ICS 07.080 A21 C 中华人民共和国国家标准 GB/T 38480—2020 微生物源抗生素类次生代谢产物菌丝生长速率法抗真菌活性测定 Determination of antifungal activity for microbial secondary metabolites - Mycelial growth rate method 2020-11-19 发布 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布 2020-11-19 实施 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院。本标准主要起草人：申屠旭萍、叶子弘、马爱进、俞晓平、崔海峰、张雅芬、许益鹏。 1 范围 本标准规定了用菌丝生长速率法测定微生物源抗生素类次生代谢产物抗真菌活性的方法。 本标准适用于微生物源抗生素类次生代谢产物抗真菌活性测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 抑制中浓度（IC50）：对真菌生长的抑制率达到50%时的浓度。 3.2 抗真菌活性：抑制真菌生长繁殖的能力。 4 原理 将供试次生代谢产物与培养基混合，通过测定培养基上菌落的生长速度来评价其抑制丝状真菌生长的能力，并通过计算IC50判定其抗真菌活性。 5 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。 5.1 水：GB/T 6682 规定的水。 5.2 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：称取马铃薯浸粉3.0 g、葡萄糖20.0 g、琼脂20.0 g，加水至1000 mL，煮沸溶解，pH自然，分装后121℃灭菌20 min。也可使用商品化培养基。 5.3 指示菌标准菌株：立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）ATCC 76145，根据需要可选用其他菌株。 6 仪器设备 6.1 恒温培养箱：温度偏差±1℃以内。 6.2 超净工作台。 6.3 无菌培养皿：直径90 mm。 6.4 游标卡尺：精度0.1 mm。 6.5 无菌打孔器：内径5 mm±0.1 mm。 6.6 无菌吸管或微量移液器。 7 操作步骤 7.1 指示菌培养：将PDA平板接种立枯丝核菌，于28℃±1℃培养至菌丝覆盖平板，备用。 7.2 供试样品制备：将样品溶解或加入表面活性剂配制母液，过滤后逐级稀释，至少制备5个浓度梯度。 7.3 检测平板制备：按1:9比例将样品与PDA混合制备检测平板，同时制备空白对照平板。 7.4 抑菌活性测定：打孔取菌饼置于检测平板中央，28℃±1℃培养24–48 h，采用十字交叉法测量菌落直径，每组重复5次。 8 结果计算 抑制率按公式计算： I = ((D1 - 5) - (D2 - 5)) / (D1 - 5) × 100% 其中：I为抑制率；D1为空白对照菌落直径；D2为供试样品菌落直径；单位均为mm。结果取五个平行样平均值，保留两位小数。