本文件描述了纸、纸板和纸制品抗菌(抑菌)性能的测定方法，包括载体抗菌试验、抑菌环试验、振荡烧瓶试验、抑菌成分转移测定试验、高吸水材料抑菌性能试验和长效防霉性能试验。 本文件适用于纸、纸板和纸制品及其原材料。

ICS85.010
CCSY30
中华人民共和国国家标准
GB/T42702—2023
纸、纸板和纸制品
抗菌性能的测定
Paper,board and paper productsDetermination of antibacterial activity2023-05-23发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2023-12-01实施
GB/T42702—2023
本文件按照（GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构利起草规则》的规定起草。
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纸、纸板和纸制品抗菌性能的测定GB/T42702—2023
本文件描述了纸、纸板和纸制品抗菌（抑菌）性能的测定方法，包括载体抗菌试验、抑菌环试验、振荡烧瓶试验、抑菌成分转移测定试验、高吸水材料抑菌性能试验和长效防霉性能试验。本文件适用于纸、纸板和纸制品及其原材料。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注目期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
WS/T650—2019
术语和定义
抗菌和抑菌效果评价方法
下列术语和定义适用于本文件。3.1
有antibacterial
采用化学或物理方法杀灭或妨碍细菌生长繁殖，可减少其数量以及活性的过程。3.2
有antibacterial
采用化学或物理方法抑制或妨得细菌生长繁殖及其活性的过程。测定方法和试验菌的选择
测定方法的选择
4.1.1普通样品
根据样品性能及使用方式选择合适的测定方法。对于含有溶出性抗菌成分的样品·或纤维原料（含有非溶出性抗菌成分)具有抗菌功能且吸水性较好的样品.可选择载体抗菌试验（第5章）进行定量测定：对于含有溶出性抑菌成分的样品·如果进行定性测定，可选择抑菌环试验（第6章）：对于含有非溶出性抗菌成分的样品，经鉴定试验确认后，可选择振荡烧瓶试验（第7章进行定量测定。样品吸水性判断方法：将样品裁成尺寸为2.0cm×3.0cm的试样（试样可叠放，但片数不得超过3片），在试样表面滴加100山菌悬液，如果菌悬液能被试样完全吸收，则视为该样品为吸水性较好的样品，例如抑菌生活用纸。
4.1.2特殊样品
根据其样品特性选择相应的测定方法：在鉴别食品接触用纸、纸板和纸制品中的抑菌成分是否发生1
GB/T42702—2023
转移时，可选择抑菌成分转移测定试验（第8章）：对于高吸收性树脂及含高吸收性树脂的吸收芯体，可选择高吸水材料抑菌性能试验（第9章）；对于具有长效防霉作用的纸、纸板和纸制品，可选择长效防需性能试验(第10章）。
2试验菌的选择
进行抗菌（抑菌)性能测定时，若无特殊说明.应使用方法中规定的细菌进行试验，若标明对真菌或特定微生物有抗菌（抑菌）作用，则应使用方法中规定的真菌或特定微生物进行测定。3
载体抗菌试验
适用范口
本方法适用于含有溶出性抗菌成分的纸、纸板和纸制品及其原材料，或纤维原料（含有非溶出性抗菌成分)具有抗菌功能且吸水性较好的样品，进行定量抗菌性能测定。注：若样品中仪部分纤维具有抗菌作用.且不含溶出性抗菌成分.采用此方法的检测结果可能偏低。5.2
试验材料
5.2.1培养基和试剂
一般要求
试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用。宜使用现有商业化的脱水原料制备培养基.并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。2营养琼脂培养基
蛋白陈
氯化钠
牛肉膏
蒸馏水
5.2.1.3沙氏琼脂培养基
蛋白陈
葡萄糖
蒸馏水
磷酸盐缓冲液（PBS）
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
蒸馏水
15g～20 g
1000ml
1000ml
PBS灭菌后·pH为7.2～7.4，2℃～8℃保存备用。试验器具
Ⅱ级生物安全柜。
恒温培养箱：温控精度士1℃。
旋涡式振荡器。
高压蒸汽灭菌锅。
试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具。5.2.2.5
5.2.3试验菌
GB/T42702—2023
细菌：大肠杆菌（8099或（ICC10899）或大肠杆菌（ATCC25922）.金黄色葡萄球菌（ATCC6538或ATCC25923)。
真菌：白色念珠菌（ATCC10231）。5.2.3.2
根据产品特定用途所需用的其他菌株5.3
试样、对照样和菌悬液制备
5.3.1试样的制备
在无菌条件下打开样品包装，避开样品边缘，将样品剪成2.0cm×3.0cm的试样，每片试样应确保试验过程中的菌悬液被完全吸收（滴加菌液后倾斜平Ⅲ无游离液体流出）.如1片试样无法满足要求，可适当增加试样的片数（不应超过3片）。若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法（121℃，103kPa.15min），如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烧、紫外线照射或其他合适的方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处理.应在报告中注明灭菌方式。5.3.2对照样的制备
可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为对照样.此时.试验中对照样的层数应与试样相同；也可选用经验证对微生物生长不产生影响的对照样品（如不含抗菌成分，与试样同步操作.作用相同时间.接种相同菌量.回收菌数与空白试验回收菌数的比值>90%的样品），将其裁剪成与待测试样同等大小作为对照样。对照样应经高压消毒灭菌（121℃.103kPa，15min），如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类和灭菌方式。5.3.3菌悬液的制备
取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基（真菌为沙氏琼脂培养基）新鲜斜面培养物（18h～24h），用5.0ml.的PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释至适宜浓度，试验时每份对照组回收菌数应为1.0×10*CFU~5.0×10*CFU。5.4试验步骤
取试验样片和对照样片各1份，分别置于无菌平Ⅲ内，用新鲜制备的菌悬液分别在试验样片与对照样片上均勾滴加100，每份对照组回收菌数应为1.0×10°CFU～5.0×10CFU。开始计时，作用至说明书规定的时间（最长不超过120min）.用无菌镊子将试验样片和对照样片分别放入5ml.的PBS中，充分混匀.进行10倍系列稀释.选择适宜稀释度，吸取0.5mL接种平Ⅲl，每个稀释度接种2个平Ⅲ.将冷却至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基或沙氏琼脂培养基倾注于已加入样液的平Ⅲ中.每平皿15ml.～20ml.转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平皿，36℃土1℃培养48h（细菌）或72h（真菌），进行活菌菌落计数。试验重复3次.分别计算抑菌率。5.5计算公式
按公式（1)计算抑菌率：
GB/T42702—2023
式中：
—-抑菌率，%：
N。-一对照样平均回收菌落数，单位为每份对照样菌落形成单位（CFU/份）；N。一试样平均回收菌落数，单位为每份试样菌落形成单位（CFU/份）。（1）
选择菌落数在20CFU～200CFU之间的平板计数菌落数.若所有稀释度的平板菌落数均小于20（FU.则选用最低稀释倍数菌落数计算结果。分别计算3次重复试验的抑菌率，抑菌率结果修约至小数点后第1位。若被测试样各稀释度菌落数均为0，或计算结果修约后为100.0%，则抑菌率记为>99.9%。5.6结果表述
5.6.1各次抑菌率均≥50%，表明该样品相对于对照样具有抗菌作用。5.6.2各次抑菌率均≥90%，表明该样品相对于对照样具有较强的抗菌作用。5.7注意事项
试验过程中，对于实际使用时间较短的产品（如抑菌生活用纸），作用时问不应超过5min：其他产品应不超过120min。
6抑菌环试验
6.1适用范围
本方法适用于含溶出性抑菌成分，且厚度不超过4.0mm的片（块）状物的纸、纸板和纸制品及其原材料的抑菌性能定性测定：也可用于鉴别试样中是否含有溶出性抑菌成分。2试验材料
6.2.1培养基和试剂
同5.2.1。
试验器具
IⅡI级生物安全柜。
恒温培养箱：温控精度土1℃。
旋涡式振荡器。
高压蒸汽灭菌锅。
游标卡尺。
试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具。6.2.3试验菌
同5.2.3。下载标准就来标准下载网
试样、阴性对照样和试验菌制备6.3.1试样的制备
在无菌条件下打开样品包装，避开样品边缘.将其制成直径为5.0mm、厚度不超过4.0mm的圆片4
GB/T42702—2023
（块）.每4片（块）一组。若试样需进行灭菌处理，可采用高压灭菌法（121℃，103kPa，15min），如果高压灭菌法不适用.可采用环氧艺烧、紫外线照射或其他合适方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处理，应在报告中注明灭菌方式。6.3.2阴性对照样的制备
可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抑菌处理的样品作为阴性对照样，此时，试验中对照样的层数应与试样相同：也可选用经验证不含溶出性抑菌成分的纸或纸板（如定性滤纸），将其制成与待测试样同等大小.作为阴性对照样。阴性对照样应经高压消毒灭菌（121℃.103kPa，15min），如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类利灭菌方式。
6.3.3试验菌的制备
取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基（真菌为沙氏琼脂培养基）新鲜斜而培养物（18h～24h）.用PBS洗下菌苔并做适当稀释，制成浓度为5×10\CFU/mI.～5×10°CFU/mL的菌悬液.用无菌棉拭子随取该菌悬液在适宜的培养基平板表而均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平板.置于室温燥5min。6.4试验步骤
每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片.1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面，阴性对照样片贴于平板中心位置.试验样片贴于四周。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平Ⅲ，置于36℃1℃培养16h～18h后测量结果。试验重复3次。用游标卡尺测量抑菌环的直径（包括贴片）并记录，测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行，测量其直径应以抑菌环外沿为界。6.5抑菌作用判别
阴性对照样片应无抑菌环产生，否则试验无效。试验样片抑菌环直径>7mm者，判别为具有抑菌作用：抑菌环直径≤7mm者.判别为无抑菌作用。6.6结果表述
3次重复试验，共12个样片，均有抑菌作用结果者，表明试样具有溶出性抑菌作用.否则表明试样无溶出性抑菌作用，即样品中不含有溶出性抑菌成分。7振荡烧瓶试验
7.1适用范围
本方法适用于含非溶出性抗菌成分的纸、纸板和纸制品及原材料的抗菌性能测定，不适用于含有高吸收性树脂的样品。
在进行振荡烧瓶试验前.需要鉴定试验样品抗菌成分是否可溶出，只有不含落出抗菌成分，才能选用振荡烧瓶法进行抗菌性能测定。如果含有出性抗菌成分，则参照第5章载体抗菌试验测定抗菌性能。
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7.2试验材料
7.2.1培养基和试剂
同5.2.1。
7.2.2试验器具
IⅡI级生物安全柜。
恒温培养箱：温控精度士1℃。
旋涡式振荡器。
高压蒸汽灭菌锅。
5振荡摇床：250r/min～300r/min。7.2.2.5
具塞锥形瓶：250ml。
试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具。7.2.3
试验菌
同5.2.3。
3试样、对照样和菌悬液制备
7.3.1试样的制备
在无菌条件下打开样品包装.避开样品边缘.将样品剪成约为2mm×2mm的小块，对于定量较低的样品（如生活用纸等），可将其剪成约为10mm×10mm的小块，称取0.75g试验样片分装包好，每个样品至少称取6份试样备用。必要时.可采用高压灭菌法（121℃，103kPa.15min）对试样进行灭菌，如果高压灭菌法不适用.可采用环氧乙烷或其他合适方法对试样进行灭菌。若试样进行过灭菌处理，应在报告中注明灭菌方式。7.3.2对照样的制备
可选用与待测样品同等材质、同等大小但未经抗菌处理的样品作为对照样，此时，试验中对照样的层数应与试样相同：也可选用经验证对微生物生长不产生影响的对照样品（如不含抗菌成分，与试样同步操作，作用相同时间，接种相同菌量，回收菌数与空白试验回收菌数的比值>90%的样品），将其裁剪成与待测试样同等大小作为对照样片。对照样应经高压消毒灭菌（121℃.103kPa，15min）.如果高压灭菌法不适用，可采用环氧乙烷、紫外线或其他合适方法进行灭菌。报告中应注明对照样品的种类和灭菌方式。
7.3.3菌悬液的制备
取菌株第2代～第5代的营养琼脂培养基（真菌为沙氏琼脂培养基）新鲜斜面培养物（18h～24h），用5.0mL的PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释成适宜浓度，向70mL的PBS中加人5mL菌恩液时，试验菌在PBS中的浓度应为1.0×10°CFU/ml.～5.0×10CFU/mL。7.4非溶出性抗菌材料的鉴定
取至少1g样品置于尽量少的无菌蒸馅水中浸泡24h，并确保在浸泡后至少可以吸取20ml.游离液体，按照WS/个650一2019中5.1.1悬液定量抑菌试验法验证浸泡液是否具有抑菌作用，试验中试验菌与浸泡液作用时间为2h：或将样品裁成直径5mm圆片。采用抑菌环试验鉴别抗菌产品中是否含有6
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可溶性抑菌成分。若样品浸泡液无抑菌作用或采用抑菌环法判定为不含有溶山性抑菌物质，说明样品属非溶出性抗菌材料。
7.5试验步骤
7.5.1试验组：取已提前备好的2份试验样片分别置于250ml.锥形瓶，向锥形瓶中加入70ml的PIBS和5.0ml.新鲜制备的菌悬液，试验菌在形瓶中浓度应为1×10CFU/ml.～5×10°CFU/mL。7.5.2将试验组中的一个锥形瓶振荡混匀.吸取1ml.内容物，作为试验组振荡前样液。7.5.3将试验组另一个锥形瓶固定于振荡摇床（7.2.2.5）上.以250r/min300r/min振摇1h，吸取1m[.内容物，作为试验组振荡后样液。7.5.4用PBS对振荡前和振荡后样液进行10倍系列稀释，选择适宜稀释度，各吸取1mL内容物接种平血.每个稀释度接种2个平血，将冷却至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基或沙氏琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿.每平Ⅲ15m～20ml转动平Ⅲ，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平血皿，36℃土1℃培养48h（细菌）或72h（真菌），进行活菌菌落计数7.5.5试验同时设对照样片组和不加样片组。对照样片组使用对照样片代替待测试验样片，其他操作程序与试验组相同。不加样片组除不加试验样片外，其他操作程序与试验组相同。7.5.6试验重复3次，分别计算每次试验中试验样片和对照样片的抑菌率。7.6
5计算公式
按公式（2）分别计算试验样片和对照样片抑菌率：N-N.
式中：
K----抑菌率，%：
N。振荡前平均菌落数，单位为每毫升菌落形成单位（CFU/mI.）：V-—振荡后平均菌落数，单位为每毫升菌落形成单位（CFU/mI.）。（2）
选择菌落数在20CFU～200CFU之间的平板计数菌落数，若所有稀释度的半板菌落数均小于20CFU，则选用最低稀释倍数菌落数计算结果每次重复试验分别计算抑菌率，试验组抑菌率使用试验样片振荡前后菌落数进行计算，对照组抑菌率使用对照样片振荡前后菌落数进行计算，当试验样片振荡前回收菌落数明显少于对照样片振荡前菌落数时应使用对照样片振荡前菌落数代替试验样片振荡前菌落数进行计算。抑菌率结果修约至小数点后第1位，并计算每次试验中试验样片和对照样片的抑菌率差值。试验中，在实验误差允许的范围内，如果试验样片和对照样片出现振荡后菌落数高于振荡前菌落数的情况，其抑菌率按“0”计算。7.7结果表述
7.7.1不加样片组活菌计数在1.0×10*CFU/ml～5.0×10CFU/mI.之间，且振荡前后平均菌落数差值在算术平均值的10%以内，试验有效。7.7.2各次试验中，试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值均>26%，表明样品相对于对照样具有抗菌作用。
7.8注意事项
振荡前应将振荡摇床上的锥形瓶固定牢，以免碰破。7
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抑菌成分转移测定试验
适用范围
本方法适用于测定食品接触用纸和纸板中的抑菌成分是否发生转移试验材料
培养基和试剂
一般要求
试验所用试剂应为分析纯或适合于微生物试验用。宜使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。8.2.1.2
营养琼脂培养基
蛋白陈
氯化钠
牛肉膏
蒸馏水
沙氏葡萄糖琼脂培养基
蛋白陈
胰酪蛋白
葡萄糖
蒸馅水
改良营养琼脂培养基
酪蛋白陈、酶水解胰蛋白陈
蛋白陈
氯化钠
蒸馏水
15 g ~20 g
1000ml
1000ml
1000ml
改良沙氏葡萄糖琼脂培养基
酪蛋白陈、酶水解胰蛋白陈
蛋白陈
葡萄糖
麦芽糖
蒸馏水
10.0g~15.0g
蛋白陈盐溶液
酶水解酪蛋白陈
氯化钠
蒸馏水
青霉素（溶液
浓度0.03U/ml.。
两性霉素B溶液
质量浓度20ug/ml。
试验器具
ⅡI级生物安全柜。
1000ml
恒温培养箱：温控精度土1℃。
旋涡式振荡器。
高压蒸汽灭菌锅。
恒温水浴锅。
离心机：转速能达到4000r/min。游标卡尺。
GB/T42702—2023
冲样器：可将试样制成直径为10mm～15mm的阅形测试片，川进行消毒。试管、烧杯、锥形瓶、接种环、移液器等实验室常用器具。试验菌
细菌：枯草芽孢杆菌（ATCC6633）。真菌：黑曲霍（ATC6275）。
根据产品特定用途所需用的其他菌株。试样、对照样和菌悬液制备
8.3.1试样
在无菌条件下打开样品包装，食品接触面作为试验组，若两面均与食品接触或两面无法确定是否与食品接触时，则两面都应进行测试，每一而均应视为独立样品测试。避开样品边缘，将试样制成直径为10mm~15mm的圆片。
8.3.2阳性对照样
枯草芽孢杆菌阳性对照样：取无菌定性滤纸，制成与试样同等大小的圆片。用青霉素（G溶液（8.2.1.7)浸没无菌定性滤纸，自然晾干。8.3.2.2黑曲霉阳性对照样：取无菌定性滤纸，制成与试样同等大小的圆片。用两性霉素B溶液（8.2.1.8）浸没无菌定性滤纸，自然晾干。8.3.3枯草芽孢杆菌孢子悬浮液的制备8.3.3.1
枯草芽孢杆菌接种至营养琼脂斜面上并在30℃土2℃下培养7d，获得草芽孢杆菌的T作9
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