GB/T 13089-2020.Method for determination of oxazolidinethione in feeds.
1范围
GB/T 13089规定了饲料中嗯唑烷硫酮的紫外分光光度测定方法。
GB/T 13089适用于菜籽及其加工产品,以及含有菜籽及其加工产品的配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中噁唑烷硫酮的测定。
GB/T 13089方法的定量限为150mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 5520粮油检验发 芽试验
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195动物饲料试样 的制备
3原理
试样中的硫代葡萄糖苷在pH 7.0缓冲液中,在白芥子酶作用下水解生成异硫氰酸酯,用二氯甲烷萃取后,带羟基的异硫氰酸酯与乙醇反应,环化生成嚦唑烷硫酮,用紫外分光光度法测定。
4试剂或材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
4.1 水:GB/T 6682,二级。
4.2石油醚(沸程 30 °C~60 °C)。
4.3二氯甲 烷。
4.4无水乙醇。
4.7盐 酸(0.01 mol/L):准确移取0.9 mL浓盐酸,用水稀释并定容至1 L,混匀。
4.8氢氧化钠溶液(0.01 mol/L) :准确称取0.40 g氢氧化钠加水溶解,用水稀释并定容至1 L,混匀。
4.9 pH7.0 缓冲溶液:量取176.5 mL柠檬酸溶液(4.5)于1 000 mL容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液(4.6)稀释并定容至1 000 mL,混匀,用盐酸溶液(4.7)或氢氧化钠溶液(4.8)调整pH至7.0。临用现配。

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T13089—2020
代替GB/T13089—1991
饲料中唑烷硫酮的测定方法
Method for determination of oxazolidinethione in feeds2020-11-19发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-06-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准代替GB/T13089—1991《饲料中嗯唑烷硫酮的测定方法》。本标准与GB/T13089—1991相比，除编辑性修改外，主要技术内容差异如下：修改了方法的适用范围，增加了定量限（见第1章，1991年版的第1章）；修改了方法的原理（见第3章，1991年版的第2章）；—修改了白芥子酶的制备方法（见4.10，1991年版的3.4)；-修改了白芥子酶的用量和试验步骤（见第7章，1991年版的第6章）；修改了试验数据处理（见第8章，1991年版的第7章）；修改了精密度（见第9章，1991年版的第7章）。GB/T13089—2020
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、广东省农业科学院农产品公共监测中心、通威股份有限公司、中国饲料工业协会。本标准主要起草人：张凤秤、佟建明、干威利、雷宝良、杨发树、王黎文、宋涛、卢加文。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T13089—1991。
1范围
饲料中唑烷硫酮的测定方法
本标准规定了饲料中嗯唑烷硫酮的紫外分光光度测定方法。GB/T13089—2020
本标准适用于菜籽及其加工产品，以及含有菜籽及其加工产品的配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中嗯唑烷硫酮的测定。
本标准方法的定量限为150mg/kg。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用干本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用干本文件。GB/T5520粮油检验发芽试验
分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样中的硫代葡萄糖苷在pH7.0缓冲液中，在白芥子酶作用下水解生成异硫氰酸酯，用二氯甲烷萃取后，带羟基的异硫氰酸酯与乙醇反应，环化牛成嗯唑烷硫酮，用紫外分光光度法测定。4试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水：GB/T6682，二级。
4.2石油醚（沸程30℃60℃）。
4.3二氯甲烷。
4.4无水乙醇。
4.5柠檬酸溶液（0.1mol/L)：准确称取4.20g柠檬酸（CHgO，·H2O)溶解于水中，用水稀释并定容至200mL，混匀。临用现配。
4.6磷酸氢二钠（0.2mol/L)：准确称取28.39g无水磷酸氢二钠（Na2HPO.）溶解于水中，用水稀释并定容至1L，混匀。临用现配。
4.7盐酸（0.01mol/L）)：准确移取0.9mL浓盐酸，用水稀释并定容至1L，混匀。4.8氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：准确称取0.40g氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至1L，混匀。9pH7.0缓冲溶液：量取176.5mL柠檬酸溶液（4.5）于1000mL容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液（4.6）4.9
稀释并定容至1000mL，混匀，用盐酸溶液（4.7)或氢氧化钠溶液（4.8)调整pH至7.0。临用现配4.10白芥子酶：称取50g白芥（SinapisalbaL.）种子（按照GB/T5520做发芽率试验，72h内发芽率须大干85%，保存期不超过两年）粉碎后，置于500mL烧杯中，加人100mL石油醚（4.2），搅拌2min，静置，弃去上层液体，重复脱脂10次，使脂肪含量低于2%，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次！1Www.bzxZ.net
GB/T13089—2020
80%通过0.28mm试验筛，装在密闭容器中，置于一18℃以下保存，有效期为6个月。为保证白芥子酶活性，制备过程中环境温度应保持在30℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热，5仪器设备
紫外可见分光光度计：配备10mm石英比色皿。5.1
5.2分析天平：感量为0.01g、0.0001g。5.3实验用样品粉碎机。
5.4电热恒温干燥箱：控温精度士2.0℃。5.5旋涡混合仪。
5.6恒温水浴：控温精度土1.0℃。5.7高
高速冷冻离心机：可控制在20℃以下，不低于5000r/min。3振荡器：往复式，200次/min。5.8
微量移液器：50μL。
6样品
菜籽饼粮、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料按照GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部过0.28mm分析筛，混合均匀，装人密闭容器中，备用。
2油菜籽
按照GB/T20195规定制备试样。取至少100g试样，根据试样特性和粉碎机性能设定粉碎时间和速度，粉碎不应引起仁壳分离，试样不应出油，使其通过1.0mm分析筛，混合均匀，装人密闭容器中，备用。如果试样水分大于10%，应先将试样在不高干80℃烘箱中烘干，使其水分达到10%以下。若不立即制备样品，应将烘干后的试样置于广口瓶中密闭保存。7试验步骤
7.1试样溶液制备
平行做两份试验。准确称取预先于103℃土2℃干燥至恒重的试样0.2g（精确到0.0001g）试样置于10mL离心管中，加入100mg白芥子酶（4.10）、2.0mLpH7.0缓冲溶液（4.9），涡旋混合1min，置干35℃土1.0℃恒温水浴中酶解反应2h，取出冷却至室温，准确加人2.5mL二氯甲烷，涡旋混合1min，室温下200次/min振荡提取30min，于20℃下5000r/min离心20min。准确移取6mL无水乙醇于具塞试管中，用微量移液器准确移取离心管下层有机相溶液50μL，加人到装有无水乙醇的具塞试管中，盖上塞，涡旋混合1min，将具塞试管放人恒温水浴中，50℃士1.0℃下加热反应30min，冷却至室温，所得溶液为试样溶液。同时做空白试验，除不加试样外，空白试验采用与试样完全相同的试验步骤。7.2
在仪器最佳条件下，将试样溶液加入10mm比色皿中，以空白试验溶液为空白对照，用紫外分光光度计分别于235nm、245nm和255nm波长处测定试样溶液的吸光度值。2
试验数据处理
GB/T13089—2020
试样中嗯唑烷硫酮（以5-乙烯基-2-嗯唑烷硫酮计）的含量w以质量分数表示，单位为辜克每千克(mg/kg，以干基计），按公式(1)计算：w=（A245
式中：
A235+A255
A 235
试样溶液在235nm处的吸光度值；A245
试样溶液在245nm处的吸光度值；试样溶液在255nm处的吸光度值；试样的质量，单位为克(g)；
...............()
单位校正吸光度值所代表的5-乙烯基-2-嗯唑烷硫酮的质量，单位为毫克(mg)；质量单位换算
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。精密度
在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大干该算术平均值的10%。AG
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