ICS 07.080 A21 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 38475—2020 色素中生物毒素检测 胶体金快速定量法 Detection of mycotoxins in pigment - Rapid quantitative method of colloidal gold strip test 2020-11-19发布 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布 2020-11-19实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院、江南大学、北京萨姆伯科技有限公司。 本标准主要起草人：崔海峰、叶子弘、马爱进、刘丽强、张明洲、俞晓平、许益鹏、申居旭萍、张雅芬、匡华、郝帅。 1 范围 本标准规定了用胶体金快速定量法检测天然色素产品中生物毒素的方法。 本标准适用于基于天然产物提取及发酵制备的天然色素产品中黄曲霉毒素B1、桔青霉素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的快速定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样提取液中的生物毒素在层析过程中与检测试剂条中胶体金微粒标记的特异性抗体竞争结合并发生显色反应，颜色深浅与样品中生物毒素含量相关。通过读数仪检测检测线与质控线颜色深浅，并结合内置曲线自动计算生物毒素含量。 4 试剂或材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 4.1 水：GB/T 6682规定的二级水。 4.2 黄曲霉毒素B1：纯度≥98%。 4.3 桔青霉素：纯度≥98%。 4.4 玉米赤霉烯酮：纯度≥98%。 4.5 呕吐毒素：纯度≥98%。 4.6 苯-乙腈混合液：98.0 mL苯与2.0 mL乙腈混合。 4.7 稀释缓冲液：由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、Triton X-100及水配制，pH=8.0，定容至1000 mL。 4.8 70%甲醇提取液：70 mL甲醇加水至100 mL混匀。 4.9 PBS缓冲溶液：氯化钠、磷酸盐等溶解后调pH至7.0并定容。 4.10 0.1%吐温20-PBS溶液：PBS中加入吐温20配制。 4.11 0.1%磷酸溶液：1 mL磷酸定容至1000 mL。 4.12 0.1 mg/L生物毒素标准储备液：用苯-乙腈溶液溶解标准品并定容，4℃保存。 5 仪器设备 天平（0.01 g及0.01 mg）、粉碎机（≥3000 r/min）、离心机（≥3000×g）、涡旋振荡器、读数仪、胶体金免疫层析试纸条、微量移液器、免疫亲和柱等。 6 样品制备 6.1 取样 按GB/T 5491规定执行。 6.2 试样制备 6.2.1 固体样品：取500 g样品，其中300 g粉碎过20目筛并混匀，分装保存。取2.0 g样品加入70%甲醇提取液20.0 mL，振荡2~3 min后过滤或离心，取上清液100 μL加入稀释缓冲液900 μL混匀后待测，如有需要进行过滤处理。 6.2.2 液体样品：充分均质后取样离心保存备用。取200 μL样品加入1.8 mL稀释缓冲液中混匀后作为待测液。