本文件规定了医疗器械在主要按照ISO 10993（所有部分）的一个或多个部分规定的生物学系统进行试验时所要遵循的样品制备和参照材料选择的要求, 并给出程序指南。 本文件适用于: --试验样品选择； --医疗器械上代表性部分的选取； --试验样品制备； --试验对照； --参照材料的选择和要求；--浸提液制备。 本文件不适用于活体细胞，但能适用于含活细胞的组合产品中的材料或医疗器械组分。 用于化学表征的浸提见ISO 10993-18。 本文件第7章、第8章、第9章、第10章［10.3.5和10.3.11 b）除外］和第11章适用于进行化学表征的浸提，附录C中C.1～C.4给出的信息也可能是相关的。

ICS11.100.20
CCSC30
中华人民共和国国家标准
GB/T16886.12—2023/ISO10993-12:2021代替GB/T16886.12-—2017
医疗器械生物学评价
第12部分：样品制备与参照材料Biological evaluation of medical devices-Part 12: Sample preparation and reference materials（ISO10993-12:2021.IDT）
2023-11-27发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-12-01实施
GB/T16886.12-—2023/ISO10993-12:2021前言
规范性引用文件
术语和定义
通用要求
总体要求
生物安全性试验用RM的认证
RM作为试验对照的应用
试验样品选择
试验样品与RM制备
器械代表性部分的选择
样品浸提液制备
总体要求
浸提容器
浸提条件和方法
原位聚合材料的浸提条件
11记录
附录A（资料性）
附录B（资料性）
附录C（资料性）
附录D（资料性）
参考文献
试验对照
试验样品制备和样品选择的基本原则与规范试验样品浸提原则
聚合材料生物学评价的极限浸提8
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则起草。
GB/T16886.12—2023/ISO10993-12:2021第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件是GB/T（Z）16886《医疗器械生物学评价》的第12部分。GB/T（Z）16886已经发布了以下部分：
第1部分：风险管理过程中的评价与试验；第2部分：动物福利要求；
第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验；第4部分：与血液相互作用试验选择；第5部分：体外细胞毒性试验；
第6部分：植入后局部反应试验：第7部分：环氧乙烷灭菌残留量：一第9部分：潜在降解产物的定性和定量框架；一第10部分：刺激与皮肤致敏试验；第11部分：全身毒性试验；
第12部分：样品制备与参照材料；一第13部分：聚合物医疗器械降解产物的定性与定量；第14部分：陶瓷降解产物的定性与定量；第15部分：金属与合金降解产物的定性与定量：第16部分：降解产物与可沥滤物毒代动力学研究设计：第17部分：可沥滤物允许限量的建立；第18部分：风险管理过程中医疗器械材料的化学表征；一第19部分：材料物理化学、形态学和表面特性表征；第20部分：医疗器械免疫毒理学试验原则和方法；第22部分：纳米材料指南：
第23部分：刺激试验
本文件代替GB/T16886.12一2017《医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照材料》，与GB/T16886.122017相比，除结构调整和缩辑性改动外，主要技术变化如下：a）
更改了“范围”，仅涵盖生物学评价试验的浸提（见第1章，2017年版的第1章）：删除了“加速浸提”“模拟使用浸提”的术语和定义（见2017年版的3.1和3.14），更改了“加严b)
浸提”\极根浸提”*可浸提物”“可沥滤物”的定义（见3.3、3.4、3.7、3.9,2017年版的3.4.3.53.8和3.10)：
c）更改了浸提条件列项（见10.3.1，2017年版的10.3.1）。本文件等同采用ISO10993-12：2021《医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照材料》。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家药品监督管理局提出。本文件由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会（SAC/TC248）归口。本文件起草单位：山东省医疗器械和药品包装检验研究院、四川大学。GB/T16886.12—2023/IS010993-12:2021本文件主要起草人：梁洁、孙晓霞、孙令骁、袁瞰、屈秋锦，本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：2000年首次发布为GB/T16886.12一2000，2005年第一次修订，2017年第二次修订；—本次为第三次修订。
GB/T16886.12—2023/ISO10993-12:2021样品制备方法同时适用于生物学评价方法和被评价的材料，这是重要的。每种生物学试验方法均需规定材料、浸提溶剂和浸提条件的选择本文件尽可能以现行的国家标准、国际标准和法规为基础GB/T（Z）16886《医疗器械生物学评价》拟由二十一个部分构成。第1部分：风险管理过程中的评价与试验。目的是保护人类免于因使用医疗器械所产生的潜在生物学风险，并在风险管理过程中描述医疗器械生物学评价，将其作为医疗器械总体评价和开发过程的一个组成部分。
一第2部分：动物福利要求。目的是最大限度利用科学合理的非动物试验，确保用于评价医疗器械所用材料的生物学性能动物试验符合认可的伦理和科学原则一第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验。目的是为已确定具有潜在的遗传毒性、致癌性或生殖毒性的医疗器械提供评价指南和方法。第4部分：与血液相互作用试验选择。目的是为医疗器械与血液相互作用评价提供通用要求。
一第5部分：体外细胞毒性试验。目的是为评估医疗器械体外细胞毒性提供试验方法第6部分：植人后局部反应试验。目的是为评估医疗器械所用生物材料植人后局部反应提供试验方法。
第7部分：环氧乙烧灭菌残留量。自的是为经环氧乙烷（EO）灭菌的单件医疗器械上EO及2-氯乙醇（ECH)残留物的允许限量、EO及ECH残留量提供检测步骤以及确定器械是否可以出厂提供检测方法。
一第9部分：潜在降解产物的定性和定量框架。目的是为系统评价医疗器械潜在的和已观察到的降解以及降解研究的设计与实施提供基本原则一第10部分：刺激与皮肤致敏试验。目的是为医疗器械及其组成材料潜在刺激和皮肤致敏提供评价步骤。
一第11部分：全身毒性试验。目的是为评价医疗器械材料导致潜在不良全身反应时提供试验步骤指南。
第12部分：样品制备与参照材料。目的是为医疗器械生物学评价中样品制备方法和参照材料提供选择指南。
第13部分：聚合物医疗器械降解产物的定性与定量。自的是为用于临床的成品聚合物医疗器械模拟环境的降解产物定性与定量试验设计提供通用要求。第14部分：陶瓷降解产物的定性与定量。目的是为从陶瓷材料获取降解产物定量用的溶液提供方法。
一第15部分：金属与合金降解产物的定性与定量。目的是为金属医疗器械或可供临床使用的相应材料样品的降解产物提供定性与定量试验设计的通用要求。第16部分：降解产物与可沥滤物毒代动力学研究设计。目的是提供与医疗器械相关的设计和实施毒代动力学研究的原则。
第17部分：可沥滤物允许限量的建立。目的是为医疗器械可沥滤物允许限量的建立提供方法。
GB/T16886.12-—2023/IS010993-12:2021一第18部分：风险管理过程中医疗器械材料的化学表征。目的是为医疗器械成分的定性和定量（必要时）以识别生物危险以及估计和控制材料成分中的生物学风险提供框架。一第19部分：材料物理化学、形态学和表面特性表征。目的是识别与评价最终医疗器械材料的物理特性，如物理化学、形态学和表面特性（PMT）的各种参数和试验方法。一第20部分：医疗器械免疫毒理学试验原则和方法。目的是为医疗器械潜在免疫毒性方面提供免疫毒理学综述以及为检验不同类型医疗器械的免疫毒性提供方法指南。第22部分：纳米材料指南。目的是为包含、产生或由纳米材料组成的医疗器械生物学评价提供指南。
一一第23部分：刺激试验。目的是为医疗器械及其组成材料潜在刺激提供评价步骤。N
1范围
GB/T16886.12—2023/ISO10993-12:2021医疗器械生物学评价
第12部分：样品制备与参照材料本文件规定了医疗器械在主要按照ISO10993（所有部分）的一个或多个部分规定的生物学系统进行试验时所要遵循的样品制备和参照材料选择的要求，并给出程序指南。本文件适用于：
试验样品选择；下载标准就来标准下载网
一医疗器械上代表性部分的选取：试验样品制备：
一试验对照；
一参照材料的选择和要求；
一浸提液制备。
本文件不适用于活体细胞，但能适用于含活细胞的组合产品中的材料或医疗器械组分。用于化学表征的浸提见IS010993-18。本文件第7章、第8章，第9章、第10章[10.3.5和10.3.11b)除外和第11章适用于进行化学表征的浸提，附录C中C.1～C.4给出的信息也可能是相关的。2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用手本文件。ISO和IEC维护的用于标准化的术语数据库，地址如下：ISO在线浏览平台：http：//www.iso.org/obp；IEC电子百科：http：//www.electropedia.org。3.1
不含试验材料的浸提介质，其在浸提过程中置于与试验样品同样的容器中并采用同样的浸提条件。注：“空白”的目的是评价浸提容器、浸提介质和浸提过程可能产生的干扰作用。3.2
certified referencematerialCRM有证标准样品
采用计量学上有效程序测定的一种或多种规定特性的参照材料（RM），并附有证书提供规定特性值及其不确定度和计量溯源性的陈述注1：值的概念包括标称特性或定性属性，如特征或序列。该特性的不确定度可能会用概率或置信水平表示。注2：RM生产和认定所采用的计量学上有效程序已在ISO17034和ISO导则35中给出。注3：ISOGuide31给出了证书内容的编写要求，1
GB/T16886.12-—2023/ISO10993-12:2021注4:ISO/IECGuide99:2007有类似定义（5.14)。[来源：ISOGuide30:2015.2.1.2]3.3
加严浸提
exaggerated extraction
与临床使用条件下相比，预期会导致更多或更大量化学成分释放的浸提。注，重要的是确保加严浸提不会导致所浸提材料产生化学变化，3.4
极限浸提
exhaustiveextraction
进行多步骤浸提，直到在后续浸提步骤中通过重量分析法（或通过其他方法实现）测得的浸提物质的量小于首次浸提测得量的10%的浸提注，对残留物完全回收是不可能的，所以用以上极限没提的定义见附录D3.5
experimentalcontrol
试验对照
具有明确反应特性的物质，用于特定的试验系统以评价试验系统的反应是否具有重现性和适宜性。3.6
浸提液
extract
由试验样品或对照样品浸提而得的液体3.7
extractablesubstance
可浸提物
某一医疗器械或材料用浸提溶剂和/或在至少与预期临床使用相同或更严格的条件下浸提时，能释放出的物质。
均一性
homogeneity
材料的化学和物理组成的一致性，以及对生物学终点反应的均勾性。注：不管被没提试验样品的材料的批或批次如何，如果某一RM对特定试验的生物学反应落在了该试验所规定的不确定度范围内，则它被认为具有均一性，3.9
可沥滤物
leachable substance
临床使用过程中从医疗器械或材料释放的物质。3.10
阴性对照
negativecontrol
经充分表征的材料和/或物质，当用特定试验方法评估时，显示该试验系统适宜产生可重复的、适当阴性的、无反应的或最小的应答。注：在实际操作中，阴性对照是RM.但可能包括空白、没提介质/溶剂3.11
阳性对照
positive control
经充分表征的材料和/或物质，当用特定试验方法评估时，显示该试验系统适宜产生可重复的、适当阳性的，或反应性的应答。
+referencematerial;RM
参照材料
具有一种或多种规定特性足够均匀且稳定，并已确定其符合测量过程的预期用途的材料。注1：RM是一个通用术语。
注2：“特性”可能是定量的或定性的，例如物质或物种的特征。GB/T16886.12—2023/IS010993-12:2021注3：“用途”可能包括测量系统的校准、测量程序的评估、给其他材料赋值和质量控制。注4：ISO/IEC.Guide99：2007有类似的定义（5.13），但限定\测量\术语仅用于定量的值。但是，ISO/IECGuide992007.5.13（VIM）的注3明确包括定性特性，称作\标称特性”。注5：实验室要证明模拟使用浸提是在能够适当代表预期用途的条件下进行的。模拟产品使用是假设医疗器械被分配到最严昔接触类型,使用时考虑接触时间、接触的组织和接触温度。［来源：ISOGuide30：2015，2.1.1.有修改]3.13
稳定性
stability
当材料在规定条件下贮存时，在特定时间段内保持特定属性值在规定限度内的特性。注：见（国际理论和应用化学会（IUPAC)）分析术语纲要》。3.14
试验样品testsample
用于生物学评价试验的医疗器械、组件或材料（或用相同方法生产和加工的具有代表性的样品）、或浸提液或其中部分。
4通用要求
识别医疗器械相关的危险（源）并估计风险时·需在试验设计和样品制备中考虑加工过程的变化或对加工过程控制不充分引起的危险（源），如ISO14971中所述。应特别注意材料添加剂，非预期的基础材料杂质以及加工过程中的残留物，如微量元素、清洗和消毒剂。ISO10993（所有部分）中描述了许多不同的生物学试验系统。因此，应按照各部分具体的标准以确保所推荐的方法是否适用于特定的试验系统。在生物学评价中，应使用试验对照来确认试验程序或进行材料间试验结果比对，或以上两种方式。应根据特定试验的规定，使用阴性对照、空白或阳性对照，或以上3种。注：同一类型的对照适用于不同的试验并能与其他已确认过的材料和试验方法形成交叉对照。选择试验对照的其他指南见附录A。体内试验阳性对照的应用可能会受到动物福利法规的影响。5RM
5.1总体要求
RM由各自的实验室来建立。其化学、物理学和生物学表征的程度由各自的实验室确定。可用市售商品作RM
注：见ISOGuide35。
选择纯度高、经关键性表征、符合预期用途且易得的材料作为CRM。其关键的化学、物理和生物学表征应经3个或3个以上实验室的协作标定来确定，再由销售商提供给研究人员。使用者最好能得到RM或CRM供应商的承诺，声明这些材料至少在5年内有供应。其次但不太理想的选择是使原始RM或CRM公布公开配方”，即公布源材料和详细的加工过程，以确保RM批次间的均一性。
5.2生物安全性试验用RM的认证
RM认定是在规定的试验条件下，为材料的生物学反应赋值（数值或量值）的程序，以确保其在实验5
GB/T16886.12-—2023/ISO10993-12:2021室内或实验室之间（或以上两种情况）反应具有再现性。与该材料有关的生物学反应范围应通过实验室试验来确定。
注：见ISO17034。
RM供应商应对材料进行认证。供应商确定对其进行化学和物理学表征的程度。使用RM的各实验室应识别RM所需的生物学表征，以使RM符合特定试验或程序的要求。市场上可买到的材料可用作RM，前提是它们经过认证和认定RM认证是在规定的试验条件下，为材料的生物学反应赋值（数值或量值）的程序。这一过程以出具证书的形式对该材料的特定反应的试验和结果加以确认。应通过实验室间的试验来确定材料的生物学反应。
RM作为试验对照的应用
RM或CRM应作为对照材料用于生物学试验，以出现重现性反应（即阳性或阴性，或以上两种反应）来证实试验程序的适用性。用于这种用途的任何材料在每一预期使用的生物学试验程序中均应进行表征。一种经表征并认证适用于某种参照试验方法或反应（如迟发型超敏试验）的材料不应在未经确认前用作其他试验（如细胞毒性试验）的RM。注：RM的应用有利于对实验室之间得出的反应进行比较，并有助于对各个实验室内测试性能的可重现性进行评估。为了比较生物学反应，RM最好有一个生物学反应范围，如轻微、中度或重度反应。用作试验对照的RM应符合制造商和检测实验室所建立的质量保证程序。RM应根据来源、制造商、等级和类型进行识别。按照第8章制备RM。RM用作试验对照时其材料类别应与试验样品相同，即聚合物、陶瓷、金属和胶体等。但是，纯化学品可用作基于机理研究的试验程序的试验对照，如遗传毒性和免疫迟发型超敏反应。7试验样品选择
应对最终产品、取自最终产品中有代表性的样品或与最终产品以相同的工艺过程制得的材料（见ISO10993-1)，或者制备的其中任何一种适合的浸提液进行测试。试验样品的选择应予以论证。注：对于在原位固化的材料，可能需要不同的试验样品，代表已固化材料和未固化状态的材料。对于具有潜在的毒性降解物和残留物的可吸收材料，宜考虑对中间产物进行测试。当需要用浸提液进行试验时，采用相同的试验样品选择程序。8试验样品与RM制备
制备试验样品与RM时应谨防污染。来自制造过程的任何残留物、有意或无意的添加剂或污染物均应视为医疗器械、医疗器械部件/组件或代表性样品的构成部分。注：其他制备指南见附录B
一一如对试验程序适用，对自灭菌医疗器械的试验样品和RM，应采取无菌操作。一如对试验程序适用，清洁，无菌和已消毒的试验样品应按照制造商推荐的方法处理，并采取无菌操作。
在试验样品选择和制备时应考虑清洗过程和清洗剂的影响。对于取自不需要无菌使用器械的试验样品，应按供应状态使用并在试验样品制备过程中采用无菌操作。：如果某一试验程序（如细胞毒性试验）需要无菌试验样品，应考虑灭菌或再灭菌过程对试验样品4
和RM的影响。
GB/T16886.12—2023/IS010993-12:2021试验样品和RM需要分割成如10.3.3中描述的小块时，应考虑原先没有暴露的表面（如内腔或切面的影响。将医疗器械切割成试验用的有代表性部分的工具，使用时应被清洁以免导致污染。此外，应注意工具本身不会污染器械。9器械代表性部分的选择
9.1如果医疗器械不能整体用于试验时，应选取需要测试的最终产品中各种材料有代表性的部分按比例组合成试验样品。
一有表面涂层器械的试验样品应包括涂层材料和基质材料，即使基质材料不与组织接触。一与病人接触的器部件在制造过程如使用了黏合剂、射频（RF）密封件或溶剂密封件，试验样品则应包括黏接和/或密封处有代表性的部分。9.2复合材料应以最终材料进行试验。9.3当一个器械上有不同的材料时，在选择试验样品时应考虑其潜在的协同作用和相互作用。9.4选择的试验样品应能使器械已知有潜在生物学反应的组件最大限度地与试验系统接触9.5如果可能，医疗器械中不与患者接触的部件宜从试验样品浸提物中被物理排除，或在计算浸提比例时排除其表面积。如果不可能，则应证明浸提比例是否合理。确保选择的浸提介质体积能覆盖所有的接触部件。
宜考虑与临床医生和使用者表面接触的材料，这些材料不包括那些在其他市售产品中通常使用并具有相似接触性质的材料[见GB/T16886.1—2022中5.2.2a)]。9.6具有不同组织接触类型或持续时间的医疗器械组件可能需要分别浸提和试验。10样品浸提液制备
总体要求
如果试验程序要求用器械的浸提液，所用浸提介质和浸提条件应与最终产品的属性和使用以及试验目的相适应，如危险识别、风险估计和风险评估。在选择浸提条件时应考虑器械材料的物理化学特性、可沥滤物或残留物（见ISO10993-18和ISO/TS10993-19）。关于纳米材料或包含纳米结构的材料试验的样品制备更多的信息见ISO/TR10993-22注：其他样品浸提指南见附录C。10.2浸提容器
浸提应在洁净、化学情性、封闭、死腔容积为最小的容器中进行。为确保浸提容器不干扰试验样品浸提液，浸提容器应为硼硅酸盐玻璃试管，其密封盖内衬为性材料（如聚四氟乙烯），或特定材料和/或浸提程序所需的其他情性浸提容器。10.3浸提条件和方法
10.3.1浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上，在多数情况下为产品使用的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提（见C.5）：a）（37±1)℃.（24±2)h;
b）（37±1)℃.(72±2)h;
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