标准编号：GB 29699-2013 标准名称：食品安全国家标准 鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定 气相色谱-质谱法 英文名称：Determination of C lopidol residues in chicken muscle by Gas Chromatography-mass Spectrometric method 标准格式：PDF 发布时间：2013-09-16 实施时间：2014-01-01 标准大小：382K 标准介绍：本标准规定了鸡肌岗组织中羟残留量检测的制样和气相色谱质谱测定方法， 本标准用于鸡肌肉组织中氧羟吐宠密量的测定 2规范性引用文件 的修改单《不包括态讲的内容)或修订版均不用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注目期的引用文件，其最新版本用于本标准 GBT1.1-2000标准化工作导则1部分：标准的构和编写规则 GBT6682分析实验室用水规 试料中烈留的经吡啶，用乙猜提取，张性氧化铝柱净化，NO双三甲基磁基三策乙酸与三甲英氰烷衍生，气相色谐质谱测定，外标法定 4试剂与材料 41氯羟吡啶对照品：含量≥99% 42无水硫酸钠：使用前在马弗炉内500℃煅统5h,冷却后，过100日，备用

中华人民共和国国家标准
GB29699—2013
食品安全国家标准
鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定气相色谱-质谱法
Determination of Clopidol residues in chicken muscle byGas Chromatography-mass Spectrometric method（电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准）2013-09-16发布
中华人民共和国农业部
2014-01-01实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会目
鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定1范围
2规范性引用文件
3原理..
试剂与材料..
仪器与设备.
6试料的制备与保存
6.1试料的制备.
6.2样品的保存
测定步骤
7.1基质匹配标准曲线的制备
7.2提取.
7.3净化..
7.4衍生..
7.5测定.
7.6空白试验...
8结果计算与表述
气租色谱法质漕
检测方法灵敏度、准确度和精密度9
灵敏度
准确度..
9.3精密度
本标准的附录A为资料性附录。
本标准系国内首次发布的国家标准。前言
1范围
鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定气相色谱-质谱法
本标准规定了鸡肌肉组织中氯羟啶残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法本标准适用于鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试料中残留的氯羟吡啶，用乙睛提取，碱性氧化铝柱净化，N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺与三甲基氯硅烷衍生，气相色谱-质谱测定，外标法定量。4
试剂与材料
以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水4.1氯羟吡啶对照品：含量≥99%。4.2
无水硫酸钠：使用前在马弗炉内500℃熳烧5h，冷却后，过100目筛，备用。4.3矿
碱性氧化铝：使用前在马弗炉内300℃殿烧3h，冷却后按每100g加水5mL，混匀，干燥器中过夜，备用。
4.4N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺4.5三甲基氯硅烷
4.6乙腈。
甲苯：色谱纯。
4.8气：纯度≥99.999%。
4.9衍生剂：取N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺99mL，加三甲基氯硅烷1mL，混匀4.10氧化铝层析柱：氧化铝柱用30mm×15mm具塞玻璃层析柱，下配Gs砂芯板，先装入适量的乙睛，然后装填1cm高的无水硫酸钠，中间装4cm高的碱性氧化铝，顶端再装1cm高的硫酸钠，轻轻敲实填匀，备用。
4.11100μg/mL氯羟吡啶标准购备液：精密称取氯羟吡啶对照品10mg，于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ug/mL的氯羟吡啶标准贮备液。-20℃以下保存，有效期6个月。4.121μg/mL氯羟吡啶标准工作液：精密量取100μg/mL氯羟吡啶标准贮备液1.0mL，于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为1ug/mL的氯羟吡啶标准工作液，2～8℃保存，有效期1周。
仪器与设备
5.1气相色谱-质谱联用仪：配电子轰击离子源（EI）。分析天平：感量0.00001g。
天平：感量0.01g。
高速冷冻离心机
5.5旋转蒸发仪
5.6摇床
聚丙烯离心管：50mL。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。一一取均质后的供试样品，作为供试试料。一取均质后的空白样品，作为空白试料。一一取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2样品的保存
一20℃以下保存。
测定步骤
7.1基质匹配标准曲线的制备
精密量取1ug/mL氯羟吡啶标准工作液适量，分别添加至经提取、净化步骤处理的6份空白试料洗脱液中，经衍生处理，制得浓度为5、10、20、100、250和500μg/L的系列基质匹配标准溶液，供气相色谱法-质谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2提取
称取试料（5±0.05）g，于50mL聚丙烯离心管中，加乙睛10mL，均质1min，振荡20min。4℃，6000r/min离心10min，取上清液，残渣用乙睛10mL重复提取一次。合并两次上清液，加异丙醇5mL，于50℃旋转蒸发至近干。用乙睛5mL溶解残余物，备用。7.3净化
碱性氧化铝层析柱用乙睛15mL活化，取备用液过柱，自然流干，加乙睛10mL洗脱，收集洗脱液，与50℃用氮气吹干。
7.4衍生
加甲苯100μuL溶解残余物，加衍生剂100μL，密封，80℃衍生反应1h。冷却，加甲苯800μL，供气相色谱-质谱测定。
7.5测定
7.5.1气相色谱条件
色谱柱：苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30mx0.25mm，膜厚0.25um)，或相当者：流量：0.8mL/min：
程序升温：100℃保持1min，以30℃/min的速率升温至200℃，再以5℃/min升温至205℃，保温1min，然后以30℃/min升温至280℃，保持1min；接口温度：280℃；
进样口温度：220℃；
进样方式：不分流进样：
进样量：1μL。
7.5.2质谱条件
电离方式：电子轰击电离（EI）；离子源温度：230℃；
扫描方式：选择离子监测，定性离子m/z212、214、248和263，定量离子m/z248。7.5.3测定法
7.5.3.1定性测定
样品与标准品峰保留时间差不大于2s；至少检测4个特征离子，即212，214，248，263，其中：选择离子248是基峰；
选择离子214，263的相对强度（与基峰的比例）不超过标准相应选择离子相对强度平均值的30%；选择离子212的相对强度（与基峰的比例）不超过标准相应选择离子相对强度平均值的25%；氯羟吡啶三甲基硅醚衍生物质谱图和提取离子流色谱图，鸡肉添加氯羟吡啶及鸡肉空白组织提取离子流色谱图见附录A。
7.5.3.2定量测定
取试料溶液和空白基质标准溶液等体积参插进样测定，以基峰（m/z248）的峰面积（峰高）作单点或多点校准，外标法定量。试料溶液及空白基质标准溶液中氯羟吡啶的响应值应在仪器检测的线性范围内。
7.6空白试验
除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8
结果计算与表述
试料中氯羟吡啶的残留量（ug/kg）：按下式计算A×Cs×V
式中：
X试料中氯羟吡啶的浓度，ug/kg：4
A——试样中氯羟吡啶的峰面积；As——标准溶液中氯羟吡啶的峰面积；C。标准溶液中氯羟吡啶的浓度，ug/L;V
-最终试样体积，mL；
供试试料质量，g。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。检测方法灵敏度、准确度和精密度9.1
灵敏度
本方法的检测限为1ug/kg，定量限为5μg/kg2准确度
本方法在5～100μg/kg添加浓度水平上的回收率为60%～120%。9.3
3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤20%，批间相对标准偏差≤20%。5
612-d3
6122td
613-ck2
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613-chkn
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100元
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（资料性附录）
氯羟吡啶标准溶液离子色谱图（10ng/mL）TTTTT
图A2鸡肌肉组织空白试样离子色谱图TTTTTTT
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鸡肌肉组织空白添加氯羟吡啶试样离子色谱图（10ug/kg）Time
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