本标准适用于以酵母核糖核酸为原料经酶解法,或以核苷为原料经酶促法制得的食品营养强化剂5-单磷酸尿苷。

中华人民共和国国家标准
GB1903.69—2024
食品安全国家标准
食品营养强化剂
2024-02-08 发布
5-单磷酸尿苷
2024-08-08实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
食品安全国家标准
5'-单磷酸尿苷
食品营养强化剂！
GB1903.69—2024
本标准适用于以酵母核糖核酸为原料经酶解法，或以核苷为原料经酶促法制得的食品营养强化剂5'-单磷酸尿苷。
化学名称、分子式、结构式和相对分子质量化学名称
5'-单磷酸尿苷
分子式
C,HN,O,P
结构式
相对分子质量
324.18（按2018年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
白色或类白色
结晶状颗粒或粉末
无特殊气味
感官要求
检验方法
取适量试样，置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态，其气味1
GB1903.69—2024
理化指标
理化指标应符合表2的规定，
5'-单磷酸尿苷含量（以干基计），w/%吸光度比
水分，w/%
有关物质，w/%
pH(0.25%水溶液）
乙醇/（mg/kg）
铅（Pb)/（mg/kg）
A250 mm/A260 mm
A280mm/A260 mm
总砷（以As计）/（mg/kg）
微生物限量
微生物限量应符合表3的规定
菌落总数／（CFU/g）
霉菌和酵母菌总数/（CFU/g）
大肠菌群/（MPN/g）
沙门氏菌/25g
理化指标
0.70~0.78
微生物限量
不得检出
检验方法
附录A中A.4
附录A中A.5
第四法卡尔·费休法
附录A中A.6
GB/T 9724
附录A中A.7
附录A中A.8
附录A中A.9
检验方法
GB4789.15
A.1警示
附录A
检验方法
GB1903.69—2024
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，使用时需小心谨慎并按照相关规定操作。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2
一般规定
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备。所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.3鉴别试验
试剂和材料
盐酸（HC1）：36%～38%。
磷酸二氢钾（KH,PO）。
三水合磷酸氢二钾（KHPO，·3HO）。5'-单磷酸尿苷标准品（CH13NzO。P，CAS号：58-97-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
盐酸溶液：移取1mL盐酸，溶于水并定容至1000mL。磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L）：称取13.6g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000mL。磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：称取2.28g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至100mL。流动相：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（A.3.1.6），用0.1mol/L的磷酸氢二钾溶液（A.3.1.7）调pH至5.6，过滤膜，备用。
微孔滤膜：0.45μm，水系。
仪器和设备
电子天平：感量为0.001g。
紫外-可见光分光光度计。
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器，pH计：精度为0.01。
石英比色皿：1cm。
紫外最大吸收峰鉴别
分析步骤
A.3.3.1.1
试样溶液的制备
称取试样0.02g（精确至0.001g），用盐酸溶液（A.3.1.5）溶解并定容至1000mL，混匀，作为试样溶液。
GB1903.69—2024
A.3.3.1.2测定
将试样溶液（见A.3.3.1.1)注入1cm石英比色皿，以盐酸溶液（A.3.1.5）为空白，用紫外-可见光分光光度计A.3.2.2测定其吸光度，最大吸收值应在（262士2)nm处。A.3.4液相色谱保留时间鉴别
A.3.4.1分析步骤
A.3.4.1.1试样溶液的制备
称取试样0.02g（精确至0.001g），用流动相（A.3.1.8)溶解并定容至10mL。移取该溶液1.00mL，用流动相稀释并定容至100mL，混匀，过滤膜，作为试样溶液，A.3.4.1.2对照溶液的制备
称取5'-单磷酸尿苷标准品0.02g（精确至0.001g），用流动相（A.3.1.8)溶解并定容至10mL。移取该溶液1.00mL，用流动相稀释并定容至100mL，混匀，作为对照溶液。A.3.4.1.3
色谱参考条件
色谱柱：Cs色谱柱（柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm），或等效色谱柱。b）
检测波长：254nm。
流动相：同A.3.1.8。
流速：1.0mL/min。
柱温：30℃。
进样体积：20μL。
A.3.4.1.4
系统适应性试验
将对照溶液（见A.3.4.1.2)注入液相色谱仪中，记录色谱图5'-单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。连续进样6次，5'-单磷酸尿苷峰面积的相对标准偏差（RSD)应不大于2.0%。A.3.4.1.5测定
将试样溶液（见A.3.4.1.1）及对照溶液（见A.3.4.1.2)分别注人液相色谱仪中，记录色谱图。两者的主峰保留时间应一致，相对偏差土2.5%。A.45-单磷酸尿苷含量（以干基计）紫外分光光度法
A.4.1.1方法原理
采用紫外-可见光分光光度计，测定260nm处试样溶液的吸光度值，以摩尔吸光系数计算试样中5'-单磷酸尿苷的含量。
A.4.1.2试剂和材料
A.4.1.2.1盐酸(HCI)：36%～38%。A.4.1.2.2
盐酸溶液：移取1mL盐酸，溶于水并定容至1000mL。A.4.1.3
仪器和设备
A.4.1.3.1
A.4.1.3.2
电子天平：感量为0.001g。
紫外-可见光分光光度计。
3石英比色皿：1cm。
A.4.1.3.3
A.4.1.4分析步骤
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称取0.5g（精确至0.001g）样品，用盐酸溶液（A.4.1.2.2）溶解并定容至1000mL。移取该溶液10.0mL，用盐酸溶液稀释并定容至250mL，该溶液即为试样溶液。将试样溶液注入1cm的石英比色Ⅲl中，以盐酸溶液做空白，用紫外-可见光分光光度计测定其在260nm处的吸光度。结果计算
试样中5-单磷酸尿苷的质量分数（以于基计)w，的数值以百分比（%）表示.按式（A.1)计算w
式中：
AXMXVXfY
e×bXm
A---试样溶液在波长260nm下的吸光度；100
M——5'-单磷酸尿苷的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)[M=324.18]；V试样定容体积，单位为升（L)；试样溶液的稀释倍数（f=25）；f
.....(A.1)
---—5'-单磷酸尿苷在260nm处的摩尔吸收系数，单位为升每摩尔厘米[L/（mol·cm)]（e9900)；
比色皿厚度，单位为厘米（cm）；m——试样的质量，单位为克(g)；-—-—试样的水分含量，以%表示计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留小数点后一位。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的2%。高效液相色谱法
方法原理
采用液相色谱仪，测定试样溶液，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A.4.2.2试剂和材料
A.4.2.2.1
磷酸二氢钾（KH2PO）。
三水合磷酸氢二钾（K2HPO，·3H,O)。A.4.2.2.2
35'-单磷酸尿苷标准品（CH13NzO。P，CAS号：58-97-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予A.4.2.2.3
标准物质证书的标准品
A.4.2.2.4磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L）：称取13.6g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000mL。A.4.2.2.5
磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：称取2.28g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至100mLA.4.2.2.6
5流动相：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（A.4.2.2.4），用0.1mol/L的磷酸氢二钾溶液（A.4.2.2.5）调pH至5.6，过滤膜，备用。
A.4.2.2.75-单磷酸尿苷标准储备液（2000mg/L）：准确称取5'-单磷酸尿苷标准品0.02g（精确至5
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0.0001g）于10mL容量瓶中，用流动相（A.4.2.2.6）溶解并定容至刻度，配制成质量浓度2000mg/L标准储备液。4℃下保存，
A.4.2.2.85'-单磷酸尿苷标准工作溶液（20mg/L）：移取2000mg/L的标准储备液（A.4.2.2.7）1.00mL于100mL量瓶中，用流动相（A.4.2.2.6)稀释至刻度。微孔滤膜：0.45μm，水系。
A.4.2.2.9
仪器和设备
A.4.2.3.1
A.4.2.3.2
A.4.2.3.3
A.4.2.4.1wwW.bzxz.Net
电子天平：感量为0.0001g。
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器pH计：精度为0.01。
分析步骤
试样溶液的制备
称取试样0.02g（精确至0.0001g），用流动相溶解并定容至10mL。移取该溶液1.00mL，用流动相（A.4.2.2.6）稀释并定容至100mL，混匀，过滤膜，作为试样溶液。A.4.2.4.2
色谱参考条件
色谱柱：Cs色谱柱（柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um），或等效色谱柱。b)
检测波长：254nm。
流动相：同A.4.2.2.6。
流速：1.0mL/min。
柱温：30℃。
进样体积：20μL。
A.4.2.4.3
系统适应性试验
取5'-单磷酸尿苷标准工作溶液（A.4.2.2.8），注入液相色谱仪中，记录色谱图。5'-单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。连续进样6次，5'-单磷酸尿苷峰面积的相对标准偏差（RSD)应不大于2.0%。A.4.2.4.4测定
系统适用性试验合格后，将5\-单酸尿苷标准工作溶液（见A.4.2.2.8）及试样溶液（见A.4.2.4.1）分别注人液相色谱仪中，记录色谱图，参考色谱图见附录B中图B.1，按外标法进行计算。A.4.2.5结果计算
试样中5'-单磷酸尿苷的质量分数（以干基计)w2的数值以百分比（%)表示，按式（A.2)计算。A C2
=岁100-
式中：
A,——试样溶液中5'-单磷酸尿苷的峰面积；A2—-标准溶液中5'-单磷酸尿苷的峰面积；C2——标准溶液中5'-单磷酸尿苷的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)；C1——试样溶液中样品的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)；6
...A.2)
试样的水分含量，以%表示。
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计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留小数点后一位。两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的2%。A.5
吸光度比
方法原理
通过测定试样溶液在特定波长处的吸光度比值来表示试样的纯度A.5.2
试剂和材料
盐酸（HCI)：36%~38%。
盐酸溶液：移取1mL盐酸，溶于水并定容至1000mL。仪器和设备
电子天平：感量为0.001g。
紫外-可见光分光光度计。
石英比色血皿：1cm。
分析步骤
试样溶液的制备
称取试样0.02g（精确至0.001g），用盐酸溶液（A.5.2.2）溶解并定容至1000mL，混匀，作为试样溶液。
A.5.4.2测定
将试样溶液（见A.5.4.1)注入1cm石英比色皿，以盐酸溶液（A.5.2.2）为空白，用紫外-可见光分光光度计分别测定250nm、260nm及280nm处的吸光度。A.5.5
结果计算
紫外吸光度比值X，和X2分别按式（A.3)和式（A.4)计算。A250
式中：
A250——试样溶液在波长250nm处测得的吸光度；A260
试样溶液在波长250nm处测得的吸光度；A280——试样溶液在波长250nm处测得的吸光度。.（A.3）
....(A.4)
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的5%。A.6
5有关物质
方法原理
试样用流动相溶解后，采用液相色谱仪检测，峰面积比较法定量7
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试剂和材料
A.6.2.1磷酸二氢钾（KH,PO.）。A.6.2.2三水合磷酸氢二钾（K,HPO：3H，O）。A.6.2.35-单磷酸尿苷标准品（C,H13NO。P，CAS号：58-97-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
A.6.2.4尿苷（CH12N2O）：纯度≥98%。A.6.2.5
尿嘧啶（CHN202）：纯度≥98%。A.6.2.6
磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L）：称取13.6g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000mL。磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：称取2.28g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至100mL。A.6.2.8
流动相：0.1mol/L磷酸二氢钾（A.6.2.6），用0.1mol/L的磷酸氢二钾（A.6.2.7)调pH至5.6，过滤膜，备用。
微孔滤膜：0.45μm，水系。
仪器和设备
电子天平：感量为0.001g。
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。pH计：精度为0.01。
分析步骤
系统适应性溶液的制备
分别称取5'-单磷酸尿苷标准品（A.6.2.3）、尿苷（A.6.2.4)和尿嘧啶（A.6.2.5)0.02g（精确至0.001g），用流动相溶解并定容至10mL。移取上述溶液各1.00mL，用流动相稀释并定容至100mL，混勺A.6.4.2试样溶液的制备
称取试样0.02g（精确至0.001g），用流动相溶解并定容至10mL。移取该溶液5.00mL，用流动相稀释并定容至10.0mL，混匀，过滤膜。A.6.4.3对照溶液的制备
移取试样溶液（见A.6.4.2)2.00mL，用流动相稀释并定容至100mL，混匀。A.6.4.4灵敏度溶液的制备
移取对照溶液（见A.6.4.3)1.00mL，用流动相稀释并定容至10mL，混匀。A.6.4.5色谱参考条件
同A.3.4.1.3。
运行时间不小于5'-单磷酸尿苷保留时间的4倍A.6.4.6系统适应性试验
取系统适应性溶液（A.6.4.1)注人液相色谱仪中，记录色谱图。5'-单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质峰的分离度R应不小于2.0。灵敏度溶液中5'-单磷酸尿苷主峰的信噪比应大于3。9
A.6.4.7测定
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系统适用性试验合格后，将试样溶液（见A.6.4.2）及对照溶液（见A.6.4.3）分别注人液相色谱仪中，记录色谱图。参考色谱图见图B.2。根据试样溶液各杂质峰的峰面积之和与对照溶液中5'-单磷酸尿苷的峰面积进行比较计算有关物质的含量。A.6.5
5结果计算
试样中有关物质的含量w3的数值以百分比（%）表示，按式（A.5)计算。A3×2
W3=A.×100
式中：
A：—一试样溶液除主峰以外的所有杂质峰的峰面积之和；A4———对照溶液中主峰的峰面积。..（A.5)
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的10%A.7乙醇
A.7.1方法原理
试样置于密闭的顶空瓶中，在特定温度下平衡一定时间，使试样中的乙醇挥发出来并在顶空瓶内达到动态平衡，通过气相色谱仪进行分离检测，外标法定量。试剂和材料
乙醇（C2H。O）：色谱纯，纯度99.5%。A.7.2.1
氢氧化钠(NaOH)。
氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取40g氢氧化钠（A.7.2.2），加水稀释并定容至1000mL。顶空进样瓶：体积20mL。
仪器和设备
电子天平：感量为0.001g、0.0001g。气相色谱仪，配顶空进样器和氢火焰离子化检测器A.7.4
分析步骤
试样溶液的制备
称取试样10g（精确至0.001g），用氢氧化钠溶液（A.7.2.3)溶解并定容至100mL。移取10mL该溶液于顶空进样瓶，旋紧盖子，备用。A.7.4.2对照溶液的制备
称取0.01g乙醇（精确至0.0001g），用氢氧化钠溶液（A.7.2.3)溶解并定容至100mL。移取10mL该溶液于顶空进样瓶，旋紧盖子，备用。A.7.4.3色谱参考条件
色谱柱：毛细管柱（30mX0.53mm，固定液为6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷，薄膜厚度9
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为3.00μm)或等效柱。
柱温：初始温度40℃，保持20min，以10℃/min速率升温至240℃，保持10min。b）
检测器温度：250℃。
进样口温度：140℃。
载气：N2；柱流量：2.5mL/min。顶空进样器条件：平衡温度80℃，平衡时间60min；定量环温度85℃；传输线温度90℃。进样时间：1min。
进样量：1.0mL。
系统适应性试验
取对照溶液（见A.7.4.2)注人气相色谱仪中，观察色谱图。连续进样6次，乙醇峰面积的相对标准偏差（RSD)应不大于5.0%。A.7.4.5测定
系统适用性试验合格后.将试样溶液（见A.7.4.1)和对照溶液（见A.7.4.2)分别注入气相色谱仪中，记录色谱图，参考色谱图见附录C中图C.1。比较乙醇峰面积，计算乙醇含量。A.7.5
结果计算
试样中乙醇的含量w的数值以毫克每千克（mg/kg)表示，按式（A.6)计算A，×C×V.×1000
AXm×1000
式中：
试样溶液乙醇的峰面积；
对照溶液中乙醇的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g)；
换算系数；
对照溶液乙醇的峰面积，
.........
.........(A.6 )
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的10%。A.8铅(Pb)
称取试样1g（精确至0.001g），用1%硝酸溶解并定容至50mL，摇匀，作为试样溶液。其他操作按GB5009.12或GB5009.75石墨炉原子吸收光谱法的规定。A.9总砷(以As)计
称取试样1g（精确至0.001g），加10mL水溶解后，加4mL100g/L抗坏血酸和硫脲混合溶液，用水定容至50mL，摇匀，作为试样溶液。其他操作按GB5009.11或GB5009.76氢化物原子荧光光度法的规定。
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