GB/T 39104.2-2020.Textiles-Determination of antifungal activity of textile products-Part 2: Plate count method.
1范围
GB/T 39104的本部分规定了采用平皿计数法对纺织品抗真菌性能进行定量测定的方法。
GB/T 39104.2适用于各类纺织品,如纤维、纱线、织物、服饰、床上用品、家居装饰用品等。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 20944.2-2007 纺织品抗 菌性能的评价第 2部分:吸收法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
对照样 control fabric
用于验证试验真菌生长条件的织物。
注:对照样可采用与试样材质相同但未经过抗真菌整理的纺织品。如果无法获得上述试样,用不含荧光增白剂及未经整理的100%棉织物作为对照样,使用前按GB/T 8629规定在60 ℃、不添加任何洗涤剂或增白剂的条件下循环洗涤10次,每个循环洗涤10 min,漂洗2次共5 min。
3.2
抗真菌剂 antifungal agent
抑制或缓和真菌生长或减少真菌数量的助剂。
3.3
抗真菌整理 antifungal treatment
抑制或缓和真菌生长或减少真菌数量的整理。
3.4
孢子悬液 spore suspension
在含阴离子表面活性剂的无菌水中均匀分散有真菌孢子的液体。
3.5
平皿计数法 plate count method
通过十倍稀释法计数菌落数来计算培养后存在的真菌数量的方法。
注:菌落数用菌落形成单位CFU表示。
3.6
中和剂 neutralizer
用于灭活、中和或抑制抗真菌剂抗真菌性能的化学试剂。

ICS 59.080.01
中华人民共和国国家标准
GB/T 39104.2—2020
纺织品
抗真菌性能的测定
第2部分：平皿计数法
Textiles--Determination of antifungal activity of textile products-Part 2:Plate count method
(ISO 13629-2:2014,MOD)
2020-10-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-05-01实施
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GB/T39104纺织品抗真菌性能的测定》分为两个部分：第1部分：荧光法；
第2部分：平Ⅲ计数法，
本部分为G3/T39104的第2部分。本部分按照GB/T1.12009给山的规则起草。GB/T 39104.2—2020
本部分使用重新起草法修改采用IS0136292：2014≤纺织品抗直菌性能的测定第2部分：平血计数法》：
本部分与1S013629-2：2011租比在结构上调整如下将1S013629-2：2014第8章的感置段内容更改为本部分的8.1，其后条号顺延：将IS013629-2：2014中10.6.1前的悬置段内容史改为本部分的10.6.1.其后条号顺延本部分与IS(136292：2014的主要技术性差异如下：一美于规范性引用文件，本部分做「具有技术性差异的调整，以适成我国的技术条件，调整的情说集中反映在第2章“规范性引用文件”中，其体调整如下：·删除了IS()105-F02和IS）7218:，增加用了GB/T20944.22007（见第2章）：一补充了3.1注2中刘照样洗涤方法，删除了注1的内容；一将7.26巾\冷冻柜：个可调节至一70℃以下，另个可调节至一20℃以下”调整为\冷冻柜：可调节至一80 ℃以下”
将8标题修改为“含阴离了表旧活性剂的无菌水”，开补充了含阴离了表间活性剂无菌水的配制方法：
一将10.5.3中在10.5.2中加入5mL表面活性剂”史正为“在10.5.2中加人5mL含阴离子衣而活性剂的无水”
一将孢子悬液浓度单位由\ml\史止为\(FU/ml\；补充了孢了悬液的冷温度条件（见10.7.1）将11.1.2.1和11.1.3.1中*必要时，可按S06330或具他适当方法洗涤试样修改为必要时按GB/T20944.2-—2007的10.1方法洗涤试样”；一补充「抗真菌效果评价（见12.3）；一试验报告中增加\）真菌茵株插述：菌株保藏号和菌株保藏机构：\其后列项编号顺延（见第13章），增加了对应真菌菌株的国内保藏机构（见附录A），本部分山中国纺织工业联合会提出。本部分山全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209)归口：本部分起草单位：深圳市康益保健用品有限公司、福建凤竹纺织科技股份有限公司、广东含微物分析检测中心、东莞市中鼎检测技术有限公司、福建省晋江市华宇织造有限公司、中纺标检验认证股份有限公司、百事基材料(青岛)股份有限公司、晋江中纺标检测有限公司、联润翔(青岛)纺织科技有限公司、上海爱丽纺织技术检验有限公司。本部分主要起草人：凹静、樊葬、商成杰、谢小保、康宁、干游洋、黄效华、吴大伟、苏成喻、口茉、姚冷、李业。
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GB/T 39104.2—2020
GB/T39104的本部分采用平Ⅲ计数法作为抗真菌性能的定量分析方法平Ⅲ计数法的特点如下：
属于实验室容易操作的常规方法；无需使用特殊设备·如荧光光度计：历史悠久且程序通用。
-irKaeerKAca-
1范围
纺织品
抗真菌性能的测定
第2部分：平血计数法
GB/T39104.2—2020
G3/T39101的本部分规定了采用平而计数法对纺织品抗真菌性能进行定量测定的方法。本部分适用于各类纺织晶·如纤维、纱线、织物、服饰、床上用脂家居装饰用等、2规范性引用文件
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的：凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用丁本义件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件：GB/工20944.22007纺织品抗菌性能的评价第2部分：吸收法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件，3.1
control fabric
对照样
用工验证试验直菌生长条件的织物注：对照样可采川与试样材质相同但未经过抗真菌整理的纺织品。如果无法获得上述战样，川不含荧光增自剂及未经整理的100%棉织物作为对照样，使用前按GB/T8629规定在60%、不添加任何洗涤剂或增白剂的条件下循环洗涤19次，每个循坏洗涤10min.漂洗2次共：min。3.2
antifungal agent
抗真菌剂
抑制或缓和真菌生长或减少真菌数量的助剂。3.3
抗真菌整理
antifungal treatment
抑制或缓和真菌牛长或减少真菌数量的整埋，3.4
孢子悬液
sporesuspension
在含阴离子表面活性剂的儿菌水中均勾分散有真菌孢子的液体。3.5
plalecountmethod
平血计数法
通过十倍稀释法计数菌落数米计算培养后存在的真菌数量的方法，注：菌落数用菌落形成单位CFU表示。3.6
中和剂
neutralizer
用丁火活、中和或抑制抗真菌剂抗真菌性能的化学试剂。rKaeerKAca-
GB/T 39104.2—2020
4原理
将试样和对照样分别用试验真菌孢子悬液接种.并在30℃条件下培养48h道过计数琼脂板上可视菌落的数量（用菌落形成单位（FI衣示)计算真菌的增长侦和抑菌估对于吸水性试样，宜使用吸收法。对于不吸水的试样.建议使用转移法。5安全措施
本方法需要使用真菌，成由经过微牛物学技术培训和具有经验的人员进行试验，应遵循国家有关的法、条例以及与适当的安个预防措施相关的推荐性规范，6试验真菌
试验用真随菌株成从附录A的表A1中选择经有关方同意后可使用加人界菌种保藏联合会（w（的其他菌种保藏机构提供的欲效真菌菌株代善：
直菌菌株保存编号和来源应在报告中说明：7仪器设备
实验室常规器及下列仪器。相关器具在使用前迹行火菌。7.1纱布:经火菌处理.
7.2培养m：玻璃或塑料材质，内径约60mm或90mm7.3高压灭菌锅：温度能保持在（121+2)℃（压力当于103kPa）。7.4铂接种坏：环直径为2mm\4mm（或等效的塑料装置）。7.5L型铂接种钩(或等效的塑料装置）。7.6培养箱：温度能保持在25℃~～37℃，允差为2℃7.7螺口玻璃瓶：容量为30mL，带有聚四氟乙烯或硅橡胶垫片和聚内烯盖。应用城性或巾性洗涤剂小心消洗、冲洗并十燥，
7.8玻璃漏斗。
移液管：容量为0.2mL、1mL、5mL和10mL，允差不超过0.5%，具有玻璃或塑料吸头。7.10
巴斯德吸管：用丁微生物试验（或等效的塑料装置）锥形瓶：容量为100ml~500ml
镀子：由可消毒的材质制成，
离心机：离心加迷度约为2000×g。离心管：用丁离心分离。
血球计数板：能计测1×10°CFU/mL~3X10CFL/mL：显微镜：放大倍数为200倍。
超声波清洗机：试验用紧凑型，频率约为30kHz~50kHz.pH计：生化试验用，具有玻璃电被·或用等效的pH诚纸代替。维形烧瓶：容量为100mL。
裁样器：不锈钢材质，直径为（3.8士0.1)cmrrKaeerKAca-
7.21不锈钢柱：直径为（3.5_0.1）cm，质量为（200_10）g。7.22
振荡器：其有旋涡振荡功能：
浆式搅拌器（角型）：速度为6击/s～8击/s.具有相应的一次性容器。湿度箱：热带气候箱或可保持较高湿度的其他容器。冰箱：温度能保持在2℃~8℃允差为三2℃冷涨柜：可调节至一80℃以下，充差为十2。天平：你量能确保可读至0.01g
一次性均质袋：适用丁收纳食物，洗脱样品时使用，二级生物安全柜或其他等效设备。水浴锅：个温度可保持（46二2)℃.另个温度可保持70℃90℃8试剂和培养基
8.1通用
试验所用试剂应是分析纯的和/或是适用于微生物试验用的GB/T39104.2—2020
宜使用现有商业化的脱水产品制备培养基，并严格按照相关品制造商的使用说明迹行操作。8.2纯水
用于制备微牛物培养基和试剂的分析级纯水.用蒸馏、离子交换、超滤和/或反渗（R()装置过滤的方法制取，应无毒或无抑菌物质。8.3含阴离子表面活性剂的无菌水将50mg阴离子衣面活性剂琥珀辛酯磺酸钠溶解到纯水（8.2)中.定容至1000mL、使用高压火菌锅在121℃条件下灭菌20min，形成50mg/L的含阴离子衣而活性剂的无菌水：8.4培养基bZxz.net
使用接以下步骤制各的培养基。经验证后可用商业培养基代替。对于制备后不立即使用的培养基，应在5℃-10℃环境中储存，保质期1个月。8.4.1沙氏葡萄糖肉汤（SDB）
蛋广陈
葡萄糖
灭菌后pH
8.4.2马铃薯葡萄糖琼脂（PDA)
马铃薯浸粉
葡萄糖
灭菌后pII
1000mlL（最终定容至）
1000ml（最终定容至）
术培养基有助丁菌孢子的培养。rKaeerKAca
GB/T39104.2—2020
8.4.3沙氏葡萄糖琼脂（SDA）
肉蛋白陈
葡萄糖
灭菌后pH
注：本培养基可能会川于转移法。8.4.4斜面培养基
1000ml.（最终定容至）
8.4.4.1将10mL完全溶解并预热后的PDA（8.4.2)倒人灭菌后的试誉巾，8.4.4.2用棉塞口并用蒸汽灭菌。8.4.4.3将灭菌后的试管放置在与试验台平面呈15\倾角的斜而「：，并使试管内的物体凝固。8.4.4.4当固化琼脂中无流动液体时，再次溶解并固化以各使用。8.4.5中和液SCDLP培养基
吐温80
蛋黄卵磷脂
红氨酸盐酸盐
肉或酪蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二
脱水磷酸二钠
火菌后pH
1000mL（最终定容至）
如果不能充分中和，可调节吐温80或卵脂的用量.或川入其他中和剂：商业中和液经试验与8.1.5中和液抗真菌效果（参见附录13）致时，可代替使用。任何非本标准规定的中和剂的使用应在报告中注明其名称和浓度。
9真菌的保存与使用
9.1在二级生物安全柜（7.29)或其他等效设备币对试验真菌与孢子进行传代培养和操作。9.2在传代培养前后对棉塞及试管颈部进行火焰灭菌或化学灭菌。9.3刮取原始菌1.的一部分菌.以直线或曲线的形式（见图1)将孢了分散在斜面培养基（8.4.4)底部的冷凝水中并涂抹到斜面培养基顶部9.4每次对不同类型的真菌进行传代培养时，使用经火焰灭菌后的铂接种环（7.4)或L型铂接种钩（7.5）进行接种。
9.5将传代培养斜培养基在（25一2）C条件下的培养箱（7.6)中放置至少8d.并确认在5“C10℃条件下保存前已经产生了足够的孢了。9.6个3个月内，将传代培养的真菌转移到新斜面培养基中，以使逆一步培养和保存。每3个月传代次。传代培养的真菌传代次数最多成不超过5次：不要使用超过3个片的真菌做进步传代培养。注：在80冷冻十燥条件下可进行长期保存4
rrKaeerKAca-
说明：
冷凝水；
斜血培养基。
孢子悬液
图1斜面培养基传代培养示意图
抱了感液的制备和调节过程见图2。说明：
在PDA平板上预培养：
步骤1
步骤2：
步骤3；
步骤4；
图2孢子悬液的调节步骤
在培养基中悬浮孢子
GB/T 39104.2—2020
用短巴斯德吸管（7.10)或等效装置吸取0.5m1.含阴离子表而活性剂的无菌水（8.3)（步骤1)。分5次将其分散到PD)A琼脂平板中心的孢了中，缓慢清洗表而（步骤2）。注：微小的调整是可接受的.如增加洗涤水的用量。在这种情况下.保留刘所有条件的记录。10.3从培养基中收集和分散孢子悬液10.3.1用短巴斯德吸管（7.10)或类似装置吸取10.2中孢子悬液-rKaeerKAca-
CB/T39104.22020
10.3.2将其移入约5mL含阴离了表活性剂的无菌水（8.3)中。10.3.3吸吹100次或用振荡器（7.22)搅拌3次其208，或用低超声波清洗5min，使孢子充分分散，10.3.4目测悬液出现轻微浑浊（步骤3）：10.4过滤去除菌丝和孢子丝
用带有纱布（7.1)或玻璃棉的漏斗（7.8)或其他装置近行过滤（步骤4）。纱布或玻璃棉尺寸可为5cm×5cm，铺设（4=1)层。10.5使用离心分离和再悬浮去除上清液10.5.1过滤后，在（25士2）℃条件下以2000×g川速度离心分离5min.当离心机（7.13）无控温装置时可在室温下进行：
10.5.2移除上清液。
10.5.3作10.5.2中加人5mL含阴离子表面活性剂的菌水（8.3）。10.5.4充分吸吹使孢子分散或使用振荡器（7.22)搅拌3次共20s.或用低超市波清洗约5min.使孢子充分扩散（步骤5）
孢子悬液浓度的确认
10.6.1用血球计数板检验以下项日，10.6.2确保孢子数量为1×10°CFU/mL~3×10°CFU/mL.且90%以上为元菌丝单孢子：10.6.3当孢子数量较多时：用含阴离子表而活性剂的无菌水（8.3）稀释悬液.使孢子数量降至1×10CFU/mL~3×10°CFU/mL.并重新检查孢子数量10.6.4当孢子数量不足时，重复分离去除上清液.用含阴离子表而活性剂的无菌水（8.3)调节孢子数量至1X10°（FU/mL~3×10\（FL:/ml,并重新检查孢了数量：试验用孢子悬液的调节
10.7.1对于吸收法.用含5%SDB培养基的阴离子表而活性剂溶液将孢子悬液浓度调至1X10CFU/ml.-3Xl0°CFU/ml..
注：100mL含5%SDB培养基阴离子表而活性剂济液的制备：在95mL含阴离子表间活性剂的尤菌水（8.3)中加人5m.的SIB、
10.7.2对于转移法，仅在含阴离了表而活性剂的无菌水（8.3中制备接种液（不需要5%的S1)13），10.7.3充分搅拌孢子芯液，
10.7.4在3℃~4℃条件下冷藏孢子悬液，并在4h内使用，10.8接种液计数
11.2.4给出广用阴离子表而活性剂稀释稀释度为102~103的计数示例11试验方法
试样准备与接种
11.1.1通用
可用吸收法和转移法逊行接种。转移法适用丁不吸水的纺织品。iiKaeerKAca-
11.1.2吸收法
11.1.2.1样品洗涤
GB/T39104.2—2020
必要时，如需评估抗真菌整埋的耐久性，样品按GB/T20944.2一2007的10.1方法洗涤，洗涤后，进行漂洗以消除洗涤剂。者使用其他方法应在报告中说明。11.1.2.2试样形状和质量
从样品上裁取代表性试样，并裁剪为合适尺寸.称（0.40二0.05)g作为1个试样：分别取6个对照样和6个诚样
注：H中3个对照样和3个试样川于接种结束时的\0“接触时间测定真菌数。剩余样品川于接种培养结束后的接触时问测定真菌数。
11.1.2.3试样准备
11.1.2.3.1试样放置
根据试样的特性选取下列方法之-将各试样分别放人不同的螺口玻璃瓶（7.7）：如果试样是易卷曲的药织品，或具有繁片羽绒，在螺口坡离瓶（了.了）的试样上放置一根玻璃棒，或用线将试样两端固定：
一如果为纱线样将纱线授成一束，卉在螺口坡瓶（7的讯样放置一根玻鹅棒：一如果为地毯或具有类似结构的样品，剪取样品上的起绒部分作为试样.并在螺口玻璃瓶（7.7）的试样上放置根玻璃棒，
11.1,2.3.2灭菌
必要时，如对于疑似被污染的试样，按以下步骤用高压灭菌锅（7.3)进行灭茵：a）用铝箔包覆装有试样的螺口玻璃瓶（7.7)顶部；b）将覆有铝箔的螺口玻璃瓶（7.7)放入金属篮巾以各高压灭茵用：用铝箔包覆瓶盖并放人金属篮中；d）将瓶盖和装有试样的螺玻璃瓶（7.7)放入高压灭菌锅（7.3）.于121℃（103kPa）灭菌20 min:
e）：火菌后，作无菌实验室内取掉铝箔，将装有试样的螺口玻璃瓶（7.7)放入二级生物安全机或其他无空气污染风险的地方十燥至少60min。注1：如果高乐火菌锅不适用，可使用环氧乙烷气体，射线或其他灭菌方法，并在报告中说明注2：高压灭菌法能使某些抗菌剂失活或增加释放.从而得出错误结果注3：对照样可采川以上方法进行火菊。11.1.2.3.3
盖紧瓶盖
在任何处理后盖紧瓶盖，以保持接种前处于洁净条件，11.1.2.4接种
11.1.2.4.1打开瓶盖，
11.1.2.4.2分别准确移取0.2mL10.7中制备的1×105CFU/mL3×105CFU/mL的孢子悬液，分散接种在11.1.2.3制备的每个试样1.。试样不能很好地吸收，用一根玻璃棒或其他工具接压，11.1.2.4.3使用前确保悬液已混匀，而且被试样充分吸收，盖紧瓶盖，同时确保悬液不沾在瓶壁。riKaeerKAca-
GB/T 39104.2—2020
11.1.3转移法
11.1.3.1试样准备
用裁样器（7.20）裁剪6个直径为（3.8士0.1)cm的试样，试样上成无任何接缝、布边、绣花、紧固件等。
必要时按G[3/T20911.22007的10.1方法洗涤试样，洗涤后，用水漂洗试样以去除洗涤剂。若使用其他方法应在报告中说明。
必要时可使用高压灭菌锅（7.3）、环氧乙烷气体、射线或其他方法对试样进行灭菌。若使用其他方法成在报告中说明：
11.1.3.2接种到琼脂平血
制备12个SDA(8.4.3)平血，培养血(7.2)点径为60mm，或6个SDA（8.4.3)平血，培养血(7.2)白径为90mm。
将1ml初始孢子悬液(10.7)接种到琼脂上，浓度范用为1×10°CFL/ml~3×10CFU/ml，沿不同方间倾斜平血使其布满培养血底部，尽可能吸收多余液体，静置（300工30)s。11.1.3.3转移到试样
11.1.3.3.1分别制各6个对照样和6个试样。11.1.3.3.2选取两个对照样：：个用于\0\接触时间，个用于培养18h后。将每个试样分别置于11.1.3.2制备的直径为60mm的琼脂平Ⅲ或将：-对试样同时放人直径为90mm的琼脂平Ⅲ（避免两个试样重叠），并在试样上放置200不锈钢柱，（60士5）s后取下不锈钢杜和试样：取：：个对照样放入占径为60Ⅱm的培养血.接触面朝上，以备培养。将另一个对照样放入允菌袋或无菌螺口玻璃瓶，按11.2近行测试
11.1.3.3.3对其余4个对照样重复11.1.3.3.2操作。最终有3个对照样用于*0\接触时间测试，3个对照样用于培养48 h 后测试，
11.1.3.3.4对6个试样重复11.1.3.3.2操作。其币3个试样用于*0\接触时间测试，3个试样用于培养48h后测试，
11.2平血计数法
11.2.1接种后立即洗脱
对于吸收法，试样接种后立即向6个分别装有对照样和试样的螺口玻璃瓶（7.7)中分别加入20mlSCDLP培养基（8.4.5）.盖紧瓶盖，按a)或b)洗脱：对丁转移法，转移后随即将各试样分别放人装有20mLSCIDLP培养基的菌袋或儿菌螺口玻璃瓶中.接a）、b)或)方法洗脱：
a）：用振荡器振荡5个循环.每个循环1min:b）于T摇.沿弧形轨迹于T摇免试管或小瓶5个循环，每个循环1min，摆幅约30cm；c）将次性均质袋（7.28)放人浆式搅拌器（7.23)振荡，均质袋的每而1min，11.2.2培养48h
对于吸收法，将已接种的螺口玻璃瓶（7.7）（3个对照样和3个试样）在（30二2）℃条件下培养（48二2)h对丁转移法，将已接种的培养血（7.2)个（30工2)℃，相对湿度高于95%条件中培养（48工2)h。iiKaeerKAca-
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