本文件规定了植物中6种绿原酸类物质（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C）的测定方法--高效液相色谱法。 本文件适用于植物的根、茎、叶、花、果实、种子等样品中的6种绿原酸类物质（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C）的测定。

ICS07.080
ccsA40
中华人民共和国国家标准
GB/T43733—2024
植物中绿原酸类物质的测定
高效液相色谱法
Determination ofchlorogenicacidsin plants-High-performanceliquidchromatography2024-03-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-03-15实施
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GB/T43733—2024
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1范围
植物中绿原酸类物质的测定
高效液相色谱法
GB/T43733—2024
本文件规定了植物中6种绿原酸类物质(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C)的测定方法一高效液相色谱法。本文件适用于植物的根、茎、叶、花、果实、种子等样品中的6种绿原酸类物质（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C)的测定。规范性引用文件
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GB/T6682
2分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义4原理
样品经50%甲醇水溶液超声提取C1a反相色谱柱分离.在波长327nm处用高效液相色谱仪紫外检测器检测，相对保留时间定性，外标法定量。，试剂或材料
如无特别说明，水为GB/T6682规定的一级水。甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙睛(CH,CN）：色谱纯。
甲酸(HCOOH）：色谱纯。
新绿原酸(C16H1:OgCAS号:906-33-2），纯度≥95%。5.5
绿原酸(C16H18O，,CAS号：327-97-9）纯度≥95%。5.6
隐绿原酸(C1H1sOgCAS号：905-99-7），纯度≥95%。异绿原酸A(C25H24O12CAS号：2450-53-5），纯度≥95%。GB/T43733—2024
5.8异绿原酸B(C25H24O12，CAS号：14534-61-3），纯度≥95%。5.9异绿原酸C(C2sH24O12.CAS号:32451-88-0），纯度≥95%。0.1%甲酸水溶液：准确吸取1mL甲酸(5.3)于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。5.10
5.1150%甲醇水溶液：准确量取250mL甲醇(5.1)和250mL水，混匀，作为提取溶剂。5.12标准储备液(2.50mg/mL)分别准确称取绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C各0.025g(精确至0.0001g），用甲醇(5.1)溶解并定容至10mL。混匀后转入棕色玻璃容器中，4C冰箱保存，保存期三个月。5.13标准中间液(100μg/mL):分别准确吸取标准储备液(5.12)各1.00mL于同一25mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液稀释至刻度，混匀。临用前配制。5.14标准系列工作液：分别准确吸取标准中间液(5.13)0.500mL、2.50mL于100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液(5.11)定容至100mL;再分别准确吸取标准中间液(5.13)1.00mL、2.50mL、5.00mL于10mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液(5.11）定容至10mL。得到标准系列工作的质量浓度分别为0.500μg/mL、2.50μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL。临用前配制。5微孔滤膜（NY）：0.45μm。
6仪器设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器。6.17bzxz.net
6.2电子天平：感量0.1g和0.1mg。6.3涡旋振荡器。
超声波振荡器。
6.5离心机转速不低于4000r/min。7样品
7.1样品的制备
7.1.1含水量较低的固体样品：称取100g样品，粉碎均匀，制得均匀一致的样品，冰箱中冷藏保存。7.1.2新鲜水果和蔬菜类：称取500g样品，粉碎均质，制得均匀一致的匀浆，冰箱中冷冻保存7.2样品的提取
准确称取2g(精确到0.0001g)样品于50.0mL离心管中，加入30mL50%甲醇水溶液(5.11），超声提取30min，用50%甲醇水溶液(5.11)定容至刻度，混匀，离心，经0.45μm微孔滤膜过滤后待测。8试验步骤
8.1色谱参考条件
色谱柱：C1柱，5μm，4.6mmx×250mm(或相当型号色谱柱）。2
8.1.2流动相：A:乙睛，B:0.1%甲酸-水溶液，淋洗梯度见表1。8.1.3流速：1.0mL/min。
8.1.4柱温:30℃。
5检测波长：327nm。
8.1.6进样量：10μL
标准曲线绘制
高效液相色谱洗脱梯度参考条件流速
mL/min
流动相 A
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流动相B
将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准品液相色谱图参见附录A的图A.1。8.3样品测定
将样品溶液(见7.2)注入高效液相色谱仪中，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到待测液中绿原样品液相色谱图可参考图A.2金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图。酸类各物质的浓度。
注：必要时，对待测液进行稀释。9分析结果的表述
样品中6种绿原酸类物质的含量按式(1)计算：exVxf
式中：
X；样品中各组分的含量，单位为毫克每干克(mg/kg)；C；一由标准曲线得到样品溶液中各组分的含量，单位为微克每毫升(μg/mL)；V一样品溶液定容体积，单位为毫升（mL)；f
试液的稀释倍数；
m；一样品质量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。
.（1)
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精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。11其他
方法的检出限为1.5mg/kg.定量限为5mg/kg。4
附录A
(资料性附录)
6种绿原酸类物质标准品及金银花样品的液相色谱图A.16种绿原酸类物质标准品的液相色谱图见图A.1。mAu
新绿原酸
绿原酸
骼绿原酸
异绿原限A
酒照异绿原酸C
异绿原酸B
6种绿原酸类物质标准品的液相色谱图A.2金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图见图A.2。绿原酸
新绿原酸
隐绿原酸
异绿原酸入
异缘原酸C
异绿原酸B
金银花样品中绿原酸类物质的液相色谱图16
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