GB/T 39999-2021.Determination of 15 kinds of prohibited quinolone-type antibiotics in cosmetics including enrofloxacin-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry.
1范围
GB/T 39999规定了化妆品中15种禁用喹诺酮类抗生素的液相色谱-串联质谱测定方法的原理、试剂或材料、仪器设备、试验步骤、结果计年、回收率和精密度、允许差等内容。
GB/T 39999适用于水剂类、乳液类和非蜡基膏霜类化妆品中依诺沙星、麻保沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、奥比沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星和莫西沙星的测定。
GB/T 39999不适用于粉类化妆品中喹诺酮类抗生素的测定。
本标准15种喹诺酮类抗生素的方法检出限均为0.15mg/kg,定量限均为0.50mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的15种喹诺酮类抗生素采用酸化乙腈提取,离心后合并提取液并浓缩,正已烷净化,用液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。
4试剂或材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。
4.1水,GB/T 6682,-级。
4.2乙腈:色谱纯。
4.3甲酸:色谱纯。
4.4正已烷:色 谱纯。

ICS 71.100.70
中华人民共和国国家标准
GB/T39999—2021
化妆品中恩诺沙星等15种禁用喹诺酮类抗生素的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of 15 kinds of prohibited quinolone-type antibiotics in cosmeticsincluding enrofloxacin-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry2021-04-30发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-11-01实施
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本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。标滩由中国轻工业联合会提出。本标准山全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口GB/T39999—2021
本标起草单位：江苏省产品质量监督检验研究院、嘉文丽（福建)化妆品有限公司、无限极（中国）有限公司、苏州绿叶用品有限公司、江苏奇力康皮肤药业有限公司、苏州世谱检测技术有限公司、州质量监督检测研究院、下海市用化学工业研究所、「海相宜本草化妆品股份有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、广州市娇兰化妆品有限公司、完美（广东）日用品有限公司、江苏省食品药品监督检验研究院、常州市食品药品监督检验中心、河北省食品检验研究院、常州检验检测标准认证研究院。本标准主要起草人：卢剑、曲梅、曹倩文、饶焕文、杨琼利、刘冬、智、子知庆、沈敏、关克、张征、张晓强、邹洁、杨洋、张丽华、顾洁、孙红梅、候爱霞、杨梅、张岩、林建平、宋淑文、周奇、李淑琴、杨安全、张彦红、范素芳、黄金风、孙卿娜、马明、陈汉金、陈晓珍、郭新东、吴玉鎏、彭露、工常捷、武中平、rrKaeerkAca-
GB/T39999—2021
本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用物质。禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，国家有限量规定的应符合其规定；术规定限量的.成进行安全性风险评估，确保在止常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害
前我国尚末规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。-riKaeerkAca
1范围
化妆品中恩诺沙星等15种禁用喹诺酮类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法GB/T 39999—2021
本标准规定化妆品中15种禁用喹诺酮类抗牛素的液朴色谱-串联质谱测定方法的原埋、试剂或材料、仪器设备、诚验步骤、结果计年、回收率和精密度、允许差等内容。本标准适用丁水剂类、乳液类和非基膏霜类化妆品中依诺沙星、麻保沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、培氟沙星、环内沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、奥比沙星、沙持沙星、司帕沙星、双氟沙星和莫西沙星的测定
本标滩不适用于粉奖化妆品巾哗诺酮类抗牛素的测定本标准15种喹诺酮类抗生素的方法检出限均为0.15mg/kg，定量限均为0.50mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件，GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样巾的15种唑诺酮类抗生素采用酸化乙睛提取，离心后合并提取液并缩，正己烷净化，用液杆色谱-串联质谱仪测定.外标法定量。4试剂或材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯。水.G13/T6682,一级
乙晴：色谱纯
甲酸：色谱纯。
正已烷：色纯
4.50.1%甲酸乙睛溶液：准确量取1.0mL甲酸（4.3)至1000mL容量瓶巾.用乙睛（4.2)稀释至刻度。4.60.1%中酸溶液：准确量取1.0ml.中酸(1.3)至1000ml.容量瓶中.用水稀释至刻度，4.7
定容液：准确量取10mlL.乙（1.2)和90 ml.0.1%中酸溶液(1.6）,混勾。4.8乙饱和的正已溶液：量取20mL乙腈（4.2），加人到50mL正已烷（4.4)中，混勾，静置，上层清被备用
4.9标准物质：纯度均不小于98%.15种哗诺酮类抗生素标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分了式、相对分了质量及化学结构式参见附录A中表A.1,4.10混合标准工作溶液：分别准确称取适量标准物质（1.9）（精确至0.！mg），用乙睛（1.2）配制成质量浓度为1000g/mL的单标标准些备液（于4℃避光保存，川保存3个月）。准确移取各单标标准贮备1
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GB/T39999—2021
液0.25mL于50mL容量瓶巾.用乙睛（4.2)定容，制得混合标准巾间T作溶液（各为5μg/mL现配现用）。取相应的空白样品，按照6.1进行处理，得到基质溶液，准确移取适量混合标准中间工作溶液.用基质溶液逐级稀释成质量浓度为5.0g/110ug/1、20g/L50ng/1..100g/L.200ug/L.的系列混合标准工作溶液（现配现用）。4.11滤膜：孔径为0.22m的聚四氟乙烯滤膜5仪器设备
液相色谱-一重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源。分析犬平：感量0.001g和0.0001g：5.2
涡旋振荡器。
超声波清洗仪：工作频率不低于A0kHz。5.4
离心机：最高转速不低于1000r/min。氮吹仪。
试验步骤
试样处理
称取试样1.0g（精确至0.001g），置于15ml其塞塑料离心管中，加人8m1.0.1%中酸乙晴溶液（4.5）.涡旋振荡1min.超声提取20min4o00r/min离心2min.收上清液。残渣用8mL0.1%甲酸乙睛溶液（4.5)重复提取一次，合并上清液.用0.1%甲酸乙溶液（4.5）定容至25mL准确移取1.0ml上述提取液，于50℃水浴巾氮吹至近十，用定容液（4.7)定容至2.0mL，川人2mL乙晴饱和的止已烷溶液（4.8），涡旋振荡lmin.1000r/min离心2min，下层清液经滤膜过滤后供液相色谱-三重四搬杆质谱联用仪测定：
6.2测定
6.2.1液相色谱参考工作条件
液相色谱参考工作条件如下：
色谱柱：C.。柱，1.9μm,100mm×2.1mm(内径)或C柱，5.0μm,150mmX4.6mm(内径）a)
流动相：A：0.1%甲酸乙睛溶液（4.5)和B：0.1%甲酸溶液（4.6）.迹行梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1；
流速：0.3mL/min：
d）柱温:30C;
进样量：5L。
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时间/min
质谱参考工作条件
质谱参考工作条件如下：
离子源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：正离了扫描；
喷雾电压：5500V：
离子源温度：400℃：
雾化气压力：0.345MPa；
辅助气压力：0.414MPa：
气帘气压力：0.138MPa；
检测方式：多反应监测(MRM)：
梯度洗脱程序
15种唑诺酮类抗生素母离了、了离了、保留时间及其他质谱参数见表2，表215种喹诺酮类抗生素的质谱参数化合物
依诺沙星
麻保沙星
诺氟沙星
氧氟沙呆
敏罗沙呆
培氟沙垦
环内沙呈
洛美沙星
保留时间/min
母离子m/z
子离子 ㎡/2
去族电压/V
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诞撞电压/V
GB/T 39999—2021
碰撞室出电压/V
GB/T 39999—2021
化合物
丹诺沙星
恩诺沙星
奥比沙星
沙拉沙呆
司帕沙星
双氟钞呈
莫西沙星
保舒时间/min
“定量离了
6.2.3标准工作曲线绘制
母离子m/z
表2（续）免费标准下载网bzxz
子离子㎡/2
去簇电压/V
姚撞电压/V
碰撞率出口电压V
将混合标准T作溶液（4.10）.按高效液朴色谱和质谱参考T作条件（6.2.1和6.2.2)进行测定，以定量离子色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对成的溶液浓度为横坐标作图.绘制标准工作曲线。15种喹诺酮类抗生素标准物质的多反应监测色谱图参见附录13中图13.1，6.2.4试样测定
按高效液相色谱和质谱参考工作条件（6.2.1和62.2）测定试样落液（61）：如果试样巾待测物质的色谱峰保留时间与标准溶液的-致.并且在扣除背景后的试样质谱图中，所选择的离子均出现而且选择离了的相对丰度与标准物质的进行比较，相对偏差不超过表3规定的范国,可判定为试样中含有对应的待测物。记录定量离了色谱峰的峰而积，以外标法定量，试样溶液中被测物的响应值均应在标准曲线的线性范用之内，超出线性范用的试样溶液可用定容液（4.7)适当稀释后进行测定：表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
6.3空自试验
除不称取试样外，均按6.1~-6.2进行测定。4
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7试验数据处理
试样中恩诺沙星等15种喹诺酮类抗生素的含量按式（1)计算：X
式中：
(0:p)XV1 000
mx1000
试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)；X
GB/T39999—2021
从标准曲线得到的试样溶液中被测组分的质量浓度，单位为微克每升（ug/I.)；从标准曲线得到的空白样品溶液中被测红分的质量浓度.单位为微克每升（1g/L)；试样溶液首次定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g)：
稀释倍数、
计算结果保留两位有效数字。
回收率和精密度
在添浓度为0.50mg/kg5.0mg/kg范围内.回收率为80%~110%相对标准偏差小于10%。9充许差
在重复性条件下状得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%5
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GB/T39999—2021
附录A
（资料性附录）
15种喹诺酮类抗生素标准物质的信息15种喹诺酮类抗生素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式见表A.
表A.115种喹诺酮类抗生素的中文名称、英文名称CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式中文名称
依诺沙星
麻保沙革
诺氟沙呆
氧氟钞显
氣罗沙星
培氟莎呆
英文名称
Enoxacin
Marbofloxncin
Norfloxacin
Oloxacin
Fleroxacin
Pefloxatin
CAS号
74011-58-8
115550351
70458-96-7
82119-36-1
79660723
70458-92-3
分子式
C..Hh.Fn.o.
C,HFN,O,
C-Ie FsN, Os
-iKaeerkca
相对分子
化学结构式
中文名称
环丙沙显
洛美沙革
丹诺纱呆
恩诺沙呈
奥比沙星
沙拉钞星
可帕痧呆
英文名称
Ciprofloxacin
Lomefloxrcin
Danalloxarin
Enrofloxacin
Orbiflaxacin
Saralloxaein
Sparfloxacin
CAS号
97867-33-9
98079528
112398-08-0
93106-60-6
113617633
98105-99-8
110871-86-8
表A.1（续）
分子式
C-Hrs F.N, O
C,HF,N,O
C.Hr. F, V,O.
CH. F VO:
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相对分子
GB/T 39999—2021
化学结构式
GB/T 39999—2021
中文名称
双氣沙呆
莫西莎星
英文名称
Tiflox.cin
Moxifloxacin
CAS号
98106173
151096-09-2
表A.1(续）
分子式
-rrKaeerkca-
相对分子
化学结构式
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