本标准适用于以甲萘醌或甲萘氢醌单醋酸酯和植物醇(包括天然植物醇和异植物醇)为主要原料,经化学合成而制得的食品营养强化剂植物甲萘醌(维生素 K1)。

中华人民共和国国家标准
GB1903.67—2024
食品安全国家标准
食品营养强化剂
2024-02-08发布
植物甲萘醌（维生素K1）
2024-08-08实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
1范围
食品安全国家标准
食品营养强化剂
植物甲萘醒（维生素K,）
GB1903.67—2024
本标准适用于以甲萘醒或甲萘氢单醋酸酯和植物醇（包括天然植物醇和异植物醇）为主要原料，经化学合成而制得的食品营养强化剂植物甲萘醒（维生素K）。2
化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1化学名称
2-甲基-3-（3,7，11,15-四甲基十六-2-烯基)-1,4-萘醒的反式和顺式异构体的混合物2.2分子式
CaiH4bO2
结构式
2.4相对分子质量
450.71（按2022年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
感官要求
黄色至橙色
无臭或几乎无臭
黏稠液体，澄清
检验方法
取适量试样，均匀置于清洁、干燥的白瓷盘或透明烧杯中，在自然光下，观察其色泽和状态，嗅其气味1
GB1903.67—2024
理化指标
理化指标应符合表2的规定，
紫外吸光度比值（A254nm/A249m）折光率，n智
甲蔡醒，w/%
铅(Pb)/(mg/kg)
重金属（以Pb计）/（mg/kg）
砷（以As计)/（mg/kg）
表2理化指标
总植物甲萘醒，w/%
顺式植物甲萘醒，%
总有机溶剂残留（正己烷、甲苯、甲醇、丙酮和正庚烷之和)/（mg/kg）正已烷/（mg/kg）
甲苯/（mg/kg）
甲醇/（mg/kg）
97.0~103.0
0.70~0.75
1.525~1.528
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
GB/T614
附录A中A.5
GB 5009.75或GB 5009.12
GB5009.74
GB 5009.76或GB 5009.11
附录A中A.6
注1：商品化的植物甲萘醒产品应以符合本标准的植物甲萘醒为原料，添加工艺所必需的食品原料和/或食品添加剂作为辅料，其质量、范围和使用量应符合相应的食品安全国家标准。注2：生产溶剂为石油醚、正己烷、甲苯、甲醇、丙酮和正庚烷、2
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB1903.67—2024
本标准所用试剂和水，除特别说明，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水及以上试验用水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长士2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般试样溶液的吸光度读数以0.3～0.7为宜。A.2鉴别试验
显色反应
试剂和材料
A.2.1.1.1甲醇。
A.2.1.1.2
2氢氧化钾。
35%氢氧化钾-甲醇溶液：称取5.0g氢氧化钾，置于烧杯中，加100mL甲醇使其溶解，密闭避A.2.1.1.3
光放置过夜，取上部澄清液使用。溶液变黄褐色应重新配制。A.2.1.2
分析步骤
取试样1滴，置于比色管中，先加10mL甲醇，再加1mL5%氢氧化钾-甲醇溶液，振摇，溶液应显绿色。置于沸水浴中应显深紫色，随后变为红棕色。A.2.2红外吸收光谱
采用ATR法或膜法，按照GB/T6040进行试验，试样的红外光谱应与对照图谱一致，对照图谱见附录B中图B.1。
3紫外吸收峰
试剂和材料
异辛烷。
仪器和设备
A.2.3.2.1紫外分光光度计。
2电子天平，感量0.0001g。
A.2.3.2.2
A.2.3.3试样溶液的制备
称取0.025g（精确至0.0001g）试样，用异辛烷溶解并定容至50mL，摇匀。吸取溶液1mL，用异辛烷溶解并定容至50mL，摇匀，作为试样溶液备用。A.2.3.4分析步骤
将试样溶液（A.2.3.3）注入1cm石英比色皿，以异辛烷为参比溶液，测定试样溶液的吸光度，在3
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243nm、249nm、261nm和270nm波长处应有最大吸收，在228nm、246nm、254nm和266nm波长处应有最小吸收，
A.3总植物甲萘醒和顺式植物甲茶醒含量的测定A.3.1方法提要
试样用流动相溶解，硅胶柱分离，二极管阵列检测器或紫外检测器检测，内标法计算总植物甲萘醒含量，面积百分比法计算顺式植物甲萘醒含量。A.3.2试剂和材料
A.3.2.1正已烷：色谱纯。
A.3.2.2正戊醇：色谱纯
A.3.2.3标准物质：植物甲萘醒（维生素K）（C3H4sO2，CAS号：81818-54-4)的质量分数≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质A.3.2.4苯甲酸胆笛酯（C34HsoO2，CAS号：604-32-0）。A.3.3
仪器和设备
液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。电子天平：感量0.0001g。
参考色谱条件如下。
色谱柱：多孔二氧化硅（硅胶）微粒填料的色谱柱（250mmX4.6mm，粒径5μm），或其他等效色谱柱。
检测器波长：254nm。
柱温：30℃。
流动相：正已烷+正戊醇=800十1（V+V）。流速：1.0mL/min。
进样量：50μL。
分析步骤
A.3.4.1标准溶液的制备
内标溶液：称取适量苯甲酸胆笛酯，用流动相溶解，配制成浓度约为2.5mg/mL的溶液，摇匀，备用。
标准溶液：称取约100mg植物甲萘醒标准物质（精确至0.0001g），置于10mL棕色容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为标准储备液。临用时用流动相稀释成浓度约为0.1mg/mL的标准溶液，准确吸取10mL标准溶液和7mL内标溶液，移入25mL棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，即为标准工作溶液。
A.3.4.2试样溶液的制备
称取一定量（精确至0.0001g)试样，置于棕色容量瓶中，用流动相定容，摇匀，使植物甲萘醒含量约为0.1mg/mL。准确吸取10mL置于25mL棕色容量瓶中，再加入7mL内标溶液，用流动相定容至刻度，摇匀，即为试样溶液。色谱分析前用0.45μm微孔滤膜过滤，A.3.4.3测定
在A.3.3.3参考色谱条件下，吸取试样溶液和标准工作溶液分别注人液相色谱仪，记录所得的试样4
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溶液和标准工作溶液中内标物质峰面积和植物甲萘醒的峰面积。顺式植物甲萘醒与反式植物甲萘醒的分离度至少为1.5。液相色谱图见图B.2。5结果计算
试样中总植物甲萘醒含量计算
试样中总植物甲萘醒的质量分数Cx，数值以%表示，按式（A.1)计算：As
式中：
标准工作溶液中内标物质峰面积：X
标准工作溶液中内标物质含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；标准工作溶液中总植物甲醒峰面积；标准工作溶液中总植物甲茶醒的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样溶液中的总植物甲萘醒峰面积；试样溶液中内标物质峰面积；
试样溶液中内标物质含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；试样的定容体积，单位为毫升（mL）；试样的质量，单位为克（g）；
换算系数（将结果转换为%）；
换算系数（将毫克转换为克）。试样中顺式植物甲萘醒含量计算试样中顺式植物甲萘醒的含量Cz，数值以%表示，按式（A.2)计算：Cz=
式中：
Az——试样中顺式植物甲萘醒峰面积；试样中反式植物甲萘醒峰面积。AE
.........( A.l)
..（A.2)
试验结果以两次平行测定结果的算术平均值表示。结果保留到小数点后1位。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2.0%。A.4
紫外吸光度比值的测定
A.4.1方法提要
以异辛烷为参比溶液，测定植物甲萘溶液在波长254nm、249nm处的吸光度，计算其紫外吸光度比值。
分析步骤
将试样溶液（A.2.3.3）注人1cm石英比色血，以异辛烷为参比溶液，分别测定在波长254nm、249nm处的吸光度。
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结果计算
紫外吸光度比值X按式（A.3)计算：式中：
A254——试样溶液在254nm处测得的吸光度；A249——试样溶液在249nm处测得的吸光度...*.(A.3)
试验结果以两次平行测定结果的算术平均值表示。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0%。A.5甲萘醒限量
A.5.1试剂和材料
氰基乙酸乙酯
A.5.1.2异辛烷。
A.5.1.3氨水-乙醇溶液：1十1（体积比）。A.5.1.4甲萘醒对照溶液（20μg/mL）：称取0.20g（精确至0.01g）甲萘醒，用异辛烷定容至100mL，吸取1mL，用异辛烷定容至100mL，即为甲萘醒对照品溶液。仪器和设备
电子天平，感量0.0001g。
分析步骤
精确称取0.02g（精确至0.0001g)试样，置于10mL比色管中，加2mL异辛烷，溶解，作为试样溶液。依次加1mL氨水-乙醇溶液及2滴氰基乙酸乙酯，缓缓振摇，放置备用。对照品溶液：量取2mL甲萘对照品溶液，置于10mL比色管中，与试样溶液同样处理。A.5.4结果判定
试样溶液下层蓝紫色应不深于对照品溶液，即甲萘醒含量≤0.2%。A.6溶剂残留量的测定
A.6.1方法提要
在一定温度条件下，顶空瓶内试样中挥发性组分向液上空间挥发，在气液两相达到热力学动态平衡后，挥发性组分在气相中的浓度与其在液相中的浓度成正比。吸取上层气体进气相色谱分析，氢火焰离子化检测器检测，外标法定量。A.6.2
试剂和材料
A.6.2.1标准物质：甲醇（CAS号：67-56-1，质量分数≥99%）、丙酮（CAS号：67-64-1，质量分数》99%）、正已烷（CAS号：110-54-3，质量分数≥98%）、正庚烷（CAS号：142-82-5，质量分数≥99%）、甲苯（CAS号：108-88-3，质量分数≥99%），也可使用经国家认证并授予标准物质证书的溶剂残留检测用标准物质。
A.6.2.2N-甲基吡略烷酮（使用前应检查溶剂中不含有待测组分）。6
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A.6.2.3标准溶液的配制：准确称取各待测组分标准物质0.1g（精确至0.0001g），用N-甲基吡咯烷酮定容至10.0mL，配制成浓度为10.0mg/mL标准储备液。用N-甲基吡咯烷酮将标准储备液稀释成浓度为5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL和200.0μg/mL的系列混合标准溶液，摇匀。
仪器和设备
气相色谱仪：配备氢火焰离子化检测器(FID)和顶空进样系统。电子天平：感量0.0001g。
参考仪器条件
色谱柱：含有6%氰丙基苯基、94%聚二甲基硅氧烷固定相的石英毛细管柱（Φ0.32mm×60m，膜厚1.8um），或同等性能的色谱柱。A.6.4.2
载气：氮气。
载气流速：2.0mL/min。
升温程序：40℃保持3min，以2℃/min升温至70℃，以8℃/min升温至170℃保持3min，以30℃/min升温至240℃，保持3min。A.6.4.5
进样口温度：200℃。
检测器温度：300℃。
进样量：1.0mL。
分流比：5：1。
顶空瓶加热温度：80℃。
顶空瓶加热时间：30min。
定量环温度：100℃。
传输线温度：120℃。
分析步骤
标准工作液的制备
分别量取5.0mLN-甲基吡咯烷酮和0.5mL系列混合标准溶液，移人顶空瓶中，封盖，混匀。此时顶空瓶内含有各待测组分的量分别为2.5ug、5.0ug、10.0ug、25.0ug、50.0μg和100.0ug。A.6.5.2
试样溶液的制备
称取0.5g（±0.01g)试样（精确至0.0001g），置于顶空瓶中，加入5.0mLN-甲基吡咯烷酮，封盖，混匀。
A.6.5.3测定
在参考顶空进样条件和色谱条件下，分别对标准溶液和试样溶液顶空处理后进行色谱分析。以各待测组分峰面积为纵坐标，以顶空瓶中各待测组分含量为横坐标，绘制标准曲线，计算试样中溶剂残留量。气相色谱图见图B.3。
6结果计算
试样中待测组分的含量w;，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（A.4)计算：cix1000
m>1000
..（A.4)
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式中：
由标准曲线求得的试样中各待测组分含量，单位为微克（ug)；c:
试样的质量，单位为克（g）。
由式（A.4)计算得到甲醇、丙酮、正已烷、正庚烷、甲苯的含量之和即为试样中溶剂残留的含量。本方法甲醇、丙酮、正己烷、正庚烷、甲苯的检出限为2.0mg/kg，定量限为5.0mg/kg。试验结果以两次平行测定结果的平均值计。结果保留3位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的15%。8
植物甲萘酿红外吸收图谱见图B.1。3.0
%/录%
附录B
植物甲萘醒相关图谱
波长/μm
注：引自《药品红外光谱集》第一卷（一九九五）植物甲萘醒红外吸收图谱
含量测定液相色谱图见图B.2
标引序号说明：
内标物；
顺式植物甲萘醒；
反式植物甲萘醒。
图B.2含量测定液相色谱图
B.3溶剂残留量测定气相色谱图见图B.3。10bZxz.net
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14 t/min
GB1903.67—2024
标引序号说明：
甲醇；
丙酮；
正已烷；
正庚烷；
甲苯。
溶剂残留量测定气相色谱图
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