SN/T 4656.5-2016
基本信息
标准号： SN/T 4656.5-2016
中文名称：进出口纺织品生物安全检验方法第5部分:菌落总数
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 进出口 纺织品 生物 安全 检验 方法 菌落 总数
标准分类号
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出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 4656.5-2016.Biosafety testing methods of the textiles for import and export-Part 5: Aerobic bacterial.
1范围
SN/T 4656.5规定了进出口纺织品中菌落总数的检验方法。
SN/T 4656.5适用于进出口纺织品菌落总数的检验。其他纺织类产品可参考使用本部分。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
SN/T1538.2培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1纺织品生物安全biosafety of textiles
纺织品中携带的有害生物本身或其代谢产物对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。
3.2菌落总数aerobic plate count;APC
样品经过处理,在36℃±1℃条件下培养后,所得单位质量或单位面积样品中所含菌落的总数。
4设备与材料
4.1常 规微生物检测用的基本设备与材料。
4.2无菌剪刀。
4.3电子天平:0.01 g.
4.4全滤网无菌均质袋。
4.5拍击式均 质器:400 ml.
4.6 无菌规格板:20 c㎡。
4.7无菌干燥棉拭子。
4.8微量移液 器:200 μL~1 000 μL。
4.9 无菌吸头:1 000 μL。
4.10 无菌小三角瓶:25 mL。
4.11 无菌L玻棒。
1范围
SN/T 4656.5规定了进出口纺织品中菌落总数的检验方法。
SN/T 4656.5适用于进出口纺织品菌落总数的检验。其他纺织类产品可参考使用本部分。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
SN/T1538.2培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1纺织品生物安全biosafety of textiles
纺织品中携带的有害生物本身或其代谢产物对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。
3.2菌落总数aerobic plate count;APC
样品经过处理,在36℃±1℃条件下培养后,所得单位质量或单位面积样品中所含菌落的总数。
4设备与材料
4.1常 规微生物检测用的基本设备与材料。
4.2无菌剪刀。
4.3电子天平:0.01 g.
4.4全滤网无菌均质袋。
4.5拍击式均 质器:400 ml.
4.6 无菌规格板:20 c㎡。
4.7无菌干燥棉拭子。
4.8微量移液 器:200 μL~1 000 μL。
4.9 无菌吸头:1 000 μL。
4.10 无菌小三角瓶:25 mL。
4.11 无菌L玻棒。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4656.5—2016
进出口纺织品生物安全检验方法第5部分：菌落总数
Biosafety testing methods of the textiles for import and export-Part5：Aerobicbacterial
2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SN/T4656《进出口纺织品生物安全检验方法》共分为5部分：第1部分：白假丝酵母菌；
-第2部分：大肠埃希氏菌；
第3部分：大肠菌群；
第4部分：金黄色葡葡球菌；
第5部分：菌落总数。
本部分为SN/T4656的第5部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局、四川农业大学。SN/T4656.5—2016
本部分主要起草人：郭会清、杨娜、李、郭华麟、乔晴、禹建鹰、苗丽、徐超、白杰。Hii KAoNi KAca
HiiKAoNhiKAca
1范围
进出口纺织品生物安全检验方法第5部分：菌落总数
SN/T4656的本部分规定了进出口纺织品中菌落总数的检验方法。SN/T4656.5—2016
本部分适用于进出口纺织品菌落总数的检验。其他纺织类产品可参考使用本部分。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义bzxz.net
下列术语和定义适用于本文件。3.1
纺织品生物安全biosafetyoftextiles纺织品中携带的有害生物本身或其代谢产物对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施3.2
文aerobic plate count;APC
菌落总数
样品经过处理，在36℃土1℃条件下培养后，所得单位质量或单位面积样品中所含菌落的总数。4设备与材料
常规微生物检测用的基本设备与材料。无菌剪刀。
电子天平：0.01g。
全滤网无菌均质袋。
拍击式均质器：400ml。
无菌规格板：20cm。
无菌干燥棉拭子。
微量移液器：200μL~1000μL。4.8
无菌吸头：1000μL。
无菌小三角瓶：25mL。
无菌L玻棒。
HiiKAoNniKAca
SN/T4656.5--2016
4.12无菌玻璃平血或塑料平皿：15mm×90mm。4.13恒温培养箱：36℃±1℃。
4.14放大镜（5倍～10倍）或菌落计数器。4.15冰箱：2℃~8℃。
5培养基和试剂
磷酸盐缓冲液：见A.2。
5.2无菌生理盐水：见A.3。
5.3营养琼脂：见A.4。
5.4菌落总数测试片。
注：本部分中无菌稀释液均为磷酸盐缓冲液（5.1)或无菌生理盐水（5.2)。6样品制备
6.1称量法
无菌方法打开送检的样品，用无菌剪刀（4.2）均勾剪样，在电子天平（4.3）上准确称取剪下的样品25g样品，剪碎后加人到盛有225mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中，用拍击式均质器（4.5）拍打1min～2min，充分混勾.得到一个1：10的样品匀液。6.2多点采样洗脱法
无菌方法打开送检的样品，在样品四周和中间均匀布控5个采样点，用无菌规格板（4.6）按每个采样点20cm面积范围剪裁，每20平方厘米采样面积为1份检样.每个样品共采集5份检样，采样面积为100cm。将上述采集好的5份检样放人盛有200mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中，用拍击式均质器（4.5）拍打1min～2min.充分混勾.得到一个洗脱液.制成样品匀液作为原液。6.3棉拭子涂抹法
无菌操作方法打开送检的样品用无菌稀释液湿润无菌干燥棉拭子（4.7），在样品四周和中间均勾布控5个采样点，用无菌规格板（+.6）比照按每个采样点20cm面积范围均匀涂抹，每个采样点用1个无菌干燥棉拭子（4.7），立即用无菌剪刀（1.2）剪去棉拭子手接触部分.将涂抹部分一块放人盛有50mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中.制成1：10的样品匀液。6.4样品制备方法的选择
样品制备一般依6.1方法25g样品十225mL稀释液为基准方法，但当样品为面积较大或较厚实或多孔时，样品制备应采用6.2方法。当出现以下情况时：a)样品质地致密不容易剪碎制备；b)样品较贵重，客户要求无损检测的，样品制备应采用6.3方法。采用6.1，6.2方法时如果被检样品大量吸水而导致不能吸出足够样品均液时，无菌稀释液量可按整数倍递增，直至能有足够的测试样品匀液。采用6.2方法时如果被检样品面积过大或过小，采样点可按比例增加或减少。7菌落总数平板计数法
7.1原理
待测样品匀液经稀释充分混勾，使细菌充分分散，接种到平板上，单个细菌在含有丰富营养的培养HiiKAoNiKAca
SN/T4656.5—2016
基上经一定时间培养后形成肉眼可见的单个菌落，计数单个菌落数即代表样品中细菌总数。7.2检验程序
检验程序见图1。
按6.1、6.2、6.3制备的样品匀液10倍系列稀释
选择2个～3个连续的适宜稀释度的样品匀液。接种营养琼脂平板
48h±2h
菌落总数计数
报告结果
图1菌落总数平板计数法检验程序7.3操作步骤
7.3.1样品匀液稀释
用微量移液器（4.8）移取制备好样品匀液1mL.缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌小三角瓶（4.10）中（注意吸头尖端不要触及稀释液液面），振摇小三角瓶（4.10）或换用1支无菌吸头（4.9）反复吹打使其混合均勾，制成下一稀释度的样品匀液。按照以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，更换1次无菌吸头（4.9）。7.3.2样品接种
根据样品污染情况，选取合适的2个～3个稀释度样品勾液（包括原液）进行检测。在进行10倍系列稀释时，同时吸取每个稀释度2000μL样品勾液分别接种四个营养琼脂（5.3）平板，每个平板接种500μL，立即用无菌L玻棒（4.11)将接种的样品勾液均匀涂抹整个平板。同时分别吸取500μL无菌稀释液加人两个营养琼脂（5.3）平板内做空白对照。7.3.3培养
待营养琼脂（5.3）表面样品匀液充分吸收后，翻转平板，倒置放人36℃土1℃培养箱（4.13）内培养48h±2h。
7.4结果计数
菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU)表示。培养结束后应及时计数，优先选7.4.1
择同一稀释度的四个平板菌落平均数在20CFU200CFU范围的、菌落比较清晰的平板计数，可用放3
HiiKAoNhi KAca
SN/T4656.5-2016
大镜或菌落计数器（4.14）辅助计数。如果：a）所有的稀释度平板均无菌落生长，则直接以小于1来以最低稀释倍数报告结果。b）每个稀释度的四个平板菌落平均数都不在20CFU～200CFU范围内，选择接近20CFU~200CFU范围的稀释度计数，按式(1)计算。T=2k
式中：
T——每克、每平方厘米或每100平方厘米样品中的菌落总数；（1)
根据样品制备方法得出的系数，按6.2制备样品，k一2：按6.1，6.3制备样品，k=1：n-计数的平板数，一般情况下n=4；d稀释因子（计数的稀释度）。
只有一个稀释度四个平板上的菌落平均数在20CFU一200CFU范围内，按式（1）计算d）有两个连续稀释度的四个平板上的菌落平均数均在20CFU～200CFU范围内，则计数这两个连续稀释度四个平板菌落数，按式（2）计算。ZA+A2X10
(ni+n)Xd
式中：
每克、每平方厘米或每100平方厘米样品中的菌落总数；.（2）
根据样品制备方法得出的系数，按6.2制备样品，k=2：按6.1.6.3制备样品，k=1；ZA,
第一个稀释度所有计数平板上的菌落数之和；ZA.—第二个稀释度所有计数平板上的菌落数之和；计数的第一个稀释度的平板数，一般情况下n1=4；n2
-计数的第二个稀释度的平板数，一般情况下n2二4稀释因子（计数的第一个稀释度）。7.4.2
不同计数结果情况举例参见附录B。7.5
5结果报告
根据计数结果，报告每平方厘米、每克或每100平方厘米样品菌落总数，以CFU/cm2，CFU/g或CFU/100cm\表示。如计数结果为0.则以小于1乘以最低稀释倍数报告；如计数结果小于100CFU，以实际数值报告：如计数结果大于或等于100CFU时，报告时数值按GB/T8170规则进行修约，用10的指数形式来表示，数值保留两位有效数字。8菌落总数测试片法
8.1原理
以纸片、纸膜、胶片作为培养基载体，将特定的显色液和培养基附着在上面，通过微生物在培养基上的显色反应确定其菌落总数。
2检验程序
检验程序见图2。
HiKAoNhi KAca
8.3操作步骤
8.3.1样品匀液稀释
按7.3.1进行。
8.3.2样品接种
按6.1、6.2、6.3制备的样品匀液10倍系列稀释
选择2个～3个连续的适宜稀释度的样品匀液接种菌落总数测试片
36℃±1℃
48h±2h
菌落总数计数
报告结果
图2菌落总数测试片法检验程序
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根据样品污染情况，选取合适的2个～3个稀释度样品勾液（包括原液）进行检测。从冰箱（4.15）中取出菌落总数测试片（5.4），待其恢复至室温后，将菌落总数测试片置于平坦试验台面，揭开上层膜，每个稀释度吸取2000μL样品勾液慢慢均勾地接种到含有培养基部分中央，每个稀释度接种4个测试片，每个测试片接种500μL，然后再将上层膜缓慢盖下。同时分别吸取500μL无菌稀释液加人两个测试片做空白对照。静置10S左右使样品勾液被培养基充分吸收（具体操作步骤可按测试片说明书进行）。
8.3.3培养
将接种好的测试片透明面朝上水平置于恒温培养箱（4.13)内，36℃土1℃，培养48h土2h。8.4结果计数
根据测试片上培养基显色液不同，细菌在测试片上生长后会显示不同的特有颜色，比较容易计数；菌落较小时，计数时用放大镜或菌落计数器（4.14）辅助计数，测试片上所有菌落都应计数。优先选择同一稀释度的四个测试片菌落平均数在20CFU～200CFU范围的、菌落比较清晰的测试片计数，计数规则同7.4。
5结果报告
按7.5报告结果。
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A.1培养基制备及质量保证
附录A
（规范性附录）
培养基制备和试剂
按SN/T1538.1和SN/T1538.2，并对制备好的培养基进行性能测试，如使用等效的脱水合成培养基，使用前对其进行验收并按其说明书使用。A.2
磷酸盐缓冲稀释液
磷酸二氢钾
蒸馏水
贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中.用大约175mL的1mol/L氢氧化钠(NaOH)调pH7.2士0.2，用蒸水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL.用蒸馏水稀释至1000mL，分装到适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
无菌生理盐水
1成分
氯化钠
蒸馏水
A.3.2制法
1000mL
称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.4
营养琼脂
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
15g~20g
1000mL
A.4.2制法
SN/T4656.5—2016
将上述成分混合后，加热溶解，调pH7.4~7.6，分装到玻璃容器内，121℃高压灭菌20min，每平板倾注15mL～20mL琼脂，备用。
SN/T4656.5—2016
不同情况计数结果情况见表B.1。样品编号
稀释度
原液或1：10
1:1000
1:1000
1:1000
1:1000
1:1000
附录B
（资料性附录）
计数结果
平板1菌落数
注1：采用6.2制备样品时可以最先开始吸取原液试验。注2：带*为估计数值。
平板2菌落数
平板3菌落数
多不可计
平板4菌落数
多不可计
按6.1制备样品，则样品1报告T<10CFU/g：样品2k=1，2A=19+18+17+15=69，m=4，d=10-3，样品3:k=1,ZA=15+14+17+13=59n=4，d=10-2，样品4:k=1，ZA=205+201+203+202=811，n=4，d=10-，样品5：k=1，ZA=95+90+81+86=352，n=4，d=10-2，样品6：k=1,2A-150+138+156+142=5862A2=20+21+24+23=88，ni=4，n2=4，d=10-2。样品2.3、4.5、6的计算结果如下。
=3.5×10+CFU/g
4×10-3
《4x10-2=3.0×10°CFU/g
=4.1X105CFU/g
4×10-3
=1.8×10*CFU/g
4×10-2
586+88×10
=3.7X10*CFU/g
（4+4)×10-2
按6.2制备样品，样品1报告T，<1CFU/cm：则样品2：k=2，2A=19+18+17+15=69，n=4，d=103，样品3：k=22A=15+14+17+13=59，n=4，d=10-2；样品4k=22A=205+201+8
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进出口纺织品生物安全检验方法第5部分：菌落总数
Biosafety testing methods of the textiles for import and export-Part5：Aerobicbacterial
2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SN/T4656《进出口纺织品生物安全检验方法》共分为5部分：第1部分：白假丝酵母菌；
-第2部分：大肠埃希氏菌；
第3部分：大肠菌群；
第4部分：金黄色葡葡球菌；
第5部分：菌落总数。
本部分为SN/T4656的第5部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国河南出人境检验检疫局、四川农业大学。SN/T4656.5—2016
本部分主要起草人：郭会清、杨娜、李、郭华麟、乔晴、禹建鹰、苗丽、徐超、白杰。Hii KAoNi KAca
HiiKAoNhiKAca
1范围
进出口纺织品生物安全检验方法第5部分：菌落总数
SN/T4656的本部分规定了进出口纺织品中菌落总数的检验方法。SN/T4656.5—2016
本部分适用于进出口纺织品菌落总数的检验。其他纺织类产品可参考使用本部分。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义bzxz.net
下列术语和定义适用于本文件。3.1
纺织品生物安全biosafetyoftextiles纺织品中携带的有害生物本身或其代谢产物对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施3.2
文aerobic plate count;APC
菌落总数
样品经过处理，在36℃土1℃条件下培养后，所得单位质量或单位面积样品中所含菌落的总数。4设备与材料
常规微生物检测用的基本设备与材料。无菌剪刀。
电子天平：0.01g。
全滤网无菌均质袋。
拍击式均质器：400ml。
无菌规格板：20cm。
无菌干燥棉拭子。
微量移液器：200μL~1000μL。4.8
无菌吸头：1000μL。
无菌小三角瓶：25mL。
无菌L玻棒。
HiiKAoNniKAca
SN/T4656.5--2016
4.12无菌玻璃平血或塑料平皿：15mm×90mm。4.13恒温培养箱：36℃±1℃。
4.14放大镜（5倍～10倍）或菌落计数器。4.15冰箱：2℃~8℃。
5培养基和试剂
磷酸盐缓冲液：见A.2。
5.2无菌生理盐水：见A.3。
5.3营养琼脂：见A.4。
5.4菌落总数测试片。
注：本部分中无菌稀释液均为磷酸盐缓冲液（5.1)或无菌生理盐水（5.2)。6样品制备
6.1称量法
无菌方法打开送检的样品，用无菌剪刀（4.2）均勾剪样，在电子天平（4.3）上准确称取剪下的样品25g样品，剪碎后加人到盛有225mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中，用拍击式均质器（4.5）拍打1min～2min，充分混勾.得到一个1：10的样品匀液。6.2多点采样洗脱法
无菌方法打开送检的样品，在样品四周和中间均匀布控5个采样点，用无菌规格板（4.6）按每个采样点20cm面积范围剪裁，每20平方厘米采样面积为1份检样.每个样品共采集5份检样，采样面积为100cm。将上述采集好的5份检样放人盛有200mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中，用拍击式均质器（4.5）拍打1min～2min.充分混勾.得到一个洗脱液.制成样品匀液作为原液。6.3棉拭子涂抹法
无菌操作方法打开送检的样品用无菌稀释液湿润无菌干燥棉拭子（4.7），在样品四周和中间均勾布控5个采样点，用无菌规格板（+.6）比照按每个采样点20cm面积范围均匀涂抹，每个采样点用1个无菌干燥棉拭子（4.7），立即用无菌剪刀（1.2）剪去棉拭子手接触部分.将涂抹部分一块放人盛有50mL无菌稀释液的全滤网无菌均质袋（4.4）中.制成1：10的样品匀液。6.4样品制备方法的选择
样品制备一般依6.1方法25g样品十225mL稀释液为基准方法，但当样品为面积较大或较厚实或多孔时，样品制备应采用6.2方法。当出现以下情况时：a)样品质地致密不容易剪碎制备；b)样品较贵重，客户要求无损检测的，样品制备应采用6.3方法。采用6.1，6.2方法时如果被检样品大量吸水而导致不能吸出足够样品均液时，无菌稀释液量可按整数倍递增，直至能有足够的测试样品匀液。采用6.2方法时如果被检样品面积过大或过小，采样点可按比例增加或减少。7菌落总数平板计数法
7.1原理
待测样品匀液经稀释充分混勾，使细菌充分分散，接种到平板上，单个细菌在含有丰富营养的培养HiiKAoNiKAca
SN/T4656.5—2016
基上经一定时间培养后形成肉眼可见的单个菌落，计数单个菌落数即代表样品中细菌总数。7.2检验程序
检验程序见图1。
按6.1、6.2、6.3制备的样品匀液10倍系列稀释
选择2个～3个连续的适宜稀释度的样品匀液。接种营养琼脂平板
48h±2h
菌落总数计数
报告结果
图1菌落总数平板计数法检验程序7.3操作步骤
7.3.1样品匀液稀释
用微量移液器（4.8）移取制备好样品匀液1mL.缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌小三角瓶（4.10）中（注意吸头尖端不要触及稀释液液面），振摇小三角瓶（4.10）或换用1支无菌吸头（4.9）反复吹打使其混合均勾，制成下一稀释度的样品匀液。按照以上操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，更换1次无菌吸头（4.9）。7.3.2样品接种
根据样品污染情况，选取合适的2个～3个稀释度样品勾液（包括原液）进行检测。在进行10倍系列稀释时，同时吸取每个稀释度2000μL样品勾液分别接种四个营养琼脂（5.3）平板，每个平板接种500μL，立即用无菌L玻棒（4.11)将接种的样品勾液均匀涂抹整个平板。同时分别吸取500μL无菌稀释液加人两个营养琼脂（5.3）平板内做空白对照。7.3.3培养
待营养琼脂（5.3）表面样品匀液充分吸收后，翻转平板，倒置放人36℃土1℃培养箱（4.13）内培养48h±2h。
7.4结果计数
菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU)表示。培养结束后应及时计数，优先选7.4.1
择同一稀释度的四个平板菌落平均数在20CFU200CFU范围的、菌落比较清晰的平板计数，可用放3
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大镜或菌落计数器（4.14）辅助计数。如果：a）所有的稀释度平板均无菌落生长，则直接以小于1来以最低稀释倍数报告结果。b）每个稀释度的四个平板菌落平均数都不在20CFU～200CFU范围内，选择接近20CFU~200CFU范围的稀释度计数，按式(1)计算。T=2k
式中：
T——每克、每平方厘米或每100平方厘米样品中的菌落总数；（1)
根据样品制备方法得出的系数，按6.2制备样品，k一2：按6.1，6.3制备样品，k=1：n-计数的平板数，一般情况下n=4；d稀释因子（计数的稀释度）。
只有一个稀释度四个平板上的菌落平均数在20CFU一200CFU范围内，按式（1）计算d）有两个连续稀释度的四个平板上的菌落平均数均在20CFU～200CFU范围内，则计数这两个连续稀释度四个平板菌落数，按式（2）计算。ZA+A2X10
(ni+n)Xd
式中：
每克、每平方厘米或每100平方厘米样品中的菌落总数；.（2）
根据样品制备方法得出的系数，按6.2制备样品，k=2：按6.1.6.3制备样品，k=1；ZA,
第一个稀释度所有计数平板上的菌落数之和；ZA.—第二个稀释度所有计数平板上的菌落数之和；计数的第一个稀释度的平板数，一般情况下n1=4；n2
-计数的第二个稀释度的平板数，一般情况下n2二4稀释因子（计数的第一个稀释度）。7.4.2
不同计数结果情况举例参见附录B。7.5
5结果报告
根据计数结果，报告每平方厘米、每克或每100平方厘米样品菌落总数，以CFU/cm2，CFU/g或CFU/100cm\表示。如计数结果为0.则以小于1乘以最低稀释倍数报告；如计数结果小于100CFU，以实际数值报告：如计数结果大于或等于100CFU时，报告时数值按GB/T8170规则进行修约，用10的指数形式来表示，数值保留两位有效数字。8菌落总数测试片法
8.1原理
以纸片、纸膜、胶片作为培养基载体，将特定的显色液和培养基附着在上面，通过微生物在培养基上的显色反应确定其菌落总数。
2检验程序
检验程序见图2。
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8.3操作步骤
8.3.1样品匀液稀释
按7.3.1进行。
8.3.2样品接种
按6.1、6.2、6.3制备的样品匀液10倍系列稀释
选择2个～3个连续的适宜稀释度的样品匀液接种菌落总数测试片
36℃±1℃
48h±2h
菌落总数计数
报告结果
图2菌落总数测试片法检验程序
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根据样品污染情况，选取合适的2个～3个稀释度样品勾液（包括原液）进行检测。从冰箱（4.15）中取出菌落总数测试片（5.4），待其恢复至室温后，将菌落总数测试片置于平坦试验台面，揭开上层膜，每个稀释度吸取2000μL样品勾液慢慢均勾地接种到含有培养基部分中央，每个稀释度接种4个测试片，每个测试片接种500μL，然后再将上层膜缓慢盖下。同时分别吸取500μL无菌稀释液加人两个测试片做空白对照。静置10S左右使样品勾液被培养基充分吸收（具体操作步骤可按测试片说明书进行）。
8.3.3培养
将接种好的测试片透明面朝上水平置于恒温培养箱（4.13)内，36℃土1℃，培养48h土2h。8.4结果计数
根据测试片上培养基显色液不同，细菌在测试片上生长后会显示不同的特有颜色，比较容易计数；菌落较小时，计数时用放大镜或菌落计数器（4.14）辅助计数，测试片上所有菌落都应计数。优先选择同一稀释度的四个测试片菌落平均数在20CFU～200CFU范围的、菌落比较清晰的测试片计数，计数规则同7.4。
5结果报告
按7.5报告结果。
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A.1培养基制备及质量保证
附录A
（规范性附录）
培养基制备和试剂
按SN/T1538.1和SN/T1538.2，并对制备好的培养基进行性能测试，如使用等效的脱水合成培养基，使用前对其进行验收并按其说明书使用。A.2
磷酸盐缓冲稀释液
磷酸二氢钾
蒸馏水
贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中.用大约175mL的1mol/L氢氧化钠(NaOH)调pH7.2士0.2，用蒸水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL.用蒸馏水稀释至1000mL，分装到适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
无菌生理盐水
1成分
氯化钠
蒸馏水
A.3.2制法
1000mL
称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.4
营养琼脂
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
15g~20g
1000mL
A.4.2制法
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将上述成分混合后，加热溶解，调pH7.4~7.6，分装到玻璃容器内，121℃高压灭菌20min，每平板倾注15mL～20mL琼脂，备用。
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不同情况计数结果情况见表B.1。样品编号
稀释度
原液或1：10
1:1000
1:1000
1:1000
1:1000
1:1000
附录B
（资料性附录）
计数结果
平板1菌落数
注1：采用6.2制备样品时可以最先开始吸取原液试验。注2：带*为估计数值。
平板2菌落数
平板3菌落数
多不可计
平板4菌落数
多不可计
按6.1制备样品，则样品1报告T<10CFU/g：样品2k=1，2A=19+18+17+15=69，m=4，d=10-3，样品3:k=1,ZA=15+14+17+13=59n=4，d=10-2，样品4:k=1，ZA=205+201+203+202=811，n=4，d=10-，样品5：k=1，ZA=95+90+81+86=352，n=4，d=10-2，样品6：k=1,2A-150+138+156+142=5862A2=20+21+24+23=88，ni=4，n2=4，d=10-2。样品2.3、4.5、6的计算结果如下。
=3.5×10+CFU/g
4×10-3
《4x10-2=3.0×10°CFU/g
=4.1X105CFU/g
4×10-3
=1.8×10*CFU/g
4×10-2
586+88×10
=3.7X10*CFU/g
（4+4)×10-2
按6.2制备样品，样品1报告T，<1CFU/cm：则样品2：k=2，2A=19+18+17+15=69，n=4，d=103，样品3：k=22A=15+14+17+13=59，n=4，d=10-2；样品4k=22A=205+201+8
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