标准号：GB/T 38571-2020
标准名称：植物次生代谢物生物碱的检测 液相色谱-质谱法
英文名称：Determination of alkaloids as plant secondary metabolites—Liquid chromatography-mass spectrometry
标准格式：PDF
发布时间：2020-03-31
实施时间：2020-03-31
标准大小：455K
标准介绍：1范围
本标准规定了用液相色谱串联质谱仪检测植物次生代谢产物生物碱的方法。
本标准适用于(-)-东莨菪碱、番木鱉碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜
树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
本标准规定了用液相色谱-串联质谱仪检测植物次生代谢产物生物碱的方法。 本标准适用于(-)-东莨菪碱、番木鳖碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、士的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼臼毒素的测定。

ICS07.080
iiikAacJouakAa
中华人民共和国国家标准
GB/T38571-2020
植物次生代谢物生物碱的检测
液相色谱-质谱法
Determination of alkaloids as plant secondary metabolites--Liquid chromatography-mass spectrometry2020-03-31发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2020-03-31实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。iiiKAa~cJouaKAa
GB/T38571—2020
本标准起草单位：中国测试技术研究院生物研究所，河北省食品检验研究院，中国标准化研究院河北医科大学、中国计量大学。本标准主要起草人：张岩、范素芳，马爱进，冯德建、马春玲、文迪、丛斌，王娟、昌品，叶子弘。1
1范围
植物次生代谢物生物碱的检测
液相色谱-质谱法
iiiKAa~cJouakAa
GB/T38571—2020
本标准规定了用液相色谱-串联质谱仪检测植物次生代谢产物生物碱的方法。本标准适用于（-）-东食若碱、番木整碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱，阿托品、土的宁，喜树碱、毛果芸香碱、鬼白毒素的测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件·仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样品经提取液超声提取、高心后，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。试剂或材料
除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。10%（体积分数）乙睛溶液
10mL乙腈+90mL去离子水，混勾。4.2甲酸
色谱纯。
4.30.1%（体积分数）甲酸水溶液准确移取甲酸1.0mL置于1L容量瓶中，用水定容，混勾。4.41%（体积分数）甲酸-乙睛溶液1mL甲酸+99mL乙腈，混勾。
5100mmol/L乙酸铵溶液
称取乙酸铵3.854g-用去离子水溶解，定容至500mL4.6
乙酸铵-氨水缓冲液·pH9
取100mL100mmol/L乙酸铵溶液，用氨水调pH到9.0士0.5。1
GB/T38571—2020
生物碱
纯度均不小于98%。
1mg/mL生物碱储备液
iiiKAa~cJouakAa
准确称取0.100g相应的生物碱分别置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成浓度为1mg/mL的储备液，于4避光保存。有效期2个月。910mg/L混合标准储备液
分别准确移取（-）-东著碱、番木碱，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱、阿托品、土的宁、喜树碱、毛果芸香碱、鬼白毒素标准储备溶液1.0mL于100mL容量瓶中.用甲醇定容，混匀.配制成（-）-东黄营碱、番木整碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、秋水仙碱，阿托品、土的宁，喜树碱、毛果芸香碱、鬼白毒素浓度为10mg/L的混合标准储备溶液.于4℃避光保存.可使用一周。4.10微孔滤膜
0.22Am，有机相。
5仪器设备
5.1液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾高子源（ESI）和四级杆质量分析器。2电子天平，感量为0.0001g和0.001g。5.2
5.3离心机：最高转速不低于9500r/min。5.4超声波清洗仪。
5氮吹仪。
涡旋混合器。
5.7勾浆机。
高心管：10mL.50mL.
6试样制备
1植物组织、动物组织
植物组织，动物组织等固体样品，绞碎并使其均质。6.2
血液，尿液等液体样品，将取得的全部原始样品充分混匀后，待测。7试验步骤
7.1试样提取
植物组织、动物组织
称取植物组织试样1g（精确至0.001g）于50mL高心管中.加人5mL去高子水，涡旋混合2min.加人10mL乙睛，涡旋混合1min，超声辅助提取10min.加人4g无水硫酸镁，迅速振摇1min.9500r/min2
iiiKAa~cJouakAa
GB/T38571—2020
高心5min取上清液5.0mL在45℃水浴中氢吹液缩至干，用1.0mL10%乙睛溶液复溶.过微孔滤膜，待测定
7.1.2体液
7.1.2.1血液
取血液试样0.5mL于10mL离心管中，加入1mL乙酸铵-氨水缓冲溶液，涡旋混合1min，加入2.0mL甲醇，涡旋混合2min超声辅助提取10min，9500r/min离心5min，取上清液：残流加2.0mL甲醇重复提取一次，合并上清液+45C水浴中氮吹浓缩至干，用1.0mL10%乙睛溶液复溶，过微孔滤膜.待测定。
取尿液试样1.0mL于10mL离心管中，准确加人4.0mL含1%甲酸-乙睛溶液涡旋混合1min后.向离心管中加人1.5g无水硫酸镁，迅速振摇1min.9500r/min高心5min取上清液2.0mL在45℃水浴中氨吹浓缩至干，用1.0mL10%乙睛落液复溶，过微孔滤膜·待测定。7.2仪器参考条件
7.2.1液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Cls柱，100mm×2.1mm内径）.2.5um，或相当者。a)t
6b）流动相：流动相A——0.1%甲酸水溶液：流动相B——乙睛。梯度洗脱，梯度洗脱程序参见附录A。
流速：0.30mL/min
柱温：30C
进样量：2#L
质谱参考条件如下：
电离方式：电喷雾电离正高子模式：b
喷雾电压：3.5kV：
离子传输温度：350℃
高子源温度：320C：
翘气：4.6L/min
辅助气：8.8L/min
吹扫气：1.5L/min
h）扫描模式：多反应监测（MRM）模式，11种生物碱质谱参数参见附录B。7.3混合标准工作溶液的制备
取相应的空白样品·按照6.2步骤进行处理.用得到的空白样品提取液将混合标准储备溶液逐级稀释得到）-东食营碱，番不特碱，乌头碱，次乌头碱，新乌头，秋水仙碱，阿托品、的宁、喜树碱，毛果芸香碱，鬼白毒素浓度为5Ag/L10g/L.20pg/L、50#g/L、100#g/L的系列混合标准工作落液，浓度由低到高进行检测，以定量离子峰面积对质量浓度作图，做出标准曲线回归方程。7.4测定步骤
将试样落液注人液相色谱-串联质谱仪中，得到11种生物碱的质谱响应值·根据标准曲线得到待测液中11种生物碱的浓度。样品溶液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范围内·超过线性范围则应3
GB/T38571—2020
稀释后再进样测定。
7.5定性判定
iiiKAa~cJouaKAa
在相同条件测定样品溶液和标准溶液.如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的某种组分峰的保留时间一致（变化范围在土2.5%），并且所选择的两对子离子的质荷比一致，样品落液中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时，相对偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在该组分。11种生物碱标准物质的总高子流图参见附录C表1定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
空白试验
>20%50%
除不加试样外，均按7.1～7.5测定条件和步骤进行。7.7方法的检出限、定量限
本标准的方法检出限、定量限见附录D。8试验数据处理
植物组织、动物组织
植物组织，动物组织组分含量按式（1）计算：X,-PXVXK
式中：
X，试样中待测组分含量，单位为微克每千克（pg/kg）：10%20%
一由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度，单位为微克每升（产g/L)：P
V一定容体积，单位为毫升（mL)：K精释倍数：
一试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留三位有效数字。
8.2体液
体液组分含量按式（2)计算：
式中：
X,=P:×Ve客×K
V武轩
X：一试样中待测组分含量，单位为微克每升（g/L）10%
一由标准曲线得出的测试液中某种组分的质量浓度，单位为微克每升（严/L)：V定密定容体积，单位为毫升（mL)：K稀释倍数：
V一试样体积.单位为毫升(mL)。计算结果保留三位有效数字。
精密度
iiikAa~cJouakAa
GB/T38571—2020
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5
GB/T38571—2020
梯度洗脱程序见表A.1。
时间/min
附录A
（资料性附录）
梯度洗脱程序
梯度洗脱程序表
流动相A/%
iiiKAa~cJouaKAa
流动相B/%
11种生物碱质谱参数见表B1。
附录B
（资料性附录）
11种生物碱质谱参数
定量离子。
物质名称
(-)-东黄蓉碱
番木盟碱
乌头碱
欧乌头碱
新乌头碱
秋水仙碱
阿托品
士的宁
喜树碱
毛果芸香碱
鬼白毒素
11种生物碱质谱参数表
母离子
透镜电压
iiikAa~cJouakAa
GB/T38571—2020
子离子
硅撞能
GB/T38571—2020
附录C
(资料性附录）
11种生物碱标准物质的提取离子质谱图11种生物碱标准物质的提取商子质谱图见图C.1。1000000
3000000
2000000
1000000
1000000
500000
400000
300000
200000
100000
300000
200000
100000
200000
150000
100000
20000元
200000
150000
100000
150008
100000号
40 000
毛果芸香碱
阿托品
(-）-东蓝著
主的宁
喜格破
番本暨碱
iiikAa~cJouakAa
18192021m
21314151617
默水仙碱
鬼白毒素
次乌头
新乌头戴
乌头髓
569101215141516118192021
保留时间/min
图C.111种生物碱标准物质的提取离子质谱图方法检出限、定量限见表D.1。
分析物
毛果芸香碱
阿托品
(-)-东蒙蓉碱
喜树碱
番木蟹碱
新鸟头碱
秋水仙碱
次鸟头碱
乌头碱
士的宁
鬼白毒素
检出限
定量限
附录D
（规范性附录）
方法检出限，定量限
方法检出限、定量限
检出限
定量限
动物组织
检出限www.bzxz.net
定量限
中药材
检出限
iiikAa~cJouakAa
GB/T38571—2020
其他植物组织
定量限
检出限
定量限
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。