峰lg（MW）并计算出MW。A.2.5.4判断
可溶性大豆多糖典型高效液相色谱图见图A.2.其中4个峰相对分子质量范围分别为4.00×1056.50×10%、1.00×105~3.00×1051.50×10+~3.50×10+2.00×10*~1.00×104。如果试样溶液高效液相色谱图出现2～4个色谱峰，并且峰值在上述相对分子质量范围内，则判断试样是可溶性大豆多糖。如果谱图中色谱峰是1个，或者色谱峰是2～4个，但峰值不在上述相对分子质量范围内，则判断试样不是可溶性大豆多糖。
[.48×105
可溶性大豆多糖典型高效液相色谱图24.00 min
A.3可溶性多糖含量的测定
A.3.1方法提要
GB1886.3222021
试样经酶解，收集滤液并用乙醇沉淀，过滤、洗涤残渣并干燥至恒质后，减去其中蛋白质、灰分和试剂空白含量，即为试样中可溶性多糖含量。2试剂
氢氧化钠。
2-（N-吗嘛代）乙烷磺酸（MES）。A.3.2.3三羟甲基氨基甲烷（TRIS)。热稳定α-淀粉酶液：CAS9000-85-5，酶活力为10000U/mL土1000U/mL，于0℃~5℃冰A.3.2.4
箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.88一2014附录A的要求。A.3.2.5蛋白酶液：CAS9014-01-1.酶活力为300U/mL~400U/mL，于0℃~5℃冰箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.882014附录A的要求A.3.2.6淀粉葡萄糖苷酶液：CAS9032-08-0.酶活力为2000U/mL~3300U/mL，于0℃~5℃冰箱储存，酶的活性测定及判定标准应符合GB5009.882014附录A的要求。A.3.2.7
盐酸。
A.3.2.8硅藻土：CAS68855-54-9。A.3.2.9
重铬酸钾。
硫酸。
95%乙醇。
丙酮。
试剂配制
6mol/L氢氧化钠溶液：称取24g氢氧化钠，用水稀释至100mL，混匀。A.3.3.1
0.05mo1/LMES-TRIS缓冲液：称取19.52g2-（N-吗琳代）乙烷磺酸（MES）和12.2g三羟甲基氨基甲烷（TRIS)，用1.7L水溶解，根据室温用6mol/L氢氧化钠溶液调pH,20℃时调pH为8.3，24℃时调pH为8.2,28℃时调pH为8.1,20℃~28℃之间其他室温用插人法校正pH。加水稀释至2L
A.3.3.3蛋白酶溶液：用0.05mol/LMES-TRIS缓冲液稀释蛋白酶液（A.3.2.5）至50mg/mL，使用前现配并于0℃～5℃冰箱暂存。
A.3.3.42mol/L盐酸溶液：取167mL盐酸，用水稀释至1L，混匀。A.3.3.5酸洗硅藻土：取200g硅藻土于600mL的2mol/L盐酸溶液中，浸泡过夜，过滤，用水洗至滤液为中性，置于525℃士5℃马弗炉中灼烧灰分后备用。A.3.3.6重铬酸钾洗液：称取100g重铬酸钾，用200mL水溶解，加人1800mL浓硫酸混合。A.3.3.7
6mol/L盐酸溶液：取50mL盐酸，用50mL水稀释，混匀。A.3.3.80.6mol/L盐酸溶液：取93.5mL6mol/L盐酸溶液，用水稀释至1L。A.3.3.91mol/L盐酸溶液：取8.33mL盐酸，用水稀释至100mL，混匀。A.3.3.10
78%乙醇溶液：取821mL95%乙醇，用水稀释并定容至1L容量瓶中，混匀。仪器和设备
高型烧杯：500mL。
A.3.4.2马弗炉：525℃±5℃。
A.3.4.3烘箱：130℃±3℃，105℃±2℃GB1886.3222021
A.3.4.4过滤埚：孔径40μm~60μm，清洗后的埚在525℃马弗炉中灼烧6h，炉温降至130℃以下取出，于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h，用水冲洗干净，再用15mL内酮冲洗后风干。用前，加入约1.0g硅藻土（A.3.3.5），在130℃烘箱中烘2h，取出，置于干燥器中冷却约0.5h，称量，再复烘0.5h，直至恒质，记录埚及硅藻土质量（m。），精确到0.1mg。A.3.4.5真空抽滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器。备1L抽滤瓶，侧壁有抽滤口，带有与抽滤瓶配套的橡胶塞，用于酶解液抽滤。A.3.4.6恒温水浴锅：控温范围25℃~100℃，温度波动士1℃。A.3.4.7磁力搅拌器。
A.3.4.8分析天平：感量0.1mg和1mg。A.3.4.9干燥器：装有有效的二氧化硅或同等的干燥剂。A.3.4.10pH计：具有温度补偿功能，精度士0.1。用前用pH4.0、pH7.0和pH10的标准缓冲液校准。
A.3.5操作步骤
A.3.5.1称量：准确称取双份试样（m）约1g（精确至0.1mg），双份试样质量差≤0.005g。将试样分别置于500mL高型烧杯中，加入0.05mol/LMES-TRSI缓冲溶液（A.3.3.2）40mL，磁力搅拌直至试样完全分散在缓冲液中（搅拌均匀，避免试样结成团块，以防止试样酶解过程中不能与酶充分接触）。同时制备两个空白样液与试样液进行同步操作，用于校正试剂对测定的影响。A.3.5.2热稳定α-淀粉酶酶解：用移液枪向试样液中分别加人50uL热稳定α-淀粉酶液（A.3.2.4），用铝箔覆盖（或加盖表面血）后置于95℃水浴锅中持续拌，当水浴温度升至95℃开始计时，连续反应30min。将烧杯取出，冷却至60℃，打开铝箔盖，用刮勺轻轻将附着于烧杯内壁上的胶状物刮下，并用10mL水冲洗烧杯壁和刮勺。
A.3.5.3蛋白酶酶解：将试样溶液置于60℃水浴中，向每个烧杯中加人100μL蛋白酶溶液（A.3.3.3），用铝箔覆盖（或加盖表面皿）后连续搅拌，反应30min。打开铝箔盖，边搅拌边加人5mL0.6mol/L盐酸溶液，在60℃条件下，用1mol/L盐酸溶液调节试样溶液pH至4.0～4.7。A.3.5.4淀粉葡萄糖苷酶酶解：加入300μL淀粉葡萄糖苷酶液（A.3.2.6）.用铝箔覆盖（或加盖表面血）后，继续于60℃水浴中持续搅拌，反应30min。A.3.5.5抽滤洗涤：取丙酮处理的过滤埚（A.3.4.4），加人1g硅藻土（A.3.3.5），用3mL水湿润过滤璃中的硅藻土，并用抽滤装置将硅藻土均匀铺在璃滤层上，继续抽气，将上述酶消化液转移至珀璃中抽滤。用10mL70℃水洗涤烧杯、残渣两次。合并滤液并转移至预先称量的500mL高型烧杯中，称量并记录滤液的体积。
A.3.5.6沉淀：加人4倍于滤液体积并预热至60℃的95%乙醇，或用水将滤液调整至总质量为80g后，加人320mL60℃的95%乙醇，室温静置1.0h。A.3.5.7抽滤：用15mL78%乙醇溶液湿润已恒质的过滤璃及硅藻主（m。）（A.3.4.4），通过抽滤将硅藻土均匀铺在埚滤层上，继续抽气，将经醇处理的酶消解液全部转移至过滤中抽滤，并用78%的乙醇将高型烧杯中的所有残留物转至埚中。A.3.5.8洗涤：用15mL78%乙醇溶液洗涤残留物两次，再用15mL95%乙醇洗涤残留物两次，之后用丙酮15mL洗涤残留物两次，抽滤去除洗涤液后，将含有残留物的及硅藻土置于105℃烘箱中干燥过夜，将埚置干燥器中冷却0.5h后，称量（m1），精确到0.1mgA.3.5.9蛋白质和灰分的测定：取两份试样中的一份按GB5009.5测定氮（N）含量，以6.25为换算系数计算残留物中蛋白质质量（m：）。另外一份试样测定灰分，即在525℃马弗炉中灼烧5h，于干燥器6
中冷却至室温后称量埚和残留物的质量（mz），精确至0.1mg。A.3.6
结果计算
可溶性多糖（SPS）含量质量分数w按式（A.1)计算。m-m3ms-(mzm3-ms)
式中：
GB1886.322—2021
.(A.1)
两份试样测定时残留物质量（m一m）的平均值如两份试样酶处理后的残留物质量(ml一m。）相差超过20mg，需要重新取样测定」，单位为毫克（mg）；试样残留物中的蛋白质质量，单位为毫克（mg）；试样残留物中灰分的质量（m4一m。），单位为毫克（mg）；空白实验残留物质量的平均值，单位为毫克（mg）；空白实验残留物中的蛋白质质量，单位为毫克（mg）；空白实验残留物中灰分的质量，单位为毫克（mg）；两份试样质量的平均值，单位为毫克（mg）。计算结果保留三位有效数字。
以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A.4
可溶性大豆多糖黏度、成胶性和pH的测定方法A.4.1
仪器和设备
低温恒温槽：控温范围0℃~90℃.温度波动士0.5℃旋转黏度计：量程10mPa·s~1X10°mPa·s，精度士1%。A.4.1.2
A.4.1.3pH计：精度0.05。
操作方法
黏度测定：称取20.00g试样，加人到180.0mL水中，搅拌均匀，制成10%的溶液。将上述溶液置于20℃的低温恒温槽中，恒温至20℃士0.5℃。用旋转黏度计测定溶液黏度，并记录黏度值A.4.2.2成胶性测定：将测定黏度后的样液加热至100℃，缓慢冷却至4℃，观察其是否成凝胶状（需要时可用玻璃棒轻轻搅拌后观察）。A.4.2.3pH测定：称取1.00g试样，加入到99.0mL水中，搅拌均匀.制成1.0%的溶液。用pH计测定溶液pH。
A.4.2.4结果计算
试样测定两次，取平均值。
黏度测定时，双试验绝对差值≤2mPa·s。pH测定时，双试验绝对差值≤0.3。
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