GB/T 16550—2020 新城疫诊断技术 Diagnostic techniques for Newcastle disease 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T 16550—2008《新城疫诊断技术》，与GB/T 16550—2008相比，主要技术变化如下： 1. 修改了血凝和血凝抑制试验判定结果（见7.3和7.4；2008年版的5.3和6.3）； 2. 删除了毒力评价指标中MDT和IVPI（见2008年版的4.3和4.4）； 3. 增加了实时荧光RT-PCR检测方法（见第9章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、扬州大学。 本标准主要起草人：刘华雷、王静静、于晓慧、吕艳、吴艳涛、胡顺林、郑东霞、赵云玲、刘文博、刘秀梵、王志亮。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB 16550—1996、GB/T 16550—2008。 引言 新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）强毒株感染禽类引起的一种急性、烈性传染病，给世界养禽业造成巨大的经济损失。世界动物卫生组织（OIE）将新城疫列为法定报告的动物疫病，我国农业农村部将其列为一类动物疫病。 新城疫病毒可感染240多种禽类，其中家鸡和珠鸡最易感，感染禽（野鸟）及带毒禽（野鸟）系主要的传染源。新城疫病毒主要经消化道和呼吸道传播，被污染的水、饲料、蛋托（箱）、种蛋、鸡胚和带毒的野生飞禽、昆虫及有关人员等均可成为传播媒介。 新城疫病毒属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、正禽腮腺炎病毒属（Orthoavulavirus），目前新城疫病毒只有一种血清型，但可分为多种基因型。OIE规定，新城疫是由新城疫病毒强毒株引起的禽类感染，因此，对于新城疫的诊断，除了鉴定新城疫病毒之外，还需要对其致病性进行评估。对于致病性评估的方法，可通过1日龄SPF鸡ICPI进行测定，也可通过分子生物学技术，如RT-PCR结合序列测定等。根据新城疫病毒F基因部分序列（47nt～420nt）差异，可将新城疫病毒分为Class I和Class II两大类，其中Class I在国内均系弱毒株，因此，针对Class I NDV的检测方法不具有诊断意义，本标准所涉及的诊断方法均针对Class II新城疫强毒株。 1 范围 本标准规定了新城疫的临床诊断、病毒分离与鉴定、血凝和血凝抑制试验、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和实时荧光RT-PCR（Real-time RT-PCR）的技术要求。本标准适用于新城疫的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查等。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件： Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环次数（Cycle threshold） DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethyl Pyrocarbonate） HA：血凝（Hemagglutinin） HI：血凝抑制（Haemagglutination inhibition） ICPI：脑内接种致病指数（Intracerebral pathogenicity index） ND：新城疫（Newcastle disease） NDV：新城疫病毒（Newcastle disease virus） PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate buffered saline） RBC：鸡红细胞悬液（Red blood cell） RNA：核糖核酸（Ribonucleic acid） RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction） Real-time RT-PCR：实时荧光RT-PCR（Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction）