GB/T 39104.1-2020
基本信息
标准号： GB/T 39104.1-2020
中文名称：纺织品 抗真菌性能的测定第1部分:荧光法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 39104.1-2020.Textiles-Determination of antifungal activity of textile products-Part 1 :Luminescence method.
1范围
GB/T 39104的本部分规定了通过检测酶反应[三磷酸腺苷(ATP)法]所产生的荧光强度测定纺织品抗真菌性能的定量试验方法。
GB/T 39104.1适用于各类纺织品,如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用品及其他纺织产品。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 20944.2-2007 纺织品抗菌性能的评价 第 2部分:吸收法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
对照样 control fabric
用于验证试验真菌生长条件的织物。
注:对照样可采用与试样材质相同但未经过抗真菌整理的纺织品。如果无法获得上述试样,用不含荧光增白剂及未经整理的100%棉织物作为对照样,使用前按GB/T 8629规定在60℃、不添加任何洗涤剂或增白剂的条件下循环洗涤10次,每个循环洗涤10 min,漂洗2次共5 min。
3.2
抗真菌剂 antifungal agent
抑制或减缓真菌生长或减少真菌数量的助剂。
3.3
抗真菌整理 antifungal treatment
抑制或缓和真菌生长或降低真菌数量的整理。
3.4.
孢子悬液 spore suspension
在含阴离子表面活性剂的无菌水中均匀分散有真菌孢子的液体。
3.5
三磷酸腺苷 adenosine triphosphate;ATP
活真菌中存在的一种多功能核苷酸。
3.6
抗真菌性 antifungal activity
抑制或减缓真菌生长的性能,用对照样和试样中ATP的对数所表示的增长值之差来表征。
1范围
GB/T 39104的本部分规定了通过检测酶反应[三磷酸腺苷(ATP)法]所产生的荧光强度测定纺织品抗真菌性能的定量试验方法。
GB/T 39104.1适用于各类纺织品,如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用品及其他纺织产品。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 20944.2-2007 纺织品抗菌性能的评价 第 2部分:吸收法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
对照样 control fabric
用于验证试验真菌生长条件的织物。
注:对照样可采用与试样材质相同但未经过抗真菌整理的纺织品。如果无法获得上述试样,用不含荧光增白剂及未经整理的100%棉织物作为对照样,使用前按GB/T 8629规定在60℃、不添加任何洗涤剂或增白剂的条件下循环洗涤10次,每个循环洗涤10 min,漂洗2次共5 min。
3.2
抗真菌剂 antifungal agent
抑制或减缓真菌生长或减少真菌数量的助剂。
3.3
抗真菌整理 antifungal treatment
抑制或缓和真菌生长或降低真菌数量的整理。
3.4.
孢子悬液 spore suspension
在含阴离子表面活性剂的无菌水中均匀分散有真菌孢子的液体。
3.5
三磷酸腺苷 adenosine triphosphate;ATP
活真菌中存在的一种多功能核苷酸。
3.6
抗真菌性 antifungal activity
抑制或减缓真菌生长的性能,用对照样和试样中ATP的对数所表示的增长值之差来表征。
标准图片预览
标准内容
ICS 59.080.01
中华人民共和国国家标准
GB/T 39104.12020
纺织品
抗真菌性能的测定
第1部分：荧光法
Textiles-Determination of antifungal activity of textile products-Part 1Luminescencemethod
(IS013629-1:2012,M0D)
2020-10-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-05-01实施
-rrKaeerKAca-
法》。
GB/T39104≤纺织品抗真菌性能的测定》分为两个部分：第1部分：荧光法；
一第2部分：平而计数法。
本部分为GB/T39104的第1部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。GB/T 39104.1—2020
本部分使用重新起节法修改采用1S01B629-【：2012纺织品抗真菌性能的测定第1部分：炭光本部分与IS0136291：2012相比在结构上调整如小：将1S013629-12012的8.5内的悬置段内容调整为8,51，其后条号顺延；将IS013629-1：2012第10章内的恩置段内容调整为10.1，其后条号顺延；调整了IS0136291：2012中12.1.2.2的结构，将列项d)调整为12.1.2.1\样品洗涤”，其后条号顺延.将列项c)调整为12.1.2.1\试样灭菌”。本部分与IS(）13629-1：2012的主要技术性差异如下：关丁规池性引用文件，不部分做了具有技术性差异的调整，以适应我国的技术条件，调整的情说集中反映在第2章“规范性引用文件”中，其体调整如下：。删除了ISO105-F02：wwW.bzxz.Net
。增引用了GB/T20944.2—2007（见第2章）；明确了1S013629-1.202的8.5.1中SD13培养基配方纯水用量为最终定容至1000ml;补充了10.7中范子悬液的冷藏温度条件：一补充了12.1.3.1中必要时对样品进行灭菌的规定；将IS013629-[+2012的12.1.2.2d)和12.1.3.1中必要时.可按IS06330或其他适当方法洗涤试样\修改为\必要时，接GB/T20944.22007的10.1方法洗涤试样”；补充了14.3抗真菌效果评价；
一附录A中增加了国内保藏机构对应真菌菌株的保藏号，本部分还做了下列编性修收：
将3.1的英文由“controlspecimen\修改为\controlfabric”，与国内外其他抗菌标准保持-致；一将7.18中离心机的离心加速度表述形式由“2000g”调整为\2000×g”明确了7.5中生物安全柜的等级：一明确了7.20中血球计数板的计数单位为CFU/mL”；将8.1.2中腺嘌呤核苷-5-三磷酸酯二钠盐三水合物的分了式调整为\（1HN,NO1P，·3H,0\:
明确了第10章、12.1.2.3中孢子数量单位为\CFU/mL\；对10.7中的注进行了修改
本部分由中国纺织工业联合会提出，本部分山全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209)归口。本部分起草单位：中纺标检验认证股份有限公司、河南平心台健康科技有限公司、中山海关技术中心、广东省微生物分析检测中心、浙江安吉华逸化红有限公司、浙江汇隆新材料股份有限公司、北京洁尔爽高科技有限公司、深圳市贝格受纺织品有限公司、自事基材料（青岛）股份有限公司、联润翔（青岛）纺rrkaeerkAca
GB/T39104.1—2020
织科技有限公司、奥谱天成（厦门)光电有限公司、「海爱丽纺织技术检验有限公司、晋江中纺标检测有限公司。
本部分主要起草人：口静、谢小保、王京力、商成杰、刘亚和、魏婷、姚冷、徐雪峰、张井东、黄效华、吴大伟、梅志牛、刘鸿飞、李业：-iiiKaeerkAca
GB/T39104.1—2020
由抗菌整埋纺织品制成的特殊产品在各领域巾的成用逐年增加，而且这些纺织品无疑有助于防山纺织材料变质，并改善环境和牛活质量：基于以上因素，IS0/TC38/W(23在2007年制定厂IS020743，并继续开展纺织产品抗真茵性能测试方法系列国际标准的研究
本部分来用ATP荧光法作为抗真菌性能的定量分析方法。荧光法的特点如下：
一与菌落计数法相比误差极小：消除了菌落形成的培养时间,缩短试验时间；简化了试验操作。
GB/T39104的H他部分为：
第2部分：平血计数法。
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1范围
纺织品
抗真菌性能的测定
第1部分：荧光法
GB/T39104.1—2020
CB/T39104的本部分规定广通过检测酶反成三避骏腺其（ATP）法所产生的炭光强度测定纺织品抗真菌性能的定量试验方法。本部分适用丁各类纺织品，如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用品及其他纺织产品。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注Ⅱ期的引用文件，仅注Ⅱ期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修收单)适用丁本文件：GB/T20944.2一2007纺织品抗菌性能的评价第2部分：吸收法3术语和定义
下列术语和定义适用丁本文件。3.1
对照样controlfabric
用丁验证试验真菌生长条件的织物。注：对照样可采川与试样材质相同但未经过抗真困格理的药织品。如果无法获得上述试样，川不含求光增剂及未经整理的100%棉织物作为对照样，使川前按GB/T862规在60关、不添加任何洗涤剂或增剂的条件下循环洗涤10次，每·个循环洗涤10min，漂洗2次共：min。3.2
抗真菌剂
Jantifungal agent
抑制或减缓直菌生长或减少真菌数量的助剂。3.3
抗真菌整理antifungal treatment抑制或缓和真菌生长或降低真菌数量的整理，3.4
sporesuspension
孢子悬液
在含阴离子表而活性剂的无菌水中均勾分散有真菌孢子的液体。3.5
三磷酸腺苷：adenosinetriphosphate：ATp活真菌巾存在的种多功能核苷酸：3.6
主antifungal activity
抗真菌性
抑制或减缓真菌生长的性能，用对照样和试样中ATP的对数所衣示的增长值之差来衣征。riKaeerKAca-
GB/T39104.1—2020
荧光法luminescence method
测定真菌细胞中ATP数量的方法。注：结果用ATP的摩尔数来表示、4原理
将试样和对照样分别用试验真菌孢子悬液接种，并在25℃条件下培养42h。通过比较试样与对照样上真菌细胞内ATP荧光强度的测定结果.对真菌增长侦或抗真菌性能进行定量测定，5安全措施
本方法需要使用真茵.成由经过微牛物学技术培训和其有经验的人员进行试验。成遵循国家有关的法规、条例以及与适当的安全预防措施相关的推荐性规范。6试验真菌
试验用真菌菌株应从附录A的表A.1中选取经有关方同意后可使用加入世界菌种保藏联合会（WFCC)的其他菌种保藏机构提供的等效直菌菌株代替
真菌菌株保藏编号和来源成在报告中说明，7仪器设备
实验空常规器其及下列仪器。
7.1纱布：生化试验用或玻璃棉（FR舰格）。7.2培养血：内径约90m和55mm60mm。7.3
十燥灭肉器：温度能保持在160℃180℃7.4
高压灭菌锅：温度能保持在（121+2)（压强相当于103kPa）。7.5
二级生物安全柜：或其他等效设备。铂接种环：环直径为2mm~4mm
7.7L型铂接种钩：
3培养箱：温度能保持在20℃~37℃,充差为二2℃7.9
螺口玻璃瓶：容量为30 mL，带有聚四氟乙烯或硅橡胶垫片和聚丙烯盖。玻棒：直径为5mm~18mm.质量为1g50g：玻璃漏斗
移液管:容量为0.05ml0.1 ml0.2 ml1 ml5ml.和10 ml,允差为5.0%，巴斯德吸管：用于微生物试验。锥形瓶：容量为100mL500mL
锻子。
塑料试管：用于光度计。
诚管振荡器。
离心机：离心加速度约为2 000gkaeerKca-7.19
离心管：用于离心分离。
血球计数板：能计测1×10°CFU/mL~3X10°CFU/ml：7.20
显微镜：放人倍数为200倍。
超声波清洗机：试验用紧凑型，频率约为30kHz50kHz。GB/T 39104.1—2020
3光度计：测试波长为300nm650nm，在8.4和第11章规定的分析条件下能测定浓度为1X10-° mol/1-~1X10- mol/L 的 ATP7.241
pII计：在25℃时.精度为±0.1.7.25冰箱：温度能保持在2℃～10℃7.26冷冻柜：一个可调节至一80℃以下，刃一个可调节至一20℃以下。试管、玻璃瓶、烧瓶、移液管以及镊子应用碱性或中性洗涤剂小心清洗、冲洗并「燥，并在使用前用「燥灭茵器或高压蒸汽灭菌器进行处埋，8试剂和培养基
8.1通用
试验所用试剂成是分析纯的和/或是适用于微生物试验用的宜使用现有商业化的脱水产品制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明进行操作。8.2纯水
用于制备微生物培养基和试剂的分析级纯水，用蒸馏溜、离了交换、超滤和/或反渗（R())装置过滤的方法制取.成无毒或无抑菌物质，8.3阴离子表面活性剂
琥珀辛酯磺酸钠，用丁制备孢子悬液，8.4
荧光剂、试剂和缓冲液
8.4.1通用
接8.1.2-~8.1.8规定配制试剂和缓冲液，可用经过适当验证的商业试剂代替。8.4.2ATP标准储备溶液（1×10-3mol/I.）.以下简称标准ATP溶液腺嘌呤核苷-5-三磷酸酯二钠盐三水合物(C.HiN.Na.Or, P, 3H.O)
纯水（8.2)
100mL（最终定容至）
将配制好的标准原液放入密过装置巾并在不高于一20℃的条件下冷藏，保质期6个月：注：不宜复冻和/或重复使用融化后的原液8.4.3ATP荧光剂缓冲液
N-「三(羟中基)中基7甘氨酸
乙二胺四乙酸二钠盐
乙酸镁(四合水)
DI-二硫苏糖醇
1117mg
25000mg
rKaeerKAca-
GB/T 39104.1—2020
8.4.4ATP荧光剂
250mL（最终定容至）
在8.4和第11章规定的试验条件下，ATP荧光剂应能使光度计(7.23)检测浓度为1×10-mol/L~1X10mol/L 的ATP
荧光素酶
D荧光素
牛血清亡蛋
缓冲液（见8.1.3）
一次完全溶解,在使用前置于室温中15 mim，制备后在3 h内使用。8.4.5ATP萃取剂
ATP萃取剂应且有从培养真菌中萃取细胞内的ATP的能力,萃取率不低丁80%NL三(羟甲基)甲基IⅡ氨酸
苯扎氯铵，10%水溶液
pH(使用氢氙化钠调节pH）
如果在萃取液中使用除1述成分的其他试剂应在报告中记录：8.4.6ATP消除剂
当在SL)B(8.5.2)中川人其1/10体积的ATP消除剂时,应在15min内将培养基中的ATP浓度降低到1011mo1/L以下，制备后在8h内使用。成分如下：
=磷酸腺苷双磷酸酶（EC:3.6.1.5)腺苷酸脱氨酶(EC.3.5.4.6或3.5.4.17)燕糖
牛血清白蛋白
4.6 IU/mL
46 1U/mL
0.05mo1/L2-吗咻乙磺酸一水合物缓冲液pII
如果使用其他消除剂，成在报告中记录其成分8.4.7生理盐水溶液
将8.5g氯化钢加人盛有1000mL纯水的烧瓶中，使其完全溶解并根据蒸汽压力灭菌的需要分装到试管中
8.4.8含阴离子表面活性剂的无菌水将50mg阴离子表而活性剂溶解到纯水中，定容至1000mL，并根据高压蒸汽灭菌的需要分装列试管中。
8.5培养基
8.5.1通用
使用按8.5.2~8.5.5制各的培养基。经验证后可用商业培养基代替。-rrKaeerkAca
GB/T 39104.1—2020
对于制备后不立即使用的培养基.亢在5-10“条件中诺存，保质期1个月。8.5.2沙氏葡萄糖肉汤（SDB）
葡萄糖
灭菌后pH
8.5.3马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）10g
20g40 g
1000ml（最终定容至）
将马铃薯洗净去皮，去除每个芽周国约1mm的部分，尽量减少瑕疵，并将其切成10mm的块状。取200g马铃薯在1000ml.纯水中沸煮1h。用多层纱布（7.1)过滤，取滤液加人纯水，定容至1000ml.。加人20g葡菊赫和159~20g琼脂.待固体充分溶解后放入高压火菌锅（7.4)中火菌。8.5.4斜面培养基
将10m1.完全溶解并预热后的P1)A（8.5.3)倒人试管巾。用棉塞并用蒸汽灭菌。将灭菌后的试管放置在与试验合平所品15倾角的斜间：：并使试管内的物体凝固：当固化琼脂中无流动液体时，再次溶解并固化以备使用。
8.5.5沙氏葡萄糖琼脂（SDA）
肉蛋白陈
葡萄糖
按照供成商说明进行：
灭菌后pH
注：木培养基可能会用于转移法。9真菌的保存与使用
9.1真菌的保存
1000mL（最终定容至）
在二级生物安全机（7.5）或H他等效设备中对试验直菌与孢子近行传代培养和操作：一在传代培养前后对棉塞及试管颈部逝行火焰火菌或化学火菌。-刮取原始茵上的部分茵.以直线或曲线的形式（见图1)将孢子分散在斜而培养基底部的冷凝水中并涂抹到斜面培养基顺部，每次对不同类型的真菌进行传代培养时：使用经火熔灭菌后的接种环（7.6）或L型钻接种钩(7.7)迹行接种。
一一将传代培养斜而培养基在25℃土2℃条件下的培养箱（7.8)巾放置至少8d,并确认在5℃~10℃条件下保存前已经产牛足够的孢子。在品个月内，将传代培举的真菌转移到新斜间培基中，以便讲一步培养和保荐每3个月传代一次。传代培养的真菌菌落传代次数最多应不超过5次，不要使用超过3个月的真菌做逊一步传代培养。
注：在一SC冷冻下燥条件下可进行长期保存。irKaeerKAca-
GB/T 39104.1—2020
说明：
冷徽水：
斜面培养基。
9.2真菌的使用
图1斜面培养基传代培养示意图
为制备第10章中规定的孢子悬液中的直菌，将9.1中保藏的直菌转移到平板培养基上·在25℃C士2℃条件下培养至少8d当培养后的真菌不立即使用时,将其放置在5℃~10℃条件下保存并在7d内使用。
10孢子悬液
孢子悲液的制备和调节过程见图2.2
说明：
在PLDA平板上预培养；
步骤1：
步2：
步骤3：
步骤4：
步骤5。
图2孢子悬液的调节步骤
-rKaeerKAca-
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中华人民共和国国家标准
GB/T 39104.12020
纺织品
抗真菌性能的测定
第1部分：荧光法
Textiles-Determination of antifungal activity of textile products-Part 1Luminescencemethod
(IS013629-1:2012,M0D)
2020-10-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-05-01实施
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法》。
GB/T39104≤纺织品抗真菌性能的测定》分为两个部分：第1部分：荧光法；
一第2部分：平而计数法。
本部分为GB/T39104的第1部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。GB/T 39104.1—2020
本部分使用重新起节法修改采用1S01B629-【：2012纺织品抗真菌性能的测定第1部分：炭光本部分与IS0136291：2012相比在结构上调整如小：将1S013629-12012的8.5内的悬置段内容调整为8,51，其后条号顺延；将IS013629-1：2012第10章内的恩置段内容调整为10.1，其后条号顺延；调整了IS0136291：2012中12.1.2.2的结构，将列项d)调整为12.1.2.1\样品洗涤”，其后条号顺延.将列项c)调整为12.1.2.1\试样灭菌”。本部分与IS(）13629-1：2012的主要技术性差异如下：关丁规池性引用文件，不部分做了具有技术性差异的调整，以适应我国的技术条件，调整的情说集中反映在第2章“规范性引用文件”中，其体调整如下：。删除了ISO105-F02：wwW.bzxz.Net
。增引用了GB/T20944.2—2007（见第2章）；明确了1S013629-1.202的8.5.1中SD13培养基配方纯水用量为最终定容至1000ml;补充了10.7中范子悬液的冷藏温度条件：一补充了12.1.3.1中必要时对样品进行灭菌的规定；将IS013629-[+2012的12.1.2.2d)和12.1.3.1中必要时.可按IS06330或其他适当方法洗涤试样\修改为\必要时，接GB/T20944.22007的10.1方法洗涤试样”；补充了14.3抗真菌效果评价；
一附录A中增加了国内保藏机构对应真菌菌株的保藏号，本部分还做了下列编性修收：
将3.1的英文由“controlspecimen\修改为\controlfabric”，与国内外其他抗菌标准保持-致；一将7.18中离心机的离心加速度表述形式由“2000g”调整为\2000×g”明确了7.5中生物安全柜的等级：一明确了7.20中血球计数板的计数单位为CFU/mL”；将8.1.2中腺嘌呤核苷-5-三磷酸酯二钠盐三水合物的分了式调整为\（1HN,NO1P，·3H,0\:
明确了第10章、12.1.2.3中孢子数量单位为\CFU/mL\；对10.7中的注进行了修改
本部分由中国纺织工业联合会提出，本部分山全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209)归口。本部分起草单位：中纺标检验认证股份有限公司、河南平心台健康科技有限公司、中山海关技术中心、广东省微生物分析检测中心、浙江安吉华逸化红有限公司、浙江汇隆新材料股份有限公司、北京洁尔爽高科技有限公司、深圳市贝格受纺织品有限公司、自事基材料（青岛）股份有限公司、联润翔（青岛）纺rrkaeerkAca
GB/T39104.1—2020
织科技有限公司、奥谱天成（厦门)光电有限公司、「海爱丽纺织技术检验有限公司、晋江中纺标检测有限公司。
本部分主要起草人：口静、谢小保、王京力、商成杰、刘亚和、魏婷、姚冷、徐雪峰、张井东、黄效华、吴大伟、梅志牛、刘鸿飞、李业：-iiiKaeerkAca
GB/T39104.1—2020
由抗菌整埋纺织品制成的特殊产品在各领域巾的成用逐年增加，而且这些纺织品无疑有助于防山纺织材料变质，并改善环境和牛活质量：基于以上因素，IS0/TC38/W(23在2007年制定厂IS020743，并继续开展纺织产品抗真茵性能测试方法系列国际标准的研究
本部分来用ATP荧光法作为抗真菌性能的定量分析方法。荧光法的特点如下：
一与菌落计数法相比误差极小：消除了菌落形成的培养时间,缩短试验时间；简化了试验操作。
GB/T39104的H他部分为：
第2部分：平血计数法。
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1范围
纺织品
抗真菌性能的测定
第1部分：荧光法
GB/T39104.1—2020
CB/T39104的本部分规定广通过检测酶反成三避骏腺其（ATP）法所产生的炭光强度测定纺织品抗真菌性能的定量试验方法。本部分适用丁各类纺织品，如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用品及其他纺织产品。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注Ⅱ期的引用文件，仅注Ⅱ期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修收单)适用丁本文件：GB/T20944.2一2007纺织品抗菌性能的评价第2部分：吸收法3术语和定义
下列术语和定义适用丁本文件。3.1
对照样controlfabric
用丁验证试验真菌生长条件的织物。注：对照样可采川与试样材质相同但未经过抗真困格理的药织品。如果无法获得上述试样，川不含求光增剂及未经整理的100%棉织物作为对照样，使川前按GB/T862规在60关、不添加任何洗涤剂或增剂的条件下循环洗涤10次，每·个循环洗涤10min，漂洗2次共：min。3.2
抗真菌剂
Jantifungal agent
抑制或减缓直菌生长或减少真菌数量的助剂。3.3
抗真菌整理antifungal treatment抑制或缓和真菌生长或降低真菌数量的整理，3.4
sporesuspension
孢子悬液
在含阴离子表而活性剂的无菌水中均勾分散有真菌孢子的液体。3.5
三磷酸腺苷：adenosinetriphosphate：ATp活真菌巾存在的种多功能核苷酸：3.6
主antifungal activity
抗真菌性
抑制或减缓真菌生长的性能，用对照样和试样中ATP的对数所衣示的增长值之差来衣征。riKaeerKAca-
GB/T39104.1—2020
荧光法luminescence method
测定真菌细胞中ATP数量的方法。注：结果用ATP的摩尔数来表示、4原理
将试样和对照样分别用试验真菌孢子悬液接种，并在25℃条件下培养42h。通过比较试样与对照样上真菌细胞内ATP荧光强度的测定结果.对真菌增长侦或抗真菌性能进行定量测定，5安全措施
本方法需要使用真茵.成由经过微牛物学技术培训和其有经验的人员进行试验。成遵循国家有关的法规、条例以及与适当的安全预防措施相关的推荐性规范。6试验真菌
试验用真菌菌株应从附录A的表A.1中选取经有关方同意后可使用加入世界菌种保藏联合会（WFCC)的其他菌种保藏机构提供的等效直菌菌株代替
真菌菌株保藏编号和来源成在报告中说明，7仪器设备
实验空常规器其及下列仪器。
7.1纱布：生化试验用或玻璃棉（FR舰格）。7.2培养血：内径约90m和55mm60mm。7.3
十燥灭肉器：温度能保持在160℃180℃7.4
高压灭菌锅：温度能保持在（121+2)（压强相当于103kPa）。7.5
二级生物安全柜：或其他等效设备。铂接种环：环直径为2mm~4mm
7.7L型铂接种钩：
3培养箱：温度能保持在20℃~37℃,充差为二2℃7.9
螺口玻璃瓶：容量为30 mL，带有聚四氟乙烯或硅橡胶垫片和聚丙烯盖。玻棒：直径为5mm~18mm.质量为1g50g：玻璃漏斗
移液管:容量为0.05ml0.1 ml0.2 ml1 ml5ml.和10 ml,允差为5.0%，巴斯德吸管：用于微生物试验。锥形瓶：容量为100mL500mL
锻子。
塑料试管：用于光度计。
诚管振荡器。
离心机：离心加速度约为2 000gkaeerKca-7.19
离心管：用于离心分离。
血球计数板：能计测1×10°CFU/mL~3X10°CFU/ml：7.20
显微镜：放人倍数为200倍。
超声波清洗机：试验用紧凑型，频率约为30kHz50kHz。GB/T 39104.1—2020
3光度计：测试波长为300nm650nm，在8.4和第11章规定的分析条件下能测定浓度为1X10-° mol/1-~1X10- mol/L 的 ATP7.241
pII计：在25℃时.精度为±0.1.7.25冰箱：温度能保持在2℃～10℃7.26冷冻柜：一个可调节至一80℃以下，刃一个可调节至一20℃以下。试管、玻璃瓶、烧瓶、移液管以及镊子应用碱性或中性洗涤剂小心清洗、冲洗并「燥，并在使用前用「燥灭茵器或高压蒸汽灭菌器进行处埋，8试剂和培养基
8.1通用
试验所用试剂成是分析纯的和/或是适用于微生物试验用的宜使用现有商业化的脱水产品制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明进行操作。8.2纯水
用于制备微生物培养基和试剂的分析级纯水，用蒸馏溜、离了交换、超滤和/或反渗（R())装置过滤的方法制取.成无毒或无抑菌物质，8.3阴离子表面活性剂
琥珀辛酯磺酸钠，用丁制备孢子悬液，8.4
荧光剂、试剂和缓冲液
8.4.1通用
接8.1.2-~8.1.8规定配制试剂和缓冲液，可用经过适当验证的商业试剂代替。8.4.2ATP标准储备溶液（1×10-3mol/I.）.以下简称标准ATP溶液腺嘌呤核苷-5-三磷酸酯二钠盐三水合物(C.HiN.Na.Or, P, 3H.O)
纯水（8.2)
100mL（最终定容至）
将配制好的标准原液放入密过装置巾并在不高于一20℃的条件下冷藏，保质期6个月：注：不宜复冻和/或重复使用融化后的原液8.4.3ATP荧光剂缓冲液
N-「三(羟中基)中基7甘氨酸
乙二胺四乙酸二钠盐
乙酸镁(四合水)
DI-二硫苏糖醇
1117mg
25000mg
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8.4.4ATP荧光剂
250mL（最终定容至）
在8.4和第11章规定的试验条件下，ATP荧光剂应能使光度计(7.23)检测浓度为1×10-mol/L~1X10mol/L 的ATP
荧光素酶
D荧光素
牛血清亡蛋
缓冲液（见8.1.3）
一次完全溶解,在使用前置于室温中15 mim，制备后在3 h内使用。8.4.5ATP萃取剂
ATP萃取剂应且有从培养真菌中萃取细胞内的ATP的能力,萃取率不低丁80%NL三(羟甲基)甲基IⅡ氨酸
苯扎氯铵，10%水溶液
pH(使用氢氙化钠调节pH）
如果在萃取液中使用除1述成分的其他试剂应在报告中记录：8.4.6ATP消除剂
当在SL)B(8.5.2)中川人其1/10体积的ATP消除剂时,应在15min内将培养基中的ATP浓度降低到1011mo1/L以下，制备后在8h内使用。成分如下：
=磷酸腺苷双磷酸酶（EC:3.6.1.5)腺苷酸脱氨酶(EC.3.5.4.6或3.5.4.17)燕糖
牛血清白蛋白
4.6 IU/mL
46 1U/mL
0.05mo1/L2-吗咻乙磺酸一水合物缓冲液pII
如果使用其他消除剂，成在报告中记录其成分8.4.7生理盐水溶液
将8.5g氯化钢加人盛有1000mL纯水的烧瓶中，使其完全溶解并根据蒸汽压力灭菌的需要分装到试管中
8.4.8含阴离子表面活性剂的无菌水将50mg阴离子表而活性剂溶解到纯水中，定容至1000mL，并根据高压蒸汽灭菌的需要分装列试管中。
8.5培养基
8.5.1通用
使用按8.5.2~8.5.5制各的培养基。经验证后可用商业培养基代替。-rrKaeerkAca
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对于制备后不立即使用的培养基.亢在5-10“条件中诺存，保质期1个月。8.5.2沙氏葡萄糖肉汤（SDB）
葡萄糖
灭菌后pH
8.5.3马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）10g
20g40 g
1000ml（最终定容至）
将马铃薯洗净去皮，去除每个芽周国约1mm的部分，尽量减少瑕疵，并将其切成10mm的块状。取200g马铃薯在1000ml.纯水中沸煮1h。用多层纱布（7.1)过滤，取滤液加人纯水，定容至1000ml.。加人20g葡菊赫和159~20g琼脂.待固体充分溶解后放入高压火菌锅（7.4)中火菌。8.5.4斜面培养基
将10m1.完全溶解并预热后的P1)A（8.5.3)倒人试管巾。用棉塞并用蒸汽灭菌。将灭菌后的试管放置在与试验合平所品15倾角的斜间：：并使试管内的物体凝固：当固化琼脂中无流动液体时，再次溶解并固化以备使用。
8.5.5沙氏葡萄糖琼脂（SDA）
肉蛋白陈
葡萄糖
按照供成商说明进行：
灭菌后pH
注：木培养基可能会用于转移法。9真菌的保存与使用
9.1真菌的保存
1000mL（最终定容至）
在二级生物安全机（7.5）或H他等效设备中对试验直菌与孢子近行传代培养和操作：一在传代培养前后对棉塞及试管颈部逝行火焰火菌或化学火菌。-刮取原始茵上的部分茵.以直线或曲线的形式（见图1)将孢子分散在斜而培养基底部的冷凝水中并涂抹到斜面培养基顺部，每次对不同类型的真菌进行传代培养时：使用经火熔灭菌后的接种环（7.6）或L型钻接种钩(7.7)迹行接种。
一一将传代培养斜而培养基在25℃土2℃条件下的培养箱（7.8)巾放置至少8d,并确认在5℃~10℃条件下保存前已经产牛足够的孢子。在品个月内，将传代培举的真菌转移到新斜间培基中，以便讲一步培养和保荐每3个月传代一次。传代培养的真菌菌落传代次数最多应不超过5次，不要使用超过3个月的真菌做逊一步传代培养。
注：在一SC冷冻下燥条件下可进行长期保存。irKaeerKAca-
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说明：
冷徽水：
斜面培养基。
9.2真菌的使用
图1斜面培养基传代培养示意图
为制备第10章中规定的孢子悬液中的直菌，将9.1中保藏的直菌转移到平板培养基上·在25℃C士2℃条件下培养至少8d当培养后的真菌不立即使用时,将其放置在5℃~10℃条件下保存并在7d内使用。
10孢子悬液
孢子悲液的制备和调节过程见图2.2
说明：
在PLDA平板上预培养；
步骤1：
步2：
步骤3：
步骤4：
步骤5。
图2孢子悬液的调节步骤
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