QB/T 5449-2019.Oral care and cleansing products一Determination of orientin in toothpastes一High performance liquid chromatography.
QB/T 5449规定了高效液相色谱法测定牙膏中荭草普含量的方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步骤、结果计算、回收率、标准偏差和允许差。
QB/T 5449适用于牙膏产品中荭草苷含量的测定。
注:本标准荭草苷的检出浓度为0.15 pg/mL,定量浓度为0.50 pug/mL.若取5.0g牙膏样品，定容至25 mL,荭草苷的检出限为0.75 mgkg,定量限为2.50 mgkg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本( 包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验 室用水规格和试验方法
3方法要点
将牙膏用甲醇分散，旋涡混合器振荡、超声波提取其中的荭草苷，离心分离并过滤处理，取清液用带紫外检测器或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪分析测定，通过峰面积外标法定量计算。
4试剂与标准物质
4.1一般规定
除非另有说明，所用试剂均为分析纯的试剂，水为符合GB/T 6682规定的一-级水。
4.2荭草苷对照品
纯度≥98%，CAS号: 28608-75-5.
4.3 甲醇
色谱纯。
4.4磷酸
色谱纯。
4.5 0.1%磷酸水溶液
用移液管准确移取1 mL磷酸至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，得到0.1%磷酸水溶液。
4.6有机相滤膜
0.45 pm。
4.7标准储备液
称取荭草苷对照品5 mg,精确至00001 g,置于25 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，超声并摇匀，使之溶解。此溶液浓度为200 ug/mL,置于2 °C~4。C保存。
4.8 标准工作溶液
移取上述标准储备液适量以甲醇稀释配制系列标准工作溶液，浓度分别为0.5 μg/mL、1.0 ug/mL、2.0 g/mL、5.0 pg/mL、12.0 ug/mL.

ICS71.100.40
分类号：Y43
中华人民共和国轻工行业标准
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口腔清洁护理用品
牙膏中药草苷的测定
高效液相色谱法
Oral care and cleansing productsDetermination of orientin in toothpastes-Highperformanceliquidchromatography2019-12-24发布
中华人民共和国工业和信息化部rrKacerkca-
2020-07-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。言
QB/T5449—2019
本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。本标准起草单位：广州立白企业集团有限公司、天津蓝天集团股份有限公司、中国口腔清洁护理用品工业协会、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。本标准主要起草人：刘庆刚、陈玉娥、肖梅、尚维、孙志勇、鄂佩贤、郭长虹、吴智慧。本标准为首次发布。
KaeerkAca-
QB/T5449-2019
口腔清洁护理用品牙膏中草苷的测定高效液相色谱法1范围
本标准规定了高效液相色谱法测定牙膏中草苷含量的方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步骤、结果计算、回收率、标准偏差和允许差。本标准适用于牙膏产品中草苷含量的测定。注：本标准获草苷的检出浓度为0.15μg/mL，定量浓度为0.50μg/mL。若取5.0g牙膏样品，定容至25mL，截草苷的检出限为0.75mg/kg，定量限为2.50mg/kg2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法要点
将牙膏用甲醇分散，漩涡混合器振荡、超声波提取其中的草苷，离心分离并过滤处理，取清液用带紫外检测器或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪分析测定，通过峰面积外标法定量计算4试剂与标准物质
4.1一般规定
除非另有说明，所用试剂均为分析纯的试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.2草苷对照品
纯度≥98%，CAS号：28608-75-54.3甲醇
色谱纯。
4.4磷酸
色谱纯。
4.50.1%磷酸水溶液
用移液管准确移取1mL磷酸至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，得到0.1%磷酸水溶液。4.6有机相滤膜
0.45μm。
4.7标准储备液
称取草苷对照品5mg，精确至0.00001g，置于25mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，超声并摇匀，使之溶解。此溶液浓度为200μg/mL，置于2℃～4℃保存。4.8标准工作溶液
移取上述标准储备液适量以甲醇稀释配制系列标准工作溶液，浓度分别为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、12.0μg/mL。5仪器
5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2C18色谱柱（4.6mm×250mm，5um）或性能相当的色谱柱。rrKacerkca-
QB/T5449—2019
5.3漩涡混合器。
5.4超声波清洗器，工作频率≥35kHz，功率≥200W。5.5高速离心机，转速≥10000r/min。5.6分析天平：精度0.0001g和精度0.00001g。6分析步骤
6.1试样处理
牙膏试样先挤去大约20mm，称取5g牙膏（精确至0.0001g）试样于50mL具塞离心管中，加入约5mL甲醇后以漩涡混合器振荡至样品均匀，再转移至25mL容量瓶中。用约10mL甲醇分三次洗涤离心管，并将洗涤液充分转移至容量瓶中，然后使用甲醇定容至刻度。最后将样品超声提取30min，以10000r/min离心10min，将上清液过0.45μm有机膜，待测。6.2测定
6.2.1色谱条件参考
按照表1设定液相色谱条件。
表1液相色谱条件
仪器参数
进样量/uL
流量/（mL/min）
紫外检测器/nm
二极管阵列检测器
柱温/℃
6.2.2流动相
设定值
350nm参比波长450nm
甲醇和0.1%磷酸水溶液按25:75的体积比混合均匀，经0.45um有机相滤膜过滤，并超声10min。6.2.3标准工作曲线
准确吸取4.7制备的标准工作溶液20uL，分别注入高效液相色谱仪，按照6.2.1的色谱条件进行测定，以草苷的浓度为x轴，其相应的峰面积为y轴，绘制标准工作曲线。药草苷标准溶液的液相色谱图，参照附录中的图A.1。6.2.4测定
准确吸取20经6.1处理的试样溶液，注入高效液相色谱仪测定草苷的峰面积，由标准工作曲线计算出试样溶液中草苷的浓度。试样溶液的液相色谱图，参照附录A中的图A.2。7结果计算
样品中草苷的含量X（mg/kg）按公式（1）计算：X=c×V×K×1000xN
mx1000
式中：
试样中草苷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：X
试样溶液中对应的藓草苷的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）：V
一试样定容体积，单位为毫升（mL）：-rKaeerKca-
对照品中草替的纯度；
样品稀释倍数：
试样的质量，单位为克（g）
8回收率
QB/T5449-2019
草苷在添加浓度1.0g~10.0μg/mL范扇本标准方法的回收率在92.7%~105.2%之间。相因
对标准偏差在0.54%
9标准偏差
本标准方法的相对标准偏差小于5%（n=6）10允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%，取其算术平均值作为测定结果。
-KaeerKAca-
QB/T5449—2019
附录A
（资料性附录）
液相色谱参考谱图
草誉-31.493
时间/min
图A.1对照品液相色谱图
鞋草苷-31.486
时间/min
牙膏试样液相色谱图
-rrKaeerKca-
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