GB/T 39670-2020
基本信息
标准号： GB/T 39670-2020
中文名称：宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 饲料 硝基 代谢物 残留量 测定 色谱 串联 质谱法
标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 39670-2020.Determination of nitrofuran metabolites in pet feeds一Liquid chromatography-tandem mass spectrometry.
1范围.
GB/T 39670规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-21恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-24恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。
GB/T 39670适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-1恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的测定。
GB/T 39670的检出限为0.25 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195动物饲料试样 的制备
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AOZ: 3-氨基-2-恶唑酮(3-amino-2-oxalidinone)
AMOZ:5-吗啉甲基-3-氨基-2-嗯唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone)
AHD:1-氨基-乙内酰脲(1-amino-hydantoin)
SEM :氨基脲(semicarbazide)
4原理
试样经三氯乙酸沉淀蛋白质,游离出硝基呋喃类代谢物,在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化.乙酸乙酯提取后,用液相色谱-串联质谱仪检测,同位素内标法定量。
5试剂或材料
除非另有规定外，仅使用分析纯试剂。
5.1水:GB/T 6682,一级。
5.2乙腈:色谱纯。
5.3 乙酸铵:色谱纯。
5.4 甲酸:色谱纯。
5.5甲醇:色谱纯。
5.6 二甲基亚砜。
1范围.
GB/T 39670规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-21恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-24恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。
GB/T 39670适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-1恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的测定。
GB/T 39670的检出限为0.25 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195动物饲料试样 的制备
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AOZ: 3-氨基-2-恶唑酮(3-amino-2-oxalidinone)
AMOZ:5-吗啉甲基-3-氨基-2-嗯唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone)
AHD:1-氨基-乙内酰脲(1-amino-hydantoin)
SEM :氨基脲(semicarbazide)
4原理
试样经三氯乙酸沉淀蛋白质,游离出硝基呋喃类代谢物,在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化.乙酸乙酯提取后,用液相色谱-串联质谱仪检测,同位素内标法定量。
5试剂或材料
除非另有规定外，仅使用分析纯试剂。
5.1水:GB/T 6682,一级。
5.2乙腈:色谱纯。
5.3 乙酸铵:色谱纯。
5.4 甲酸:色谱纯。
5.5甲醇:色谱纯。
5.6 二甲基亚砜。
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中华人民共和国国家标准
GB/T39670—2020
宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of nitrofuran metabolites in pet feeds-Liquid chromatography-tandemmass spectrometry2020-12-14发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-07-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。GB/T39670—2020
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国淮安海关、江苏海企长城股份有限公司、淮阴师范学院。
本标准主要起草人：蒋原、何健、魏云计、宦海霞、朱臻怡、冯民、王远见、柯家法、张扬、张科、张敬友1
1范围
宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T39670—2020
本标准规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物（3-氨基-2-悲唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-I唑烷基酮1-氨基-乙内酰脉、氨基脲)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法本标准适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基哺类代谢物（3-氨基-2-嗯唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的测定。本标准的检出限为0.25μg/kg，定量限为0.5μg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备
缩略语
下列缩略语适用于本文件
AOZ：3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxalidinone）AMOZ：5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone）AHD：1-氨基-乙内酰脲（1-amino-hydantoin）SEM：氨基脲（semicarbazide）原理
试样经三氯乙酸沉淀蛋白质，游离出硝基呋哺类代谢物，在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化、乙酸乙酯提取后，用液相色谱-串联质谱仪检测，同位素内标法定量S
试剂或材料
除非另有规定外，仅使用分析纯试剂。5.1
水：GB/T6682，一级。
乙腈：色谱纯。
乙酸铵：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
甲醇：色谱纯。
二甲基亚砜。
GB/T39670—2020
5.7正己烷。
5.8乙酸乙酯。
邻硝基苯甲醛。
5.10三氯乙酸溶液（200g/L）：称取20.0g三氯乙酸溶解于100mL水中。邻硝基苯甲醛衍生试剂（50mmol/L）：称取0.0378g邻硝基苯甲醛（5.9）溶于5mL二甲基亚矾5.11
（5.6)中。现用现配。
5.12磷酸氢二钾溶液（1.0mol/L）：称取17.4g无水磷酸氢二钾溶于100mL水中。5.13乙酸铵缓冲液（0.5mmol/L)：称取0.0385g乙酸铵（5.3）溶于500mL水中，加人200μL甲酸（5.4），用水定容至1000mL。
5.14样品溶解液：分别量取10mL乙睛（5.2）和90mL乙酸铵缓冲液（5.13），混合均匀。5.15乙睛饱和正已烷：量取80mL正已烷（5.7）于100mL分液漏斗中，加人适量乙睛后，剧烈振摇，静置分层后，弃去乙睛层。
5.16标准品：AOZ(CAS:80-65-9)、AMOZ(CAS：43056-63-9)、AHD·HCI(CAS：2827-56-7)SEM·HCI(CAS:563-41-7)。纯度≥99.0%。5.17硝基呋喃类代谢物同位素内标：Di-AOZ、D-AMOZ、13C-AHD、13C15N2-SEM·HCl。纯度≥99.0%
5.18标准储备溶液：分别准确称取适量硝基喃类代谢物标准品（5.16），用甲醇（5.5）溶解定容，配制成浓度约为1.0mg/mL的标准储备液。一18℃以下避光保存，有效期为6个月。5.19混合标准中间溶液：分别准确移取标准储备溶液（5.18）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为10μg/mL的混合中间标准溶液。一18℃以下避光保存，有效期为3个月。5.20混合标准工作溶液：分别准确移取适量的混合标准中间溶液（5.19）于10mL和100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为100ng/mL和10ng/mL的混合标准工作溶液。4℃避光保存，有效期为7天，
5.21同位素内标储备溶液：分别准确称取适量硝基呋哺类代谢物同位素内标（5.17），用甲醇（5.5）溶解定容，配制成浓度约为1.0mg/mL。一18℃以下避光保存，有效期为6个月5.22同位素内标混合标准中间溶液：分别准确移取同位素内标储备溶液（5.21）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为10μg/mL的同位素内标混合标准中间溶液。一18℃以下避光保存，有效期为3个月。
5.23同位素内标混合标准工作溶液：准确移取同位素内标混合标准中间溶液（5.22)0.1mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为100ng/mL的同位素内标混合标准中间溶液。4℃避光保存，有效期为7天
5.24微孔滤膜：0.22μm，有机系。6仪器设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。6.3水浴恒温振荡器：37℃土1℃。6.4离心机：转速不低于8000r/min6.5涡旋混匀器。
6.6氮吹仪。
7样品
GB/T39670—2020
固态样品按GB/T20195进行样品制备，高速研磨仪粉碎，转速10000r/min以上，过0.42mm孔径筛，混匀装于密封容器，备用。半固态样品按GB/T20195进行样品制备，用高速均质器均质，转速12000r/min以上，均质后装于密封容器，备用。
试样置于一18℃避光保存。
试验步骤
平行做两份试验。称取试样2g，准确至0.01g，置于50mL具塞离心管中，准确加人0.05mL同位素内标混合标准工作溶液（5.23），4mL水（5.1）和2.0mL三氯乙酸溶液（5.10），涡旋1min后，加人150uL邻硝基苯甲醛衍生试剂（5.11），在37℃士1℃水浴中避光振荡水解16h，冷却，备用。8.2
备用液（8.1）用磷酸氢二钾溶液（5.12）调节pH至7.0~7.5，加人8mL乙酸乙酯（5.8），涡旋1min，于8000r/min离心5min，吸取上清液。残留物再加人8mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液，40℃下氮气吹干，加人1.0mL样品溶解液（5.14）充分溶解，再加入1.0mL乙睛饱和正已烷（5.15）涡旋，于8000r/min离心1min，吸取下层溶液，过0.22m滤膜后，待测。8.3标准曲线的制备
准确移取10ng/mL和100ng/mL混合标准工作溶液（5.20)0.20mL0.10mL和0.05mL.分别置于50mL离心管中，按8.1和8.2进行衍生和提取。8.4
8.4.1液相色谱参考条件
色谱柱：C1a柱，柱长100mm，内径2.0mm，粒径5μm，或性能相当者；柱温：35℃：
流速：0.25mL/min；
进样量：10μL；
流动相：A：乙睛（5.2），B：乙酸铵缓冲溶液（5.13），梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序
时间/min
GB/T39670—2020
8.4.2质谱参考条件
电离方式：电喷雾电离，正离子模式（ESI）；检测方式：多反应监测（MRM)；电喷雾电（IS)压：5500V；
离子源温度（TEM）：500℃；
气帘气压力（CUR）：206.85kPa（30psi)；雾化气压力（GS1)：344.75kPa(50psi)；辅助气压力（GS2）：344.75kPa（50psi）；碰撞气压力（CAD）：62.055kPa（9psi)；碰撞室出口电压（CXP）：6V。
多反应监测（MRM)离子对、驻留时间、去簇电压和碰撞能量见表2。表2
硝基呋哺代谢物及内标的多反应监测（MRM）离子对、驻留时间、去簇电压及碰撞能量的参考值被测物名称
D,-AOZ
D,-AMOZ
1\Ca-AHD
1CN2-SEM
为定量离子。
监测离子对（m/2）
236.0>134.1*
236.0>104.1
335.2>291.2
335.2>262.1
249.1>134.2
249.1>104.0
209.0>166.3
209.0192.2
240.1>134.1
340.2>296.0
252.0>134.1
212.0>168.1
8.4.3标准系列溶液和试样溶液测定驻留时间/ms
去簇电压(DP)/V
碰撞能量（CE)/V
在仪器的最佳条件下，分别取标准系列溶液（8.3)和试样溶液（8.2）上机测定。硝基呋哺类代谢物标准溶液的定量离子色谱图参见附录A。8.4.4定性
在相同试验条件下，试样溶液与标准系列溶液中硝基喃类代谢物的保留时间相对偏差应在土2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中硝基呋喃类代谢物定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准系列溶液中对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的硝基呋哺类代谢物4
相对离子丰度/%
最大允许偏差/%
8.4.5定量
定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差>50
>20~50
>10~20
GB/T39670—2020
以硝基呋哺类代谢物的浓度为横坐标，硝基呋喃类代谢物和内标峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与标准溶液中硝基味哺类代谢物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出范围，应重新试验或将试样溶液和标准系列溶液做相应稀释后重新测定，试验数据处理
试样中硝基呋类代谢物的含量以质量分数w计，数值以微克每千克（μg/kg）表示。按式（1)计算：
式中：
AXAsxp.XpsXV×1000
AxA.XpxmX1000
试样溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积；标准溶液中硝基呋喃类代谢物同位素内标的峰面积；标准溶液中硝基呋哺类代谢物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样溶液中硝基呋哺类代谢物同位素内标的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；溶解残余物溶液的体积，单位为毫升（mL)；试样溶液中硝基呋喃类代谢物同位素内标的峰面积；标准溶液中硝基呋哺类代谢物的峰面积；...（1)
标准溶液中硝基呋哺类代谢物同位素内标的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样质量，单位为克（g）。
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10
精密度
在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%。GB/T39670—2020
附录A
（资料性附录）
硝基呋喃类代谢物标准溶液的定量离子色谱图硝基呋哺类代谢物标准溶液的定量离子色谱图见图A.1。2.0e6
A236.0>134. 1
0. 0 0.5 1. 0 1.5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 1. 0 4. 5 5. 0 3.5 6. 0 6. 5 7. 0 7.3 8. 0 8. 3 9. 0 9. 10. 010.5间/min
硝基呋喃类代谢物标准溶液的定量离子色谱图图A.1
（硝基呋哺代谢物浓度1ng/mL，硝基呋喃代谢物同位素内标浓度5ng/mL）6
-AC7. 240, 1>134. 1
GB/T39670—2020
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2. 5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5时间/rnin
AM02 335.2291.2
8.0 0.5 1.0 T.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4. 0 4 5 5.0 5.5 6.0 6. 5 7.0 7.5 8.0 8.5 90 9.5 10.0 10.5间/min
图A1（续）
GB/T39670—2020
D,-AMO. 340. 2>296. 0
1.0 1.5 2. 0 2. 5 3.0 3.6 4.0 4.5 5.0 6.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 R.5 9. 0 9.5 10.0 10.50.0 0. 5
间/mint
AI113 249. 1>[34. 2
0. 0 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3.5 1. 0 1. 5 5. 0 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7, 5 8, 0 8. 5 9. 0 0. 5 10.0 10. 5时间/mirl
图A.1（续）
C,-AID 252. 0>134. 1
GB/T39670—2020
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.6 3.0 3.6 4.0 4.5 5.0.5.6 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5时尚/min
S上M 209. 0>166. 3
86051.075262.530540455o560657.07.5808.59095100105时间/rmin
图A.1（续）
GB/T39670—2020
CN-SEM 212. 0>168. 1
0. 0 0. 5 1.0 1.5'2. 0 2.5 3. 0 3. 5 4.0 4'5 5.0 5.5 6. 0 6. 5 7. 0 7.5 8.0 8. 5 9.0 9. 5 10.0 10.5附/min
图A.1（续）
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中华人民共和国国家标准
GB/T39670—2020
宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of nitrofuran metabolites in pet feeds-Liquid chromatography-tandemmass spectrometry2020-12-14发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-07-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。GB/T39670—2020
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国淮安海关、江苏海企长城股份有限公司、淮阴师范学院。
本标准主要起草人：蒋原、何健、魏云计、宦海霞、朱臻怡、冯民、王远见、柯家法、张扬、张科、张敬友1
1范围
宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T39670—2020
本标准规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物（3-氨基-2-悲唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-I唑烷基酮1-氨基-乙内酰脉、氨基脲)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法本标准适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基哺类代谢物（3-氨基-2-嗯唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲)残留量的测定。本标准的检出限为0.25μg/kg，定量限为0.5μg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备
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AOZ：3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxalidinone）AMOZ：5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone）AHD：1-氨基-乙内酰脲（1-amino-hydantoin）SEM：氨基脲（semicarbazide）原理
试样经三氯乙酸沉淀蛋白质，游离出硝基呋哺类代谢物，在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化、乙酸乙酯提取后，用液相色谱-串联质谱仪检测，同位素内标法定量S
试剂或材料
除非另有规定外，仅使用分析纯试剂。5.1
水：GB/T6682，一级。
乙腈：色谱纯。
乙酸铵：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
甲醇：色谱纯。
二甲基亚砜。
GB/T39670—2020
5.7正己烷。
5.8乙酸乙酯。
邻硝基苯甲醛。
5.10三氯乙酸溶液（200g/L）：称取20.0g三氯乙酸溶解于100mL水中。邻硝基苯甲醛衍生试剂（50mmol/L）：称取0.0378g邻硝基苯甲醛（5.9）溶于5mL二甲基亚矾5.11
（5.6)中。现用现配。
5.12磷酸氢二钾溶液（1.0mol/L）：称取17.4g无水磷酸氢二钾溶于100mL水中。5.13乙酸铵缓冲液（0.5mmol/L)：称取0.0385g乙酸铵（5.3）溶于500mL水中，加人200μL甲酸（5.4），用水定容至1000mL。
5.14样品溶解液：分别量取10mL乙睛（5.2）和90mL乙酸铵缓冲液（5.13），混合均匀。5.15乙睛饱和正已烷：量取80mL正已烷（5.7）于100mL分液漏斗中，加人适量乙睛后，剧烈振摇，静置分层后，弃去乙睛层。
5.16标准品：AOZ(CAS:80-65-9)、AMOZ(CAS：43056-63-9)、AHD·HCI(CAS：2827-56-7)SEM·HCI(CAS:563-41-7)。纯度≥99.0%。5.17硝基呋喃类代谢物同位素内标：Di-AOZ、D-AMOZ、13C-AHD、13C15N2-SEM·HCl。纯度≥99.0%
5.18标准储备溶液：分别准确称取适量硝基喃类代谢物标准品（5.16），用甲醇（5.5）溶解定容，配制成浓度约为1.0mg/mL的标准储备液。一18℃以下避光保存，有效期为6个月。5.19混合标准中间溶液：分别准确移取标准储备溶液（5.18）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为10μg/mL的混合中间标准溶液。一18℃以下避光保存，有效期为3个月。5.20混合标准工作溶液：分别准确移取适量的混合标准中间溶液（5.19）于10mL和100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为100ng/mL和10ng/mL的混合标准工作溶液。4℃避光保存，有效期为7天，
5.21同位素内标储备溶液：分别准确称取适量硝基呋哺类代谢物同位素内标（5.17），用甲醇（5.5）溶解定容，配制成浓度约为1.0mg/mL。一18℃以下避光保存，有效期为6个月5.22同位素内标混合标准中间溶液：分别准确移取同位素内标储备溶液（5.21）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为10μg/mL的同位素内标混合标准中间溶液。一18℃以下避光保存，有效期为3个月。
5.23同位素内标混合标准工作溶液：准确移取同位素内标混合标准中间溶液（5.22)0.1mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度约为100ng/mL的同位素内标混合标准中间溶液。4℃避光保存，有效期为7天
5.24微孔滤膜：0.22μm，有机系。6仪器设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。6.3水浴恒温振荡器：37℃土1℃。6.4离心机：转速不低于8000r/min6.5涡旋混匀器。
6.6氮吹仪。
7样品
GB/T39670—2020
固态样品按GB/T20195进行样品制备，高速研磨仪粉碎，转速10000r/min以上，过0.42mm孔径筛，混匀装于密封容器，备用。半固态样品按GB/T20195进行样品制备，用高速均质器均质，转速12000r/min以上，均质后装于密封容器，备用。
试样置于一18℃避光保存。
试验步骤
平行做两份试验。称取试样2g，准确至0.01g，置于50mL具塞离心管中，准确加人0.05mL同位素内标混合标准工作溶液（5.23），4mL水（5.1）和2.0mL三氯乙酸溶液（5.10），涡旋1min后，加人150uL邻硝基苯甲醛衍生试剂（5.11），在37℃士1℃水浴中避光振荡水解16h，冷却，备用。8.2
备用液（8.1）用磷酸氢二钾溶液（5.12）调节pH至7.0~7.5，加人8mL乙酸乙酯（5.8），涡旋1min，于8000r/min离心5min，吸取上清液。残留物再加人8mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液，40℃下氮气吹干，加人1.0mL样品溶解液（5.14）充分溶解，再加入1.0mL乙睛饱和正已烷（5.15）涡旋，于8000r/min离心1min，吸取下层溶液，过0.22m滤膜后，待测。8.3标准曲线的制备
准确移取10ng/mL和100ng/mL混合标准工作溶液（5.20)0.20mL0.10mL和0.05mL.分别置于50mL离心管中，按8.1和8.2进行衍生和提取。8.4
8.4.1液相色谱参考条件
色谱柱：C1a柱，柱长100mm，内径2.0mm，粒径5μm，或性能相当者；柱温：35℃：
流速：0.25mL/min；
进样量：10μL；
流动相：A：乙睛（5.2），B：乙酸铵缓冲溶液（5.13），梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序
时间/min
GB/T39670—2020
8.4.2质谱参考条件
电离方式：电喷雾电离，正离子模式（ESI）；检测方式：多反应监测（MRM)；电喷雾电（IS)压：5500V；
离子源温度（TEM）：500℃；
气帘气压力（CUR）：206.85kPa（30psi)；雾化气压力（GS1)：344.75kPa(50psi)；辅助气压力（GS2）：344.75kPa（50psi）；碰撞气压力（CAD）：62.055kPa（9psi)；碰撞室出口电压（CXP）：6V。
多反应监测（MRM)离子对、驻留时间、去簇电压和碰撞能量见表2。表2
硝基呋哺代谢物及内标的多反应监测（MRM）离子对、驻留时间、去簇电压及碰撞能量的参考值被测物名称
D,-AOZ
D,-AMOZ
1\Ca-AHD
1CN2-SEM
为定量离子。
监测离子对（m/2）
236.0>134.1*
236.0>104.1
335.2>291.2
335.2>262.1
249.1>134.2
249.1>104.0
209.0>166.3
209.0192.2
240.1>134.1
340.2>296.0
252.0>134.1
212.0>168.1
8.4.3标准系列溶液和试样溶液测定驻留时间/ms
去簇电压(DP)/V
碰撞能量（CE)/V
在仪器的最佳条件下，分别取标准系列溶液（8.3)和试样溶液（8.2）上机测定。硝基呋哺类代谢物标准溶液的定量离子色谱图参见附录A。8.4.4定性
在相同试验条件下，试样溶液与标准系列溶液中硝基喃类代谢物的保留时间相对偏差应在土2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中硝基呋喃类代谢物定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准系列溶液中对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的硝基呋哺类代谢物4
相对离子丰度/%
最大允许偏差/%
8.4.5定量
定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差>50
>20~50
>10~20
GB/T39670—2020
以硝基呋哺类代谢物的浓度为横坐标，硝基呋喃类代谢物和内标峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与标准溶液中硝基味哺类代谢物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出范围，应重新试验或将试样溶液和标准系列溶液做相应稀释后重新测定，试验数据处理
试样中硝基呋类代谢物的含量以质量分数w计，数值以微克每千克（μg/kg）表示。按式（1)计算：
式中：
AXAsxp.XpsXV×1000
AxA.XpxmX1000
试样溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积；标准溶液中硝基呋喃类代谢物同位素内标的峰面积；标准溶液中硝基呋哺类代谢物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样溶液中硝基呋哺类代谢物同位素内标的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；溶解残余物溶液的体积，单位为毫升（mL)；试样溶液中硝基呋喃类代谢物同位素内标的峰面积；标准溶液中硝基呋哺类代谢物的峰面积；...（1)
标准溶液中硝基呋哺类代谢物同位素内标的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样质量，单位为克（g）。
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10
精密度
在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%。GB/T39670—2020
附录A
（资料性附录）
硝基呋喃类代谢物标准溶液的定量离子色谱图硝基呋哺类代谢物标准溶液的定量离子色谱图见图A.1。2.0e6
A236.0>134. 1
0. 0 0.5 1. 0 1.5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 1. 0 4. 5 5. 0 3.5 6. 0 6. 5 7. 0 7.3 8. 0 8. 3 9. 0 9. 10. 010.5间/min
硝基呋喃类代谢物标准溶液的定量离子色谱图图A.1
（硝基呋哺代谢物浓度1ng/mL，硝基呋喃代谢物同位素内标浓度5ng/mL）6
-AC7. 240, 1>134. 1
GB/T39670—2020
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2. 5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5时间/rnin
AM02 335.2291.2
8.0 0.5 1.0 T.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4. 0 4 5 5.0 5.5 6.0 6. 5 7.0 7.5 8.0 8.5 90 9.5 10.0 10.5间/min
图A1（续）
GB/T39670—2020
D,-AMO. 340. 2>296. 0
1.0 1.5 2. 0 2. 5 3.0 3.6 4.0 4.5 5.0 6.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 R.5 9. 0 9.5 10.0 10.50.0 0. 5
间/mint
AI113 249. 1>[34. 2
0. 0 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3.5 1. 0 1. 5 5. 0 5. 5 6. 0 6. 5 7. 0 7, 5 8, 0 8. 5 9. 0 0. 5 10.0 10. 5时间/mirl
图A.1（续）
C,-AID 252. 0>134. 1
GB/T39670—2020
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.6 3.0 3.6 4.0 4.5 5.0.5.6 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5时尚/min
S上M 209. 0>166. 3
86051.075262.530540455o560657.07.5808.59095100105时间/rmin
图A.1（续）
GB/T39670—2020
CN-SEM 212. 0>168. 1
0. 0 0. 5 1.0 1.5'2. 0 2.5 3. 0 3. 5 4.0 4'5 5.0 5.5 6. 0 6. 5 7. 0 7.5 8.0 8. 5 9.0 9. 5 10.0 10.5附/min
图A.1（续）
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