TB/T 2930-1998.
1范围
TB/T 2930规定了采用β一半乳糖苷酶滤膜荧光法,对生活饮用水中总大肠菌群进行快速定量检验的基本要求以及方法原理、应用范围、仪器设备、培养基和试剂、方法步骤和结果报告要求。
TB/T 2930适用于铁路集中式及分散式给水生活饮用水及水源水的快速卫生质量监测。矿泉水等的总大肠菌群检验也可参照本标准。
2引用标准
下列标准所包括的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效.所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB 5750--1985生 活饮用水标准检验法
3定义
本标准采用下列定义。
3.1 总大肠菌群
一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24 h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。[GB 5750中36]
3.2 总大肠菌群数
每100ml水样中所含有的总大肠菌群的数目。
4基本要求
4.1 铁路生活饮用水水质检验的一般规则、水样的采集和保存以及数据的处理应符合GB 5750规定。
4.2所用计量仪器、 设备,使用前应由国家认可的计量部门检定合格。
5原理
水样经微孔滤膜滤过后,将水中细菌截留在滤膜上。其中总大肠菌群具有β-半乳糖苷酶,经37C.15 h培养,能使含吸在衬垫培养基中的产荧光底物4一甲基伞形酮酰β-D-半乳糖苷(MUGAL)水解,导致荧光物质4一甲基伞形酮释放,在365 nm长波紫外灯照射下,滤膜上的菌落呈现出特征性蓝色荧光斑点。
6仪器与设备
6.1 高压蒸汽灭菌器。
6.2干热灭菌箱。
6.3恒温箱:36℃±1℃
6.4 电炉。
6.5 冰箱。
6.6 滤器。

中华人民共和国铁道行业标准
TB/T2930-1998
铁路生活饮用水中总大肠菌群检测法β一半乳糖苷酶滤膜荧光法
1998—05-04发布
中华人民共和国铁道部
1998—11--01实施
TB/T2930—1998
本标准是依据美国公共卫生协会（APHA）、美国自来水厂协会（AWWA)和美国水污染控制联合会（WPCF）标准化委员会于1992年批准发布的《大肠菌群产色底物试验》及美国环境保护局批准使用的以MM一ONPG显色反应作为总大肠菌群的自动分析方法原理，经多年研究改进及现场对比试验，在总结同名科研成果的基础上提出的。本标准的附录是标准的附录。
本标准由铁道部劳动卫生研究所提出并归口。本标准主要起草单位：南京铁道医学院。本标准参加起草单位：铁道部劳动卫生研究所。本标准主要起草人：林大榕、项龙生、贺冰喆、张辉、汪国雄。本标准委托南京铁道医学院负责解释。1范鼠
中华人民共和国铁道行业标准
铁路生活饮用水中总大肠菌群检测法β-半乳糖苷酶滤膜荧光法
TB/T2930-1998
本标准规定了采用β一半乳糖苷酶滤膜荧光法，对生活饮用水中总大肠菌群进行快速定量检验的基本要求以及方法原理、应用范、仪器设备、培养基和试剂、方法步骤和结果报告要求。
本标准适用于铁路集中式及分散式给水生活饮用水及水源水的快速卫生质量监测。矿泉水等的总大肠菌群检验也可参照本标准。2引用标准
下列标准所包括的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效.所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB5750--1985生活饮用水标准检验法3定义
本标准采用下列定义。
3.1总大肠菌群
一群需氧及兼性厌氧的，在37℃C生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。［GB5750中36］
3.2总大肠菌群数
每100ml水样中所含有的总大肠菌群的数目。4基本要求
4.1铁路生活饮用水水质检验的一般规则、水样的采集和保存以及数据的处理应符合GB5750规定。
4.2所用计量仪器、设备，使用前应由国家认可的计量部门检定合格。5原理
中华人民共和国铁道部1998—05—04批准1998—11-01实施
TB/T29301998
水样经微孔滤膜滤过后，将水中细菌截留在滤膜上。其中总大肠菌群具有β一半乳糖苷酶，经37℃、15h培养，能使含吸在衬垫培养基中的产荧光底物4一甲基伞形酮酰一β-D—半乳糖苷（MUGAL）水解，导致荧光物质4一甲基伞形酮释放，在365nm长波紫外灯照射下，滤膜上的菌落呈现出特征性蓝色荧光斑点。6
仪器与设备
高压蒸汽灭菌器。
6.2干热灭菌箱。
6.3恒温箱：36℃士1℃。
6.4电炉。
6.5冰箱。
6.6滤器。
6.7抽滤设备。
6.8滤膜，孔径0.45μm，直径4.7cm。6.9衬垫：纸质或玻璃纤维质，不含抑菌物质，直径4.9cm，两张衬垫可浸吸2.5ml溶液。6.10
培养血。
无齿镊子。
长波紫外灯：365nm，功率<6W。7培养基和试剂
7.1MUGAL培养液：成分和制法见附录A。7.2脱氯剂：称取1.8g硫代硫酸钠溶于100ml蒸馅水中，经121℃灭菌20min备用。如水样中含氯消毒剂，可按每100ml水样加0.1ml脱氯剂进行脱氯。7.3生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，经121C灭菌20min备用。8步骤
8.1准备工作
8.1.1滤膜灭菌
将滤膜放人烧杯中，加人蒸馏水，置于沸水浴中煮沸20min灭菌。8.1.2衬垫灭菌
先用高压蒸汽灭菌器经121℃灭菌20min，再置人干热灭菌箱中经105℃干燥30min。8.1.3培养血灭菌
按常规方法灭菌。
8.1.4衬垫添加MUGAL培养液
用无菌操作取两张灭菌衬垫置于灭菌培养血中，用灭菌吸管吸取2.5mlMUGAL培养液滴加到衬垫上，使完全吸透并小心除去过多的培养液。8.1.5滤器灭菌
TB/T2930-1998
先用干燥棉球或卫生纸擦去滤器上的水份，再用点燃的酒精棉球火焰灭菌。8.2过滤水样
用灭菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将其粗糙面向上贴放在灭菌的滤器滤床上，固定好滤器，以无菌操作方法将充分混匀的100ml水样注人滤器中，打开滤器阀，在负0.5个大气压下抽滤。混浊度及含菌量较高的水样，应作稀释处理。8.3培养
水样滤完后，保持负压约5S，关上滤器阀门，取下滤简，平衡气压，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，将滤膜截留细菌面向上，移放到吸收有MUGAL培养液的衬垫上。滤膜要与衬垫完全贴紧，两者之间不得留有气泡，盖好血盖，放人37℃、相对湿度大于90%的恒温箱中培养15h（箱内可放一块湿棉花于一血盖上保持湿润）。注：培养时间不超过24h均不影响结果的判定。8.4观察结果
将培养后的平皿于暗室打开血盖，在365nm长波紫外灯照射下观察有无蓝色荧光斑点。凡显蓝色荧光、直径大于菌落、呈现出带有扩散性“晕轮”特征的斑点，则判定为总大肠菌群，予以计数。
9结果报告
按下式计算滤膜上的总大肠菌群荧光斑点数，以每100ml水样中的大肠菌群数报告。Fx100
式中：Q一一每100ml水中总大肠菌群数，cfu/100ml；F数出的荧光斑点数，cfu；
G一一过滤的水样量，ml
注：如采用稀释水样，结果应乘以稀释倍数。（1）
A1成分
TB/T2930-1998
附录A
(标准的附录）
MUGAL培养液的配制方法
磷酸氢二钾（K,HPO,·3H2O)
磷酸氢铵钠（NaNH,HPO·4H,O)
硫酸镁（MgSO·7H,O)
氯化钠(NaCI)
柠檬酸钠（CHNaO·2HO)
硫酸锰（MnSO.·HO)
硫酸锌（ZnSO,·7HO）
蛋白陈
牛肉膏粉
十二烷基硫酸钠（C2H2sNaSO)
去氧胆酸钠www.bzxz.net
蒸馏水
A2制法
1000ml
A2.1将磷酸氢二钾、磷酸氢铵钠、硫酸镁、氟化钠、柠檬酸钠、硫酸锰、硫酸锌、蛋白陈、牛肉膏粉混合置入750ml蒸馏水中加热溶解，调整pH值为7.2～7.4，用脱脂棉过滤到烧瓶内，以121C灭菌15~20min。
注：锰、锌盐用量极微，可先配成1%溶液，然后按每100ml培养液中加入此1%溶液50叫l。A2.2将乳糖、十二烷基硫酸钠、去氧胆酸钠、MUGAL混合溶人250ml蒸馏水中，以115℃灭菌10min，趁热与上述已灭菌的溶液混匀成MUGAL培养液。以无菌操作将培养液分装于2.5ml安或小瓶中，存于冷暗处，可使用一年。A3质量控制
A3.1每批培养液使用前均应设标准菌株的阳性对照和阴性对照。A3.2至少应选用大肠埃希氏菌和大肠埃希氏菌以外的一种总大肠菌群细菌（如阴沟肠杆菌）为阳性对照。
A3.3应选用一种非大肠菌群细菌（如变形杆菌）为阴性对照。A3.4应将上述三种细菌分别用灭菌生理盐水配制成菌密度为每100ml含数十个cfu的模拟水样，按本标准方法操作，观察并记录检测结果。A3.5阳性对照应在培养12～15h即可出现明显阳性结果，阴性对照在培养24h后仍应阴4
性，且无杂菌干扰。
TB/T2930-1998
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