本文件描述了高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)测定皮革、毛皮中烷基酚(壬基酚和辛基酚)和烷基酚聚氧乙烯醚(壬基酚聚氧乙烯醚和辛基酚聚氧乙烯醚)的试验方法。 本文件适用于皮革、毛皮及其制品中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定。 本文件亦适用于皮革、毛皮加工助剂中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定。 注：本文件规定的方法(间接法)与直接法所用的萃取溶剂不同，故两种方法的测试结果可能具有类似的趋势，但非绝对相同。

ICS59.140.30
CCSY46
中华人國民共和国国家标准國
GB/T33285.2—2024
代替GB/T33285—2016
皮革和毛皮
烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的
第2部分：间接法
测定　第
Leather and fur-Determination of alkylphenols and ethoxylated alkylphenols-Part 2:Indirect method
(ISO 18218-2:2019,Leather—Determination of ethoxylated alkylphenols-Part 2:Indirect method.MOD)
2024-03-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-10-01 实施
GB/T33285.2—2024
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件是GB/T33285《皮革和毛皮烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定》的第2部分。GB/T33285已经发布了以下部分：
一第2部分：间接法。
本文件代替GB/T33285一2016《皮革和毛皮化学试验壬基酚及壬基酚聚氧乙烯醚含量的测定》，与GB/T33285一2016相比，除结构性调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：一增加了标准可测定的烷基酚聚氧乙烯醚的种类，扩大了标准的适用范围（见第1章，2016年版的第1章）；
一一细化了原理（见第4章，2016年版的第3章）：一增加了烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚标准品的种类（见表1）；一更改了烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚溶液的质量浓度（见5.11～5.14，2016年版的4.10、4.11）；一增加了内标溶液（见5.15、5.16）；删除了“油浴锅”“移液管”“平底烧瓶”和“玻璃纤维过滤器”等仪器设备（见2016年版的第5章）；
一增加了“快速定量滤纸”和“高效液相色谱仪”等材料和仪器设备（见第5章、第6章）；一更改“具塞锥形瓶，100mL”为“萃取瓶，可密封”（见6.8,2016年版的5.2）；一更改了萃取过程中硫酸钠的加入量，增加了对超声波发生器的温度控制要求及GC-MS分析时内标溶液的加入（见8.1，2016年版的7.1）；一增加了对皮革或毛皮加工助剂样液的制备过程（见8.2）；更改了空白试验（见8.3，2016年版的7.7）；一增加了高效液相色谱分析方法（见8.4.1.1）；更改了烷基酚测定时正已烷的加入量，明确了硫酸钠的使用量，增加了对两相分离效果不好时的处理说明（见8.4.1.2，2016年版的7.2）；更改了碘化铝的用量和回流时间（见8.4.2.2，2016年版的7.3）；一细化了标准工作曲线的绘制（见8.6，2016年版的7.6）；一更改了计算公式，增加了内标法的计算公式（见9.2～9.3，2016年版的7.8）；更改“检测限”为“定量限”，并更改了回收率要求（见10.1和10.3，2016年版的7.9和第8章）；更改了试验报告的内容（见第11章，2016年版的第9章）。本文件修改采用IS018218-2:2019《皮革烷基酚聚氧乙烯醚的测定第2部分：间接法》。本文件与IS018218-2:2019相比，在结构上有较多调整。两个文件之间的结构编号变化对照一览表见附录A。
本文件与IS018218-2:2019相比，存在较多技术差异，在所涉及的条款的外侧页边空白位置用垂直单线（1）进行了标示。这些技术差异及其原因一览表见附录B。本文件做了下列编辑性改动：
更改了标准名称；
一增加了部分化学物质的化学式；一将NPEO，和OPEO1统一更改为NPEO和OPEO；GB/T
33285.2—2024
删除了正已烷的注；
一增加了部分内容的章条编号；一一更改了HPLC中检测器的说明，增加了DAD检测器的定性波长；一一增加了对GC及MS参数的说明：一一删除了GC色谱柱的举例。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国皮革工业标准化技术委员会(SAC/TC252)归口，
本文件起草单位：浙江方圆皮革轻纺检测认证有限公司、陕西科技大学、江苏中纺联检验技术服务有限公司、中轻检验认证有限公司、中国皮革制鞋研究院有限公司。本文件主要起草人：黄新霞、强涛涛、王楷艳、桑军、李刚、夏东琴、惠永久、李红霞、洪新球，本文件所代替文件的历次版本发布情况为：—GB/T
33285—2016。
GB/T33285.2—2024
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO）主要是指壬基酚聚氧乙烯醚(NPEO）和辛基酚聚氧乙烯醚(OPEO)，其具有良好的润湿、渗透、乳化、分散、增溶和洗涤作用，在皮革行业应用广泛。烷基酚（AP）是APEO在厌氧条件下的重要降解产物，具有比母体更强的毒性和内分泌丁扰能力，于1996年被欧盟列为“内分泌干扰物”。欧盟颁布的2003/53/EC指令对APEO的使用、流通和排放均做出了明确限制，其他国外相关法律法规也对其使用做出了明确的限量要求。随着皮革、毛皮行业的不断发展，人们对其产品中可能含有的烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚越来越关注，皮革、毛皮中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚含量的测定也逐渐成为产品质量控制的重点。GB/T33285旨在为皮革和毛皮中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定提供依据，拟由两个部分构成。一一第1部分：直接法。目的在于确立直接测定皮革和毛皮中AP及APEO的试验方法。一第2部分：间接法。目的在于确立先将APEO裂解为AP，再通过检测AP含量而测定APEO的试验方法。
目前我国皮革和毛皮中AP和APEO的测定主要采用间接法，即先将APEO裂解为AP，通过检测AP含量而测定APEO的含量，仅涉及皮革和毛皮中壬基酚(NP）和王基酚聚氧乙烯醚(NPEO）的测定，并不涉及辛基酚(OP）及辛基酚聚氧乙烯醚(OPEO）的测定，并且在萃取方法、分析方法及结果计算等方面均与现行国际标准IS018218-2：2019存在较大技术差异。鉴于此，确有必要对其进行修改完善，以不断适应国内外产品的新变化及产品测试的新需求，提高与国际标准的一致性程度，确保标准与行业发展相协调。
1范围
GB/T33285.2—2024
皮革和毛皮烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定第2部分：间接法
本文件描述了高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS）测定皮革、毛皮中烷基酚（壬基酚和辛基酚）和烷基酚聚氧乙烯醚（王基酚聚氧乙烯醚和辛基酚聚氧乙烯醚）的试验方法本文件适用于皮革、毛皮及其制品中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定。本文件亦适用于皮革、毛皮加工助剂中烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚的测定。注：本文件规定的方法（间接法与直接法所用的萃取溶剂不同，故两种方法的测试结果可能具有类似的趋势，但非绝对相同。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682
GB/T39364
2017,MOD)
QB/T1267
2002,MOD)
QB/T1272
分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，IS0
3696:1987,MOD)
皮革化学、物理、机械和色牢度试验取样部位（GB/T39364一2020，IS0毛皮化学、物理和机械、色牢度试验取样部位（QB/T
化学试验样品的准备（QB/T
1272—2012,IS0
皮革化学试验样品的准备（QB/T2716—2018，IS0QB/T2716
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
1267—2012,IS0
4044:2008，M0D）
4044:2008MOD
2418：
将皮革或毛皮试样在超声波发生器中用乙腈萃取，萃取液中的王基酚(NP）和/或辛基酚(OP）通过HPLC或GC-MS进行定量测定。
将皮革或毛皮加工助剂在乙睛中溶解，溶液中的NP和/或OP通过HPLC或GC-MS进行定量测定。试样萃取液或加工助剂样液中的王基酚聚氧乙烯醚(NPEO）和辛基酚聚氧乙烯醚(OPEO)，先用碘化铝作为裂解剂将其转化为NP和OP，然后再通过HPLC或GC-MS进行定量测定，最后计算得到试样中的NPEO和OPEO的含量。
5试剂和材料
5.1除特殊规定外，所用试剂均为分析纯。试验用水至少应符合GB/T6682中三级水的规定。GB/T33285.2—2024
乙腈，色谱纯。
5.3正已烷，色谱纯。
5.4碘化铝，市售或按附录C规定的方法进行制备。5.5硫酸(H2SO4）溶液，0.5mol/L。5.6石
硫代硫酸钠(Na2 S2O3）溶液，室温下的饱和溶液。硫酸镁(MgSO4）。
硫酸钠(Na2SO4)，作为分析用干燥剂。若不是无水粉末，可在800℃下干燥4h后保存。也可使
用其他合适的干燥剂。
5.9氯化钠(NaCI）溶液，室温下的饱和溶液。5.10烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚标准物质，纯度≥98%，见表1。表1烷基酚及烷基酚聚氧乙烯醚标准物质物质名称
4-王基酚（同分异构体的混合物）叔辛基苯酚
王基酚聚氧乙烯醚
辛基酚聚氧乙烯醚
化学式
CgI1g—CgI4—0II
CgH17-CsH4—0H
CgH1g—CcH4—（0OC2H4），OH（平均聚合度为9）CsHz-CH4—（0C2H4），OH（平均聚合度为10）缩写词
CAS号
84852-15-3
140-66-9
9016-45-9
9002-93-1
注：王基酚聚氧乙烯醚和辛基酚聚氧乙烯醚有多种CAS号，使用本文件时使用表中所列CAS号对应的物质。5.11NP标准溶液，1000mg/L，溶于正已烷中。5.12OP标准溶液，1000mg/L，溶于正已烷中。5.13OPEO标准溶液，2000mg/L，溶于乙睛中。绘制标准工作曲线时用乙睛（5.2)稀释该溶液。5.14NPEO标准溶液，4000mg/L，溶于乙睛中。绘制标准工作曲线时用乙睛（5.2)稀释该溶液。5.154n-壬基酚（4n-NP,CAS号104-40-5）内标溶液1，1000mg/L，溶于乙腈中。4n-NP溶液用于GC-MS分析时的内标溶液。用于制作内标工作曲线时用乙睛(5.2)稀释该溶液5.164n-王基酚（4n-NP,CAS号104-40-5）内标溶液2，1000mg/L，溶于正已烷中。4n-NP溶液用于GC-MS分析时的内标溶液。用于制作内标工作曲线时用正已烷(5.3)稀释该溶液。5.17快速定量滤纸。
6仪器和设备
6.1分析天平，分度值为0.1mg。6.2超声波发生器，40kHz。
6.3分液漏斗，150mL。
6.4旋转蒸发仪，带有恒温和真空系统。6.5膜式过滤器，孔径0.45μm。6.6高效液相色谱仪，带有二极管阵列检测器(DAD)或荧光检测器(FLD)。6.7气相色谱仪，带有质量选择检测器(MSD)。2
3萃取瓶，可密封。
7取样及试样的制备
7.1取样
的规定进行。
皮革按GB/T39364
毛皮按QB/T1267
的规定进行，取样过程中应避免毛被损失，保持毛被完好。GB/T33285.2—2024
如果不能从标准部位取样（如直接从鞋、服装上取样），在可利用面积内的任意部位取样，试样应具有代表性，并在试验报告中注明。7.2试样的制备
皮革按QB/T2716bZxz.net
的规定进行。
毛皮按QB/T1272
8试验步骤
8.1试样萃取液的制备
的规定进行，试样需要连同毛被一起试验精确称取2.5g（精确至10mg）皮革或毛皮试样于萃取瓶（6.8）中，加入约3gNa2SO4（5.8）混合，然后准确加入50.0mL的乙睛（5.2），密封。对于GC-MS分析，应使用内标溶液。往萃取瓶中加入100μL的4n-NP内标溶液1（5.15），使其最终的质量浓度为2.0mg/L。
将萃取瓶置于超声波发生器（6.2）中在（50土5）℃下萃取（60土5）min，然后将萃取瓶冷却至室温。用快速定量滤纸（5.17）过滤除去皮革或毛皮试样及固体物，收集至少30mL的滤液用于分析。8.2加工助剂样液的制备
准确称取约0.5g（精确至10mg）的皮革或毛皮加工助剂于萃取瓶中，加入约2gMgSO4（5.7）混合。然后分次加入乙睛（每次加入约7mL，共加入3次），用玻璃棒搅拌使其溶解，溶解后用快速定量滤纸（5.17）过滤。若溶液中含有不溶物，用离心机分离。将滤液收集在50mL容量瓶中，并用乙睛定容。
对于GC-MS分析，应使用内标溶液。往萃取瓶中加入100μL的4n-NP内标溶液1(5.15），使其最终的质量浓度为2.0mg/L。
8.3空白试验
用适量的乙睛代替试样，用与试样完全相同的方法处理空白试验8.4测定
8.4.1NP和OP的测定
8.4.1.1HPLC分析
将试样萃取液（8.1)或加工助剂样液（8.2）用膜式过滤器（6.5)过滤后直接进行测定，试样萃取液中目标物的信号响应值应在标准工作曲线的浓度范围内。8.4.1.2GC-MS分析
移取10.0mL试样萃取液（8.1)或加工助剂样液（8.2）于分液漏斗（6.3）中，然后加入约20mL水GB/T33285.2—2024
(5.1）和1mLH2SO4溶液（5.5）。分次加入正已烷（每次加入约20mL，共加入2次）提取混合物，分离并收集有机相。然后用约30mL水洗涤正已烷提取物，弃去水相后用约5g的Na2SO4（5.8）对有机相进行脱水。然后通过旋转蒸发仪（6.4）在约50℃下除去有机溶剂，再准确加入10.0mL正已烷重新溶解残留物，用膜式过滤器（6.5)过滤后进行GC-MS测定，试样萃取液中NP及OP的响应值应在标准工作曲线的浓度范围内。若用正已烷处理后的有机相在分液漏斗中不能很好地分离出，可向分液漏斗中加入约30mL的NaCI溶液（5.9），振荡约30s后静置、分层。8.4.2NPEO和OPEO的测定
8.4.2.1碘化铝的制备
按附录C的规定进行，用于裂解NPEO和OPEO，碘化铝对空气和水极为敏感，若使用市售的固体碘化铝，可用二硫化碳将其溶解配制成质量浓度约为0.1g/mL的溶液。移取10mL该溶液于烧瓶中，先通过加热除去其中的二硫化碳，再加入试样萃取液（8.1)或加工助剂样液（8.2）。8.4.2.2NPEO和OPEO的裂解
在含有约1g碘化铝的烧瓶中准确加入10.0mL试样萃取液（8.1）或加工助剂样液（8.2），然后在(90土2）℃下继续回流（30土5）min。取出烧瓶，逐滴加入水（5.1），直至反应消退（无沸腾现象），然后加入约20mL水稀释，冷却至室温。将该混合液注入分液漏斗（6.3）中，用约20mL正已烷洗涤烧瓶，并将洗涤液转移至分液漏斗中。加入约1mL的H2SO4溶液（5.5）并振荡，分离收集有机相，并在水相中加入20mL正已烷进行二次提取，合并有机相。向有机相中加入2mLNa2S203溶液（5.6）振荡直至粉色（碘的颜色）消失，用约30mL水（5.1)洗涤有机相，分离有机相后，用约4gNa2SO4（5.8)干燥，然后用旋转蒸发仪在约50℃下蒸发去除有机溶剂。
若用正已烷处理后的有机相在分液漏斗中不能很好地分离出，可向分液漏斗中加入约30mL的NaCl溶液（5.9），振荡约30s后静置、分层。8.4.2.3测定分析
对于HPLC分析，准确加入10.0mL乙睛（5.2）重新溶解残留物（8.4.2.2），并通过膜式过滤器（6.5）过滤后用于分析；对于GC-MS分析，准确加入10.0mL正已烷（5.3）重新溶解残留物（8.4.2.2)，并通过膜式过滤器（6.5）过滤后用于分析。试样苯取液中NP及OP的响应值应在标准工作曲线的浓度范围内。
8.5色谱分析
NP和OP的检测可通过高效液相色谱仪（6.6)或气相色谱仪（6.7）进行，也可使用其他经过验证的方法。NP和OP的定量分析通过HPLC或GC-MS进行。使用GC-MS时，应使用适当的内标溶液(5.15或5.16）。
HPLC测定NP和OP时的仪器参数示例见附录D,HPLC色谱图见图D.1和图D.2。GC-MS测定NP和OP时的仪器参数示例见附录E，用于检测和定量的特征离子见表E.1,GC-MS色谱图见图E.2。
8.6标准工作曲线的绘制
8.6.1NP和OP标准工作曲线的绘制通过直接测量5个梯度水平（如1mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L无和20mg/L）的NP和OP溶
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。