中华人民共和国国家标准 GB/T39512—2020 磷酸化标记核酸检测通则（Principle for phosphorylation labeled nucleic acid testing），发布于2020-11-19，实施于2021-06-01。 前言 本标准按照GB/T1.1-2009的规则起草，由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。起草单位包括中国测试技术研究院生物研究所、通用生物系统（安徽）有限公司、四川省亚中基因科技有限责任公司、深圳市计量质量检测研究院、成都先导药业开发股份有限公司、苏州金唯智生物科技有限公司、四川大学华西医院、四川农业大学及河北医科大学。主要起草人有周李华、雍金贵、韩国全、刘宗文、杨杰斌、潘红、李怀平、张懿、马丽侠、杨国武、刘倩、蒋子敬、杨丽、郝军政、郑燕燕、吕品。 1 范围 本标准规定了磷酸化标记核酸检测的术语和定义、缩略语、一般要求、测定方法、样品保存和报告。本标准适用于DNA编码化合物文库构建用的磷酸化标记核酸的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少。注日期的引用文件，仅注日期版本适用于本标准；未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本标准：GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》、GB/T30988、GB/T30989、GB/T34797《多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法、高通量基因测序技术规程、核酸引物探针质量技术要求》。 3 术语和定义 3.1 磷酸化标记核酸 (phosphorylation labeled nucleic acid) 5'端标记一个磷酸基团，长度范围在9nt～17nt的单链DNA。 3.2 DNA编码化合物 (DNA encoded compound) 具有5'端标记磷酸基团，3'端带有2～6个碱基黏末端，9nt～17nt的两条单链DNA退火形成的双链。 3.3 退火 (annealing) 两条单链DNA通过加热变性、降温复性，依据碱基互补配对结合。 3.4 互补链 (complementary strand) 通过碱基互补配对形成的双链核苷酸链中的两条单链。 4 缩略语 DIEA：N,N-二异丙基乙胺（Disopropylethylamine） DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraacetic Acid） HFIPA：六氟异丙醇（Hexafluoroisopropanol） HPLC：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography） LC-MS：液相色谱-质谱联用仪（Liquid Chromatography-Mass Spectrometer） OD：光密度（Optical Density） TEAA：三乙基铵醋酸盐（Triethylammonium Acetate） 5 磷酸化标记核酸检测一般要求 5.1 样品要求 检测样品应为无色或浅黄色澄清液体，无悬浮物和机械杂质，样品管保存完好，无破损、无漏液。 5.2 人员要求 检测人员应具备生物或化学相关专业知识背景。 5.3 试剂要求 除非另有说明，使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 5.4 检测项目 磷酸化标记核酸的检测项目包括纯度、总量、相对分子质量、碱基准确度、紫外吸收强度、HPLC纯度、质谱纯度、碱基缺失率、互补链浓度差、脱磷酸化产物、连接效率、完全匹配度等，参考附录A。表1列出了具体测定指标及仪器设备要求。 测定方法与仪器设备包括紫外分光光度计、HPLC仪、LC-MS及测序仪等，用于对应检测指标的测定。