本标准适用于以新鲜茶叶或茶多酚为原料,通过酶促反应转化,经分离纯化、浓缩、干燥制得的食品添加剂茶黄素。

中华人民共和国国家标准
GB1886.378—2024
食品安全国家标准
食品添加剂
2024-02-08发布
茶黄素
2024-08-08实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
食品安全国家标准
食品添加剂
茶黄素
GB1886.3782024
本标准适用于以新鲜茶叶或茶多酚为原料，通过酶促反应转化，经分离纯化、浓缩、干燥制得的食品添加剂茶黄素
主要成分的化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1茶黄素（TF)
分子式：C29H24O12
结构式：
相对分子质量：564.49（按2018年国际相对原子质量）2茶黄素-3-没食子酸酯（TF-3-G）2.2
分子式：C36H28O16
结构式：
相对分子质量：716.60（按2018年国际相对原子质量）OH
GB1886.378—2024
茶黄素-3'-没食子酸酯（TF-3'-G）分子式：C36H28O16
结构式：
相对分子质量：716.60（按2018年国际相对原子质量）茶黄素-33'-双没食子酸酯（TFDG)分子式：C4sH32O20
结构式：
相对分子质量：868.70（按2018年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定
理化指标
橙黄色至红褐色
粉末或晶状粉末
理化指标应符合表2的规定。
茶黄素含量，w/%
咖啡碱含量，w/%
水分，w/%
灰分，w/%
总砷（以As计）/（mg/kg）
铅（以Pb计）/（mg/kg）
微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
菌落总数/（CFU/g）
霉菌和酵母/（CFU/g）
大肠菌群/（MPN/g）
大肠埃希氏菌/（MPN/g）
沙门氏菌/25g
感官要求
1886.378—2024
检验方法
取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光下观察色泽、状态
理化指标
微生物指标
不得检出
检验方法
附录A中A.4
GB5009.76或GB5009.11
GB5009.75或GB5009.12
检验方法
GB4789.15
GB4789.38
GB1886.378—2024
A.1安全提示
附录A
检验方法
本标准的检验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，操作时应采取适当的安全和防护措施。使用易燃品时，严禁使用明火加热。A.2一般规定
本标准除另有规定外，所用试剂均为分析纯，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品应按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备，试验用水应符合GB/T6682的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶液配制时，均指水溶液。A.3鉴别试验
鉴别试验可与茶黄素含量测定同时进行，试样溶液色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液色谱图中的主峰保留时间基本一致
A.4茶黄素含量的测定
A.4.1方法提要
试样中的茶黄素经含乙睛的稳定溶液提取后，经液相色谱C18柱分离，紫外或二极管阵列检测器检测，外标法定量。
A.4.2试剂与材料
乙睛：色谱纯，
A.4.2.2磷酸。
A.4.2.3乙二胺四乙酸二钠。
A.4.2.4L-抗坏血酸
A.4.2.5磷酸溶液（0.1%）：移取1mL磷酸至烧杯中，用适量水溶解后转移至1000mL容量瓶并定容至刻度。
A.4.2.6乙二胺四乙酸二钠溶液（10mg/mL）：称取1.00g（精确至0.01g）乙二胺四乙酸二钠，用适量水溶解后转移至100mL容量瓶并定容至刻度，临用现配。A.4.2.7L-抗坏血酸溶液（10mg/mL）：避光条件下称取1.00g（精确至0.01g)L-抗坏血酸，用适量水溶解后转移至100mL棕色容量瓶并定容至刻度，临用现配。A.4.2.8稳定溶液：分别移取50mL乙二胺四乙酸二钠溶液（A.4.2.6）、50mLL-抗坏血酸溶液（A.4.2.7）和175mL乙睛（A.4.2.1)至1000mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，临用现配。A.4.3标准品
A.4.3.1茶黄素（TF）标准品（CAS号：4670-05-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
A.4.3.2茶黄素-3-没食子酸酯（TF-3-G)标准品（CAS号：30462-34-1）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
GB1886.378—2024
A.4.3.3茶黄素-3'-没食子酸酯（TF-3'-G)标准品（CAS号：28543-07-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。A.4.3.4茶黄素-3，3'-双没食子酸酯（TFDG)标准品（CAS号：30462-35-2）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。A.4.4标准溶液配制
A.4.4.1茶黄素标准储备溶液（2.00mg/mL）：分别准确称取茶黄素（TF）、茶黄素-3-没食子酸酯（TF-3G)、茶黄素-3\-没食子酸酯（TF-3'-G)、茶黄素-3,3'-双没食子酸酯（TFDG)各20mg（精确至0.0001g），分别置于10mL棕色容量瓶中，各加人适量稳定溶液（A.4.2.8)溶解并定容至刻度，混匀。于4℃冰箱中保存，保存期6个月
A.4.4.2茶黄素混合标准系列工作溶液：分别准确移取适量TF、TF-3-G、TF-3'-G、TFDG标准系列储备溶液于10mL容量瓶中，用稳定溶液（A.4.2.8）定容至刻度，配成20μg/mL、50ug/mL、100ug/mL、200μg/mL、300μg/mL的混合标准工作溶液，临用现配。A.4.5
仪器和设备
高效液相色谱仪：带有紫外检测器或二极管阵列检测器。分析天平：感量为0.01g、0.0001g。0.45um聚四氟乙烯滤膜。
分析步骤
试样溶液的制备
准确称取试样0.1g（精确至0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，用适量稳定溶液（A.4.2.8）溶解并定容至刻度。混匀后，经0.45um聚四氟乙烯滤膜过滤至棕色进样瓶中备用。A.4.6.2
液相色谱参考条件
参考条件如下：
色谱柱：C1反相色谱柱（150mmX4.6mm，3.5μm）或性能相当者。流动相：A相为乙睛（A.4.2.1），B相为磷酸溶液（A.4.2.5），梯度洗脱程序见表A.1。b）
流速：1mL/min；
柱温：35℃；
进样量：10μL；
波长：278nm。
时间/min
流动相梯度洗脱程序
GB1886.378—2024
时间/min
A.4.6.3测定
流动相梯度洗脱程序（续）
在参考色谱条件下，分别将系列标准溶液、试样溶液注人液相色谱仪中进行测定。以混合标准系列溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，由色谱软件工作站拟合标准曲线。试样溶液测得峰面积，根据标准曲线得到待测液中各种茶黄素的质量浓度。各组分的参考保留时间和色谱图见图B.1。结果计算
试样中茶黄素各组分的质量分数（w：)按式（A.1)计算：w;
式中：
×100%
m×1000×1000
待测液中茶黄素各组分的质量浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；试样溶液的体积，单位为毫升（mL）；试样的质量，单位为克（g)；
换算系数。
.........( A.l )
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，保留3位有效数字。在重复性条件下获得茶黄素的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。试样中茶黄素的质量分数(w)按式（A.2)计算：W=WTF+WTF-3-G+WTF-3'-G+WTFDG式中：
W TF-3-G
W TF-3'-G
W TFDG
试样中TF的质量分数；
试样中TF-3-G的质量分数；bzxZ.net
试样中TF-3\-G的质量分数；
试样中TFDG的质量分数。
咖啡碱含量的测定
方法提要
..（A.2)
试样中的咖啡碱经甲醇-水溶液提取后，经液相色谱仪C18柱分离，紫外或二极管阵列检测器检测，外标法定量。
：试剂与材料
甲醇：色谱纯。
乙睛：色谱纯。
磷酸。
甲醇-水溶液（6十4）：量取600mL甲醇加人400mL水，混匀。3标准品
GB1886.378—2024
咖啡碱标准品（CgH1oN.O2，CAS号：58-08-2）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
A.5.4标准溶液配制
咖啡碱标准储备溶液（1.00mg/mL）：准确称取咖啡碱标准品10mg（精确至0.0001g），置于A.5.4.1
10mL棕色容量瓶中，加人适量甲醇-水溶液溶解并定容至刻度，混匀后作为标准储备液备用。该溶液于4℃冰箱中保存，保存期6个月。：咖啡碱标准系列工作溶液：分别准确移取咖啡碱标准储备液50.0μL、100μL、250μL、1.00mL、A.5.4.2
2.50mL、12.50mL于50mL容量瓶中，用甲醇-水溶液定容至刻度，配成1.00μg/mL、2.00ug/mL、5.00μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、250ug/mL的标准系列工作溶液，临用现配。A.5.5
仪器和设备
高效液相色谱仪：带有紫外检测器或二极管阵列检测器，分析天平：感量为0.0001g。
分析步骤
试样溶液的制备
准确称取试样0.05g（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用适量甲醇-水溶液溶解并定容，混匀，经0.45μm滤膜过滤后备用。A.5.6.2
液相色谱参考条件
参考条件如下：
色谱柱：C1s反相色谱柱（250mmX4.6mm，5μm)或性能相当者；流动相：A相为甲醇，B相为水，梯度洗脱程序见表A.2；流速：1mL/min；
柱温：35℃；
进样量：5μL；
波长：273nm。
时间/min
洗脱梯度参考条件
甲醇/%
GB1886.378—2024
A.5.6.3测定
在参考色谱条件下，分别将系列标准溶液、试样溶液注入液相色谱仪中进行测定。以标准系列溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，由色谱软件工作站拟合标准曲线。试样溶液测得峰面积，根据标准曲线得到待测液中咖啡碱的质量浓度，各组分的参考保留时间和色谱图见图B.2。A.5.7
结果计算
试样中咖啡碱的质量分数(w)按式（A.3)计算：cxv
m×1000×1000
式中：
待测液中咖啡碱的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；试样溶液的体积，单位为毫升（mL)；试样的质量，单位为克（g)；
换算系数。
...（A.3)
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，保留2位有效数字。在重复性条件下获得咖啡碱的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。8
附录B
茶黄素标准溶液、咖啡碱标准溶液色谱图B.1茶黄素标准溶液（20μg/mL)液相色谱图见图B.1。45.0-
标引字母说明：
TF-3-G
茶黄素；
茶黄素-3-没食子酸酯；
TF-3'-G
茶黄素-3”-没食子酸酯；
茶黄素-3，3\-双没食子酸酯。图B.1
TF-3-G
TF-3'-G
茶黄素标准溶液（20μg/mL）液相色谱图咖啡碱标准溶液（20ug/mL)液相色谱图见图B.2。45
咖啡碱11.364
咖啡碱标准溶液（20μg/mL）液相色谱图15
GB1886.378—2024
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