本文件规定了海带[Saccharina japonica（Areschoug）C.E.Lane, C.Mayes, Druehl & G.W.Saun-ders, 2006]的学名与分类，主要形态结构特征、繁殖特性、细胞遗传学特性与分子遗传学特性，描述了相应的检测方法，同时规定了判定规则。 本文件适用于海带的种质检测与鉴定。

ICS.65.150
CCS B51
中华人民共和国国家标准
GB/T 205542024
代替GB/T20554—2006
2024-06-29发布
2025-01-01实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
本文件按照GB/T
定起草。
GB/T20554—2024
1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规本文件代替GB/T20554—2006《海带》，与GB/T20554—2006相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：
更改了学名与分类（见第1章和第4章，2006年版的第1章和第2章）更改了外部形态（见5.1，2006年版的3.1）；更改了细胞遗传学特性（见第7章，2006年版的5.1）；更改了分子遗传学特性（见第8章，2006年版的5.2）；更改了判定规则（见第10章，2006年版的6.4）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国农业农村部提出。本文件由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。
本文件起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、厦门大学、上海海洋大学、威海长青海洋科技股份有限公司、福建省连江县官坞海产开发有限公司、山东海之宝海洋科技有限公司。本文件主要起草人：汪文俊、张岩、刘涛、周志刚、鲁晓萍、梁洲瑞、王毓江、闫欣、肖露阳、毕燕会、常丽荣、李晓波、林枫、林哲龙、刘晓勇、王飞久。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：本文件于2006年首次发布为GB20554—2006,2017年转为推荐性标准GB/T20554—2006；一本次为第一次修订。
1范围
GB/T20554—2024
本文件规定了海带[Saccharina
japonica(Areschoug)C.E.Lane,C.Mayes,Druehl&.G.W.Saunders,20061的学名与分类，主要形态结构特征、繁殖特性、细胞遗传学特性与分子遗传学特性，描述了相应的检测方法，同时规定了判定规则。本文件适用于海带的种质检测与鉴定。规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
孢子体sporophyte
海带生活史中具二倍数染色体的藻体。注：成熟时形成孢子囊并放散孢子。3.2
配子体gametophyte
海带生活史中由胚孢子萌发形成的具单倍数染色体的藻体。注：分为雌配子体和雄配子体。3.3
体长length of sporophyte
孢子体全长，为假根、柄和叶片的长度之和。3.4
体宽widthof sporophyte
孢子体叶片最宽部分的宽度。
4学名与分类
4.1学名
海带Saccharina
4.2分类地位
japonica(Areschoug)C.E.Lane,C.Mayes,Druehl棕色藻门（Ochrophyta)，
ariaceae)，
褐藻纲(Phaeophyceae)，
海带属（Saccharina)。
&.G.W.Saunders,2006。
海带目(Laminariales)
海带科（Lamin-
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主要形态结构特征
5.1外部形态
孢子体分为固着器、柄和叶片三部分。固着器由多层双分枝的圆柱形假根组成。柄呈圆柱形或扁圆柱形，黄褐色至深褐色，成藻柄长3cm13cm。叶片为带状，褐色具光泽。基部幼时楔形，成藻阶段为近圆形。叶片沿中轴向边缘藻体厚度渐薄，叶片边缘相对中带部薄而软，有波褶；无纵沟或具纵沟，具纵沟藻体有两条浅的纵沟贯穿叶片的中部形成明显的中带部。成熟期在叶片表面形成浅黄色带状或片段凸起，即孢子囊群。野生海带成藻一般体长0.3m～1.8m，体宽4cm～20cm；养殖海带成藻体长m~9m,体宽20cm~90cm。孢子体外形见图1。12
标引序号说明：
固着器；
叶片；
纵沟：
5.2内部结构
5.2.1表皮
中带部：
一叶缘部；
体长：
体宽。
图1海带孢子体外形图
由个体小、排列紧密整齐、含粒状色素体的细胞组成，呈栅栏状，5.2.2皮层
外皮层细胞呈柱状，大小不等，排列不整齐。内皮层细胞大小相近，排列较整齐。5.2.3髓部
由喇叭丝和髓丝组成。
6繁殖特性
6.1生活史
为孢子体（2n）与配子体（n）不等世代交替型。海带生活史示意图见图2。2
6.2繁殖
6.2.1繁殖时间
孢子囊
减数分裂
单室然子素
游孢子
胚池子萌发
雄配子体初期
雌阳子体
多细胞幼苗
8细胞的幼苗
图2海带生活史
雄配子体
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野生海带，每年3月～6月及9月～12月。养殖海带，5月～8月，室内培养下可到12月。6.2.2无性繁殖
孢子体产生单室孢子囊群形成游孢子。游孢子为单细胞，梨形，长6.9μm～8.2um,宽
4.1μm~5.5μm,具两条侧生不等长鞭毛，长鞭毛长17.8μm~19.6μm,短鞭毛长6.9μm～8.2μm。游孢子的外形见图3。
10 μm
图3海带游孢子
6.2.3有性繁殖
卵式生殖方式。雌配子体产生卵囊，每个卵囊产生1个黄褐色卵。卵成熟后排出卵囊并黏附在卵囊外壁上，卵圆形，直径8μm～10um。雄配子体产生精子囊，每个精子囊产生1个梨形精子。精子长4.4μm6.2μm,宽2.7μm~3.4μm,具两条侧生不等长鞭毛，短鞭毛长13.7μm16μum,长鞭毛长16μum～19μm。精子(n）与卵(n）结合生成合子(2n)。海带雌、雄配子体外形见图4。GB/T20554—2024
7细胞遗传学特性
10 μm
染色体数n=31,2n=62。
8分子遗传学特性
雌配子体
b）雄配子体
图4海带雌配子体和雄配子体
线粒体coI基因片段参考序列（609bp)10 μm
AGGTGTTCTT GGAACAGCAA TGTCTGTTCT TATTCGTTTG CAATTGGCCA GTCCTGGAAA 60TCAATTTTTAGGGGGTAATCACCAATTATACAATGTTATTGTAACTGCGCATGCTTTCTT 120AATGATTTTT TTTATGGTTA TGCCAATTCT TATTGGTGGGTTTGGAAATTGGTTTGTACC 180TTTAATGATT GGTGCTCCTG ATATGGCTTT TCCCCGTATG AATAACATTA GTTTTTGGTT240ACTACCTCCC TCITTAATIT TGCI\ICTAGC GTCCTCGTIG GTAGAATCTG GAGCTGGTAC 300AGGTTGGACA GTGTACCCAC CTCTTAGTGG TATTCAGGCA CACTCAGGAC CTTCTGTTGA360CTTAGCTATA TTTAGTCTTC ATCTTTCGGG TGCTGCTTCT ATTTTAGGGGCTATAAACTT 420TATTACAACAATTTTTAATATGAGAGCACCCGGTATGACGATGGATAGATTGCCCCTTTT480TGTATGGTCT GTCTTAATAA CAGCGTTCTT ATTACTGTTA TCACTTCCTG TTTTAGCAGG 540TGGTATTACAATGCTATTAACAGATAGGAAIITTAATACTACTIITT1TGATCCGGCCGG600TGGTGGTGA 609
种 内K2P(Kimura
检测方法
主要形态结构特征
9.1.1外部形态
2-parameter）遗传距离应小于2%。将孢子体平展，在自然光下，采用目视法检测。4
9.1.2内部结构
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取待检测部位的组织，厚度0.5mm1mm,滴入适量海水，盖上盖玻片，采用显微镜检测。9.2
繁殖特性
繁殖时间
以孢子体产生孢子囊群的时间判定为繁殖时间。孢子囊群在充足光线下肉眼观察。无性繁殖与有性繁殖
游孢子、雌配子体、雄配子体、卵及精子的形态采用显微镜检测。9.3细胞遗传学特性
按照附录A的方法检测。
分子遗传学特性
按照附录B的方法检测。
判定规则
当检测结果符合第5章要求时，判定为该物种10.1
10.2当出现下列情况时，应增加检测其他章节要求内容，依据检测结果对物种进行综合判定：第5章无法进行检测或准确判定时，增加检测第7章或第8章的内容；a)
第三方提出要求检测第6章全部或部分内容时；b)
全项检测时。
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A.1溶液的配制
A.1.1秋水仙素溶液
附录A
（规范性）
海带细胞遗传学特性检测
取0.1g秋水仙素，用10mL蒸馏水配成1%的原液，2℃~8℃避光保存，在2周内使用，使用时用蒸馏水按比例稀释至所需浓度。A.1.2卡诺固定液
取冰乙酸和无水乙醇按体积比1：3倒入预先准备好的溶液瓶中，用玻璃棒轻轻搅动至均匀即可，常温避光保存，在2周内使用。
A.1.3混合酶解液
纤维素酶：果胶酶：离析酶：鲍鱼酶=2：1：1:1.5。A.1.4DAPI染液wwW.bzxz.Net
将4’，6-二胖基-2-苯基吲哚（4'，6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)5mg/mL的母液，用磷酸盐缓冲液（PBS)(pH=7.0）一20℃避光储存，工作液于4℃避光储存，在2周内使用。A.2染色体样品制备
干粉用蒸馏水溶解配制成
按体积比1：1000稀释成工作液。母液于取适量待测海带材料，用灭菌海水清洗2次～3次，孢子体用吸水纸吸取表面水分，配子体离心除去多余水分，加入0.2%的秋水仙素振荡摇匀，4℃处理6h～12h。离心取配子体沉淀，抱子体材料直接用镊子取出，加入卡诺固定液振荡摇匀之后，4℃处理24h以上，蒸馏水清洗3次～5次，每次2min。离心取配子体沉淀，孢子体材料直接用镊子取出，放入离心管并加入适量混合酶液，在37℃摇床上于200r/min酶解18h，用70%的乙醇终止酶解反应，用蒸馏水清洗酶解产物3次～4次，加入适量4℃保存的冰乙酸，振荡混匀，观察酶解产物是否均匀，取少量酶解产物滴片，自然晾干。A.3染色与观察
取携带有染色体的自然晾干载玻片，加入15pLDAPI染色15min后，在荧光显微镜（物镜100倍）下观察，拍照。
B.1总DNA提取
附录B
(规范性）
海带分子遗传学特性检测
取适量海带藻体，采用酚-三氯甲烷抽提法或使用试剂盒提取总DNA，B.2引物序列
COI-F:5'-TACATTGTATTTAATCTTTGGAGGTTTTTC-3'。COI-R:5'-AAATAAATGCTGATACAATACCGGA-3'。B.3扩增与测序
GB/T20554—2024
PCR反应体系：10 mmol/LTris-HCl,pH8.3,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2,TaqDNA聚合酶（polymerase)1U,4种dNTP各0.2mmol/L，上下游引物各0.5μmol/L，模板DNA5ng，用双蒸馏水补充至20μL。
PCR扩增程序：94℃预变性5min;94℃5 min。
40s,60℃
PCR产物经琼脂糖凝胶电泳、回收纯化后进行双向测序。B.4遗传距离分析
利用Kimura两参数模型（Kimura距离。
40s,72℃60s,30个循环；72℃，延伸2-parameter,K2P)计算检测样品序列与参考序列间的遗传
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