WS/T 684-2020
基本信息
标准号： WS/T 684-2020
中文名称：消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求
标准类别：卫生行业标准(WS)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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下载大小：822312
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
标准号：WS∕T 684-2020
标准名称：消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求
英文名称： Analytical method and evaluation requirements for antibacterial drugs in disinfectant and antibacterial and bacteriostatic agents
标准格式：PDF
发布时间：2020-07-20
实施时间：2021-02-01
标准大小：752K.
标准介绍：本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求。
本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类(四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素)、大环内酯类(红霉素)、β-内酰胺类(头孢拉定)、磺胺类(磺胺嘧啶)、喹诺酮类(氧氟沙星、诺氟沙星)、林可酰胺类(克林霉素)、氯霉素类(氯霉素)及其它抗菌药物的测定和评价。
下列术语和定义适用于本文件
抗菌药物 ant bacter ial drugs
具有抑菌和(或)杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化
学合成药物。
4检测方法
4.1原理
试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱串联质谱
仪测定，内标法定量。
4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为GB/6682规定的一级水。
标准名称：消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求
英文名称： Analytical method and evaluation requirements for antibacterial drugs in disinfectant and antibacterial and bacteriostatic agents
标准格式：PDF
发布时间：2020-07-20
实施时间：2021-02-01
标准大小：752K.
标准介绍：本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求。
本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类(四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素)、大环内酯类(红霉素)、β-内酰胺类(头孢拉定)、磺胺类(磺胺嘧啶)、喹诺酮类(氧氟沙星、诺氟沙星)、林可酰胺类(克林霉素)、氯霉素类(氯霉素)及其它抗菌药物的测定和评价。
下列术语和定义适用于本文件
抗菌药物 ant bacter ial drugs
具有抑菌和(或)杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化
学合成药物。
4检测方法
4.1原理
试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱串联质谱
仪测定，内标法定量。
4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为GB/6682规定的一级水。
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标准内容
ICS11.080
TiikAacJouakAa
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T6842020
消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求
Analytical method and evaluation requirements for antibacterial drugs in disinfectantand antibacterial and bacteriostatic agents2020-07-20发布
2021-02-01实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、北京市疾病预防控制中心、江苏省食品药品检验研究院、中国药科大学、国家食品安全风险评估中心、山东省疾病预防控制中心、徐州市疾病预防控制中心、东南大学附属中大医院。本标准主要起草人：徐燕、吴晓松、朱峰、胡小键、王鬼、李放、吉文亮、张流波、丁晓静、李舱远、钱海、崔树玉、陈越英、沈瑾、李炎、赵云峰、陈达炜、苏冠民、常桂秋、褚宏亮、谈智、范晶晶、孔庆芳、孙宏。
1范围
iiKAa-cJouaKA
wS/T6842020
消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类（四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素）、大环内酯类（红霉素）、β-内酰胺类（头孢拉定）、磺胺类（磺胺嘧啶）、喹诺酮类（氧氟沙星、诺氟沙星）、林可酰胺类（克林霉素）、氯霉素类（氯霉素）及其它抗菌药物的测定和评价。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法中华人民共和国药典
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
抗菌药物
antibacterialdrugs
具有抑菌和（或）杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化学合成药物。
4检测方法
4.1原理
试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。4.2.1试剂
4.2.1.1乙（CHCN）。
4.2.1.2甲酸（HCOOH）。
4.2.1.3甲醇（CHOH）。
4.2.1.4氯化钠（NaCI）：分析纯。1
4.2.2试剂配制
4.2.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸1.0mL，用水定容至1000mL，混匀。4.2.2.2甲醇水溶液：取甲醇800mL，加水200mL，混匀。4.2.3标准品
iiiKAa-cJouaKA
WS/T6842020
四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素、四环素-D6、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-Ds、左氧氟沙星-D8、红霉素-13C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-D5，纯度均大于98.5%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，其他相关信息参见附录A。4.2.4标准溶液配制
4.2.4.1标准储备液(约1.0mg/mL)：分别准确称取四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素约10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的标准储备液，在-20℃土2℃下冷冻保存，有效期为3个月。
4.2.4.2混合标准中间液(10μg/mL)：分别准确吸取适量各单一标准储备液于25mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成浓度为10ug/mL的混合标准中间液，冷藏避光保存，有效期为1个月。4.2.4.3内标化合物标准储备液(约1.0mg/mL)：分别称取四环素-D、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-Ds、左氧氟沙星-Dg、红霉素-13C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-Ds约10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的内标储备液，在-20℃土2°℃下冷冻保存，有效期为6个月。4.2.4.4混合内标化合物标准中间液：分别吸取适量单一内标储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成1μg/mL的混合内标中间液，冷藏避光保存，有效期为3个月。4.2.4.5混合标准溶液：用甲醇水溶液将抗菌药物标准中间液配制成混合标准系列溶液，如1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L，各系列溶液中混合内标化合物浓度均为10μg/L，超高效液相色谱-串联质谱仪测定。临用现配。4.2.5材料
有机系滤膜：孔径为0.22μm。
4.3仪器和设备
4.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源（ESI源）。4.3.2分析天平：感量为0.1mg。4.3.3离心机：转速≥9000r/min。4.3.4涡旋混合器。
4.3.5超声波清洗器。
4.4分析步骤
4.4.1样品前处理
4.4.1.1液体剂型
iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，加入0.15g氯化钠，涡旋混匀，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。4.4.1.2其它剂型
4.4.1.2.1凝胶剂型
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0uL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL乙睛，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，再加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。
4.4.1.2.2膏霜剂型
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。
4.4.2样品测定
4.4.2.1超高效液相色谱参考条件超高效液相色谱参考条件如下：色谱柱：C18柱（柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8um），或相当者：a)
流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙睛：流速：0.3mL/min
柱温：40°℃；
进样体积：5μL；
梯度洗脱程序：见附录B。
4.4.2.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
电离方式：ESI+、ESI-同时扫描：b）
离子源温度：550℃：
毛细管电压：ESI+：5.5kV；ESI-：-4.5kV：气帘气：2.1×10°Pa
雾化气：4.5×105Pa
辅助气：4.5×10°Pa；
监测模式：多反应监测（MRM）模式：其它质谱参数：见附录C。bzxZ.net
4.4.2.3标准曲线的制作
iiiKAa~cJouaKAa
WS/T6842020
将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，测得相应的峰面积，以被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比对相应的质量浓度做标准曲线，以离子对定性，采用内标法进行定量分析，标准图谱参见附录D。4.4.2.4定性测定
在相同测试条件下，试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在土2.5%之内，且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的标准溶液中相对离子丰度一致，其相对丰度比偏差应符合表1要求。表1相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
4.4.2.5定量测定
>20~≤50
>10～20
本方法采用内标法定量。纵坐标为被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比（四环素、金霉素以四环素-De为内标，土霉素以土霉素-13C22-15N2为内标，米诺环素以米诺环素-D.为内标，强力霉素以强力霉素-D,为内标，红霉素以红霉素-13C-D,为内标，头孢拉定以头孢氨苄-Ds为内标，磺胺嘧啶以磺胺嘧啶-D6为内标，氧氟沙星、诺氟沙星以左氧氟沙星-D:为内标、克林霉素以噻菌灵-D4为内标，氯霉素以氯霉素-Ds为内标），横坐标为样品中被测组分的质量浓度。4.4.2.6测定
将试样溶液注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和两对离子（特征离子对/定量离子对）所对应的色谱峰面积相对丰度进行定性，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。4.4.3空白试验
除不加试样外，均按4.4.1步骤进行。4.4.4结果计算和表述
试样中目标化合物的含量按式（1）计算：X=pxV
式中：
X试样中被测组分的含量，单位为微克每千克（ug/kg）：)
-试样溶液中被测组分按照内标法在标准曲线中对应的浓度，单位为微克每升（ug/L）：p
V试样最终定容体积，单位为毫升（mL）：m
样品称样量，单位为克（g）。
计算结果保留三位有效数字。
4.4.5精密度
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在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%，本方法的回收率和精密度见附录E。
4.4.6检出限和定量限
当取样量为0.2g，提取液体积为3.0mL，本方法的检出限和定量限见附录F。其它抗菌药物的检测方法
可参照《中华人民共和国药典》方法进行检测。《中华人民共和国药典》未涵盖的检测方法，可参考文献报道的方法，通过验证后方可应用。评价要求
6.1消毒剂与抗抑菌剂中不应添加抗菌药物6.2消毒剂与抗抑菌剂中四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素的含量或总量均不应超过30mg/kg。6.3消毒剂与抗抑菌剂中其他抗菌药物的含量或总量不应超过外用药物最小规格的1%。5
标准品相关信息见表A.1。
化合物
四环素
土莓素
金霉素
米诺环素
强力霉素
红霉素
英文名称
Tetracycline
Oxytetracycline
Chlorotetracycline
Minocycline
Doxycycline
Erythromycin
附录A
（资料性附录）
标准品相关信息
表A.1标准品相关信息
分子式
Ca.Ha4N.O
CaHeNOg
CaHaaCIN2O
CaHaNO
CsHeNO13
CAS编号
60-54-8
79-57-2
57-62-5
10118-90-8
564-25-0
114-07-8
iiiKAa-cJouaKAa
WS/T6842020
化学结构式
头孢拉定
磺胺嘧啶
氧氟沙星
诺氟沙星
克林霉素
氯霉素
四环素-D
土霉素-13C2-15N2
Cephradine
Sulfadiazine
Ofloxacin
Norfloxacin
Clindamycin
Chloramphenicol
Tetracycline-D6
Oxytetracycline-\Ca-N
CreHiaN.O,S
CioHroN.OS
CiHaoFN.0
CirHisFN.O
CHCIN20.S
CHC1.N.Os
1CaHaN.0g
38821-53-3
68-35-9
82419-36-1
70458-96-7
18323-44-9
56-75-7
iiiKAa-cJouaKA
wS/T6842020
米诺环素-D
强力霉素-D
磺胺嘧啶-D
头孢氨芒-Ds
左氧氟沙星-Ds
红霉素-\C-D
噻菌灵-D
氯霉素-D;
Minocycline-D,
Doxycycline--Ds
Sulfadiazine-D,
Cephalexin-D,
Levofloxacin-D
Erythromyein-\c-Da
Thiabendazole-D.
Chloramphenicol-D,
CasHaDNO
Ca2HaD.N.O
CoHD.N.O,S
CHC1DN.O.S
CH2D.FN.0
CCHeD.NOra
CoHDNS
CH.C1DN.O
1036070-10-6
1217716-71-6
959119-26-7
1190007-20-5
202480-68-0
iiiKAa-cJouaKAa
WS/T6842020
HaC.13CDa
附录B
（规范性附录）
超高效液相色谱梯度洗脱程序
超高效液相色谱梯度洗脱程序见表B.1。表B.1超高效液相色谱梯度洗脱程序时间/min
流动相A/%
iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
流动相 B/%
附录℃
（规范性附录）
质谱参考条件
12种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数见表C.1。表c.1
检测物质
四环素
土霉素
金霉素
米诺环素
强力霉素
红霉素
头孢拉定
磺胺嘧啶
氧氟沙星
诺氟沙星
克林霉素
氯霉素
四环素-D
土霉素
13C2-15N2
米诺环素-D6
强力霉素-D3
iiiKAacJouaKA
WS/T6842020
12种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数母离子
子离子
保留时间/min
DP电压/V
碰撞能/eV
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TiikAacJouakAa
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T6842020
消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求
Analytical method and evaluation requirements for antibacterial drugs in disinfectantand antibacterial and bacteriostatic agents2020-07-20发布
2021-02-01实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、北京市疾病预防控制中心、江苏省食品药品检验研究院、中国药科大学、国家食品安全风险评估中心、山东省疾病预防控制中心、徐州市疾病预防控制中心、东南大学附属中大医院。本标准主要起草人：徐燕、吴晓松、朱峰、胡小键、王鬼、李放、吉文亮、张流波、丁晓静、李舱远、钱海、崔树玉、陈越英、沈瑾、李炎、赵云峰、陈达炜、苏冠民、常桂秋、褚宏亮、谈智、范晶晶、孔庆芳、孙宏。
1范围
iiKAa-cJouaKA
wS/T6842020
消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类（四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素）、大环内酯类（红霉素）、β-内酰胺类（头孢拉定）、磺胺类（磺胺嘧啶）、喹诺酮类（氧氟沙星、诺氟沙星）、林可酰胺类（克林霉素）、氯霉素类（氯霉素）及其它抗菌药物的测定和评价。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法中华人民共和国药典
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
抗菌药物
antibacterialdrugs
具有抑菌和（或）杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化学合成药物。
4检测方法
4.1原理
试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。4.2.1试剂
4.2.1.1乙（CHCN）。
4.2.1.2甲酸（HCOOH）。
4.2.1.3甲醇（CHOH）。
4.2.1.4氯化钠（NaCI）：分析纯。1
4.2.2试剂配制
4.2.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸1.0mL，用水定容至1000mL，混匀。4.2.2.2甲醇水溶液：取甲醇800mL，加水200mL，混匀。4.2.3标准品
iiiKAa-cJouaKA
WS/T6842020
四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素、四环素-D6、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-Ds、左氧氟沙星-D8、红霉素-13C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-D5，纯度均大于98.5%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，其他相关信息参见附录A。4.2.4标准溶液配制
4.2.4.1标准储备液(约1.0mg/mL)：分别准确称取四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素约10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的标准储备液，在-20℃土2℃下冷冻保存，有效期为3个月。
4.2.4.2混合标准中间液(10μg/mL)：分别准确吸取适量各单一标准储备液于25mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成浓度为10ug/mL的混合标准中间液，冷藏避光保存，有效期为1个月。4.2.4.3内标化合物标准储备液(约1.0mg/mL)：分别称取四环素-D、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-Ds、左氧氟沙星-Dg、红霉素-13C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-Ds约10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的内标储备液，在-20℃土2°℃下冷冻保存，有效期为6个月。4.2.4.4混合内标化合物标准中间液：分别吸取适量单一内标储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成1μg/mL的混合内标中间液，冷藏避光保存，有效期为3个月。4.2.4.5混合标准溶液：用甲醇水溶液将抗菌药物标准中间液配制成混合标准系列溶液，如1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L，各系列溶液中混合内标化合物浓度均为10μg/L，超高效液相色谱-串联质谱仪测定。临用现配。4.2.5材料
有机系滤膜：孔径为0.22μm。
4.3仪器和设备
4.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源（ESI源）。4.3.2分析天平：感量为0.1mg。4.3.3离心机：转速≥9000r/min。4.3.4涡旋混合器。
4.3.5超声波清洗器。
4.4分析步骤
4.4.1样品前处理
4.4.1.1液体剂型
iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，加入0.15g氯化钠，涡旋混匀，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。4.4.1.2其它剂型
4.4.1.2.1凝胶剂型
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0uL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL乙睛，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，再加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。
4.4.1.2.2膏霜剂型
称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。
4.4.2样品测定
4.4.2.1超高效液相色谱参考条件超高效液相色谱参考条件如下：色谱柱：C18柱（柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8um），或相当者：a)
流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙睛：流速：0.3mL/min
柱温：40°℃；
进样体积：5μL；
梯度洗脱程序：见附录B。
4.4.2.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
电离方式：ESI+、ESI-同时扫描：b）
离子源温度：550℃：
毛细管电压：ESI+：5.5kV；ESI-：-4.5kV：气帘气：2.1×10°Pa
雾化气：4.5×105Pa
辅助气：4.5×10°Pa；
监测模式：多反应监测（MRM）模式：其它质谱参数：见附录C。bzxZ.net
4.4.2.3标准曲线的制作
iiiKAa~cJouaKAa
WS/T6842020
将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，测得相应的峰面积，以被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比对相应的质量浓度做标准曲线，以离子对定性，采用内标法进行定量分析，标准图谱参见附录D。4.4.2.4定性测定
在相同测试条件下，试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在土2.5%之内，且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的标准溶液中相对离子丰度一致，其相对丰度比偏差应符合表1要求。表1相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
4.4.2.5定量测定
>20~≤50
>10～20
本方法采用内标法定量。纵坐标为被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比（四环素、金霉素以四环素-De为内标，土霉素以土霉素-13C22-15N2为内标，米诺环素以米诺环素-D.为内标，强力霉素以强力霉素-D,为内标，红霉素以红霉素-13C-D,为内标，头孢拉定以头孢氨苄-Ds为内标，磺胺嘧啶以磺胺嘧啶-D6为内标，氧氟沙星、诺氟沙星以左氧氟沙星-D:为内标、克林霉素以噻菌灵-D4为内标，氯霉素以氯霉素-Ds为内标），横坐标为样品中被测组分的质量浓度。4.4.2.6测定
将试样溶液注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和两对离子（特征离子对/定量离子对）所对应的色谱峰面积相对丰度进行定性，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。4.4.3空白试验
除不加试样外，均按4.4.1步骤进行。4.4.4结果计算和表述
试样中目标化合物的含量按式（1）计算：X=pxV
式中：
X试样中被测组分的含量，单位为微克每千克（ug/kg）：)
-试样溶液中被测组分按照内标法在标准曲线中对应的浓度，单位为微克每升（ug/L）：p
V试样最终定容体积，单位为毫升（mL）：m
样品称样量，单位为克（g）。
计算结果保留三位有效数字。
4.4.5精密度
iiiKAa~cJouaKA
wS/T6842020
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%，本方法的回收率和精密度见附录E。
4.4.6检出限和定量限
当取样量为0.2g，提取液体积为3.0mL，本方法的检出限和定量限见附录F。其它抗菌药物的检测方法
可参照《中华人民共和国药典》方法进行检测。《中华人民共和国药典》未涵盖的检测方法，可参考文献报道的方法，通过验证后方可应用。评价要求
6.1消毒剂与抗抑菌剂中不应添加抗菌药物6.2消毒剂与抗抑菌剂中四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素的含量或总量均不应超过30mg/kg。6.3消毒剂与抗抑菌剂中其他抗菌药物的含量或总量不应超过外用药物最小规格的1%。5
标准品相关信息见表A.1。
化合物
四环素
土莓素
金霉素
米诺环素
强力霉素
红霉素
英文名称
Tetracycline
Oxytetracycline
Chlorotetracycline
Minocycline
Doxycycline
Erythromycin
附录A
（资料性附录）
标准品相关信息
表A.1标准品相关信息
分子式
Ca.Ha4N.O
CaHeNOg
CaHaaCIN2O
CaHaNO
CsHeNO13
CAS编号
60-54-8
79-57-2
57-62-5
10118-90-8
564-25-0
114-07-8
iiiKAa-cJouaKAa
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化学结构式
头孢拉定
磺胺嘧啶
氧氟沙星
诺氟沙星
克林霉素
氯霉素
四环素-D
土霉素-13C2-15N2
Cephradine
Sulfadiazine
Ofloxacin
Norfloxacin
Clindamycin
Chloramphenicol
Tetracycline-D6
Oxytetracycline-\Ca-N
CreHiaN.O,S
CioHroN.OS
CiHaoFN.0
CirHisFN.O
CHCIN20.S
CHC1.N.Os
1CaHaN.0g
38821-53-3
68-35-9
82419-36-1
70458-96-7
18323-44-9
56-75-7
iiiKAa-cJouaKA
wS/T6842020
米诺环素-D
强力霉素-D
磺胺嘧啶-D
头孢氨芒-Ds
左氧氟沙星-Ds
红霉素-\C-D
噻菌灵-D
氯霉素-D;
Minocycline-D,
Doxycycline--Ds
Sulfadiazine-D,
Cephalexin-D,
Levofloxacin-D
Erythromyein-\c-Da
Thiabendazole-D.
Chloramphenicol-D,
CasHaDNO
Ca2HaD.N.O
CoHD.N.O,S
CHC1DN.O.S
CH2D.FN.0
CCHeD.NOra
CoHDNS
CH.C1DN.O
1036070-10-6
1217716-71-6
959119-26-7
1190007-20-5
202480-68-0
iiiKAa-cJouaKAa
WS/T6842020
HaC.13CDa
附录B
（规范性附录）
超高效液相色谱梯度洗脱程序
超高效液相色谱梯度洗脱程序见表B.1。表B.1超高效液相色谱梯度洗脱程序时间/min
流动相A/%
iiiKAa~cJouaKA
WS/T6842020
流动相 B/%
附录℃
（规范性附录）
质谱参考条件
12种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数见表C.1。表c.1
检测物质
四环素
土霉素
金霉素
米诺环素
强力霉素
红霉素
头孢拉定
磺胺嘧啶
氧氟沙星
诺氟沙星
克林霉素
氯霉素
四环素-D
土霉素
13C2-15N2
米诺环素-D6
强力霉素-D3
iiiKAacJouaKA
WS/T6842020
12种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数母离子
子离子
保留时间/min
DP电压/V
碰撞能/eV
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