本文件描述了石蒜绵粉蚧（Phenacoccus solani Ferris）的现场检疫、形态鉴定和分子生物学鉴定方法。本文件适用于石蒜绵粉蚧的检疫和鉴定。

ICS 65.020.20
CCS B 16
中华人民共和国国家标准
GB/T43157—2023
石蒜绵粉轿检疫鉴定方法
Detection and identification of Phenacoccus solani Ferris2023-09-07发布
国家市场监督管理总局
国家标准花管理委员会
2024-04-01实施
GB/T43157—2023
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1范围
石蒜绵粉检疫鉴定方法
GB/T43157—2023
本文件描述了石蒜绵粉（Phenacoccus solaniFerris）的现场检疫、形态鉴定和分子生物学鉴定方法。
本文件适用于石蒜绵粉的检疫和鉴定。规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
背孔ostiole
着生在虫体背面成对出现的、如嘴唇状的横裂构造。注：又称背裂。通常为2对，少数种类只具1对。分为前背孔和后背孔。前背孔着生在前胸背板上，后背孔着生在第6腹节背板上。
刺孔群cerarii
粉科虫的一种常分布于虫体背面边缘的特殊泌蜡结构。注：全称背缘刺孔群。从头部至腹部用“C数字”的形式表示。C～C4分别代表头部4对［额对、触角对（又称眼前对）、眼对、眼后对]、C;～Clo分别代表胸部6对（每胸节各2对）、C11～C18分别代表腹部8对（每腹节各1对）。少数种类背面中部也有分布，称背刺孔群。每个刺孔群一般有1对（少数1个或数个)锥状刺，锥刺附近聚集有三格腺或少数五格腺，以及数根附毛。3.3
Fcirculus
位于虫体腹部腹面第3、第4腹节间，常以局部角质化的狭窄硬化框为界限，两侧常凹人，中间有节间褶横过。
注：又称腹裂。腹脐的数目和大小在不同种类的虫中变化很大。3.4
diskpores
骄虫体表呈盘状或多孔状的泌腺结构。注：又称盘孔或孔腺，常见的有三格腺、五格腺、多格腺。3.5
anal ring
肛门的开口，一个位于背末的、有成列环孔和环毛的环状结构。1
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泉tubularduct
管状的泌蜡结构，分为领状管和蕈腺。注：领状管（oral-collartubularduct），圆柱形，有不同的直径和长度，管口有一圈狭窄的硬化环包围。蕈腺（oral-rintubularduct），圆柱形，在管筒的腺口外缘有一圈呈蘑菇状的角质突起。3.7
anallobe
第8腹节肛环两侧的突出部分。
注：尾瓣端部具1根长刚毛，称端毛。3.8
阴门vulva
雌性生殖孔的开口。
注：位于虫体腹面第7、第8腹节腹板之间，周围常有多格腺分布。石蒜绵粉的基本信息
学名：Phenacoccus solaniFerris1918异名：Phenacoccus herbarum Lindinger1942,Phenacoccus defectusFerris1950英文俗名：imperfectmealybug，solanummealybug分类地位：半翅目（Hemiptera）、总科（Coccoidea）、粉科（Pseudococcidae）、绵粉属（Phe-nacoccus Ferris)bzxZ.net
绵粉属世界已记录178种，其中与石蒜绵粉（Phenacoccussolani）近似且为害较重的种类主要有扶桑绵粉（P.solenopsisTinsley）、美地绵粉（P.madeirensisGreen）、木薯绵粉（P.manihotiMatile-Ferrero)等。
传播途径：低龄若虫自身具有一定的爬行能力，可爬行至邻近的寄主植株，也可借助风、雨水、农具机械等媒介或载体传播扩散。各虫态可随寄主植物及其产品、栽培介质、包装和运输工具等调运及贸易等进行远距离传播。
石蒜绵粉的分布、寄主等其他基本信息见附录A。5方法原理
依据该虫的生物学特性和为害状进行现场检疫，收集虫样。石蒜绵粉的形态学鉴定以雌成虫的形态特征作为主要依据，取得雌成虫样本，制作成玻片标本，在生物显微镜下观察鉴定。石蒜绵粉骄的分子生物学检测、鉴定，尤其是非成虫阶段虫样或残损成虫，可采用实时荧光PCR方法与近似种扶桑绵粉蚜、美地绵粉、木薯绵粉蚜等进行区分。6器具和试剂
6.1器具
体视显微镜、生物显微镜、数显加热板、冰箱、超低温冰箱、微量组织捣碎仪、实时荧光PCR仪、紫列分光光度计等仪器设备。放大镜、小毛笔、昆虫解剖针、眼科手术、小烧杯、比色皿、载玻片、盖玻片、样品袋、离心管等用具。
6.2试剂
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70%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、蒸馏水、甘油、乙醇-甘油保存液（70%乙醇和甘油的体积比为50：1）、10%氢氧化钠（或10%氢氧化钾）溶液、酸性品红溶液（酸性品红95%乙醇饱和溶液）、冰乙酸、酸性乙醇溶液（乙酸：95%乙醇：蒸馏水体积比为1：4.5：4.5）、二甲苯、苯酚、二甲苯苯酚溶液（二甲苯：苯酚体积比为3：1）、丁香油、中性树胶昆虫基因组DNA提取试剂盒、双蒸水（ddH,O）、液氮、提取液A［（1%十二烷基硫酸钠（SDS），50mmol/LTris·HCl(pH8.0），25mmol/L氯化钠，25mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）（pH8.0）］、醋酸钾、Tris饱和酚、三氯甲烷、DNA快速纯化/回收试剂盒、RNA消化酶、2XTaqManMastermix、上下游引物、探针、TE（pH8.0)等
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。7现场检疫
检疫范围包括寄主植物的植株、繁殖材料及包装物、运输工具等载体。检查寄主植物的植株或繁殖材料的茎叶，植株是否长势衰弱，茎、叶是否有扭曲变形现象；借助放大镜检查植株的嫩叶、叶片、花芽、叶柄、花蕾和叶腋等处，是否有披覆白色蜡粉的虫体。石蒜绵粉的危害状见附录A。检查包装物、铺垫材料、残留物，以及运载工具的箱体四壁、缝隙边角上是否有各虫态的石蒜绵粉蚜。
如发现粉，将虫样连同寄主一起取下，放人样品袋中，对发现的成虫也可用湿毛笔轻轻挑人装有70%乙醇的小离心管内（通常用1.5mL或2mL）；对采集的虫样加以标记，做好现场记录，送实验室进行鉴定。
8实验室鉴定
8.1饲养
对发现的疑似目标害虫的卵、若虫，可采取人工饲养方法在实验室培养，待其发育至成虫时再做形态鉴定。石蒜绵粉的饲养方法见附录B8.2玻片标本制作
形态学鉴定以雌成虫玻片标本的显微形态特征为鉴定依据，石蒜绵粉雌成虫玻片标本制作方法见附录C。
8.3形态特征鉴定
8.3.1绵粉属（PhenacoccusCockerell)雌成虫鉴定特征绵粉属雌成虫卵圆形或长形，两侧边儿乎平行，体表覆有白蜡粉，体周缘有蜡丝。体节分明。产卵时能在体后分泌白色卵囊。触角常9节，少数8节或7节。眼发达。有前、后背裂。背孔2对，孔唇上一般具三格腺和小刺。腹脐多存在，在腹部第3、第4腹板间。肛环圆形，位于背末，具有1列～2列环孔和6根长环毛。足发达。爪下有齿。具盘腺，有多格腺、五格腺和三格腺；多格腺大多仅分布在虫体腹面，罕见分布于背面，在后一种情况下沿腹部背板的后缘形成横带或横列，有时则分布于头胸部，有时多格腺缺如；五格腺仅分布于虫体腹面或缺如；三格腺伴生在刚毛基部3
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具管状腺，分布于虫体背面与体腹面，全部管状腺的直径相同或几乎相同；领状管腺背腹面均有，背部管腺多大于腹部管腺，但有时两者等大。多格腺与管腺不组成腺管群。具刺孔群，1对～18对，一般具2根刺和少数三格腺；沿虫体背面体缘分布或仅在后面的腹节上。例外情况也有个别的额外刺孔群位于体背面中部。刺孔群不着生在高度硬化的瘤上。小刺在全部背面均有分布，有时还分布在体腹面边缘。8.3.2石蒜绵粉（PhenacoccussolaniFerris）雌成虫鉴定特征8.3.2.1生态鉴别特征
雌成虫、卵、若虫生态特征，通过体视显微镜观察描述。雌成虫：椭圆形，体表的白色蜡粉厚实，体色变深，体缘蜡突明显，足呈深红色，体长0.9mm～1.2mm，体宽0.6mm左右。见附录D中图D.1。一卵：长椭圆形，黄色透明，长0.3mm～0.5mm，宽约0.14mm。一若虫：椭圆形，体表覆盖一层白色薄蜡粉，去除蜡粉后虫体呈黄色，足发达，共3龄。一龄若虫体长0.3mm~0.5mm，宽约0.18mm；复眼球形呈红棕色；二龄若虫体长为0.4mm~0.6mm，宽约0.3mm，体缘出现齿状突起；三龄若虫体长0.7mm~0.9mm，宽0.3mm~0.4mm，体缘突起明显，尾瓣突出，足的颜色加深。见附录D中图D.1。8.3.2.2玻片标本显微鉴定特征
雌成虫玻片标本显微特征通过生物显微镜观察，见图D.2、图D.3，主要显微鉴定特征如下。体阔椭圆形，长23.2mm~27.1mm，宽1.3mm~1.6mm。触角8节~9节，单眼发达，突出。足发达，各转节均由2个感觉孔，后足转节与腿节长之和为370um～420um，后足胫节与节之和为395μm～490μm，为节的2.2倍～2.5倍；其上具有许多透明孔。口器发达，下唇长127um～140μm，稍短于唇基盾。腹脐椭圆形，位于第3腹节和第4腹节之间，三格腺若干。肛环周围有6根刚毛，每根长93μm～137μm。刺孔群18对。末对刺孔群有2根锥刺和10个～13个三格腺，其他刺孔群有2根锥刺和6个三格腺；末对刺孔群中刺较长。尾瓣发达。一一背面：小刺散布。无多格腺，三格腺均匀分布，同时还分布有比三格腺小的单孔。一腹面：中部有长毛，小刺主要分布缘区，亦可延伸到中部。多格腺在第4腹节第8腹节后缘中区排成一横列，第4腹节和第5腹节数量较少。五格腺无。三格腺均匀分布。管腺量少，主要分布于腹部第4节～第7节中区多格腺横列前面，2个～5个管腺在中胸口器和前气门后。8.3.3石蒜绵粉与近似种的区别
石蒜绵粉常见近似种主要有扶桑绵粉（P.solenopsis）、美地绵粉（P.madeirensis）和木薯绵粉蚜（P.manihoti)等。石蒜绵粉蚜与常见近似种的鉴别检索表见附录E。8.4石蒜绵粉分子生物学鉴定
8.4.1虫样本前处理、基因组DNA提取石蒜绵粉蜥样本的前处理和基因组DNA提取制备方法见附录F。8.4.2实时荧光PCR检测
以石蒜绵粉的DNA为阳性对照，以不含石蒜绵粉的虫DNA为阴性对照，同时以双蒸水代替模板DNA作为空白对照进行实时荧光PCR检测（见附录G）。4
结果判定
9.1形态学鉴定
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以雌成虫的形态特征为依据，符合8.3.2.2的描述可判定为石蒜绵粉蚜。该虫生态特征描述、其与常见近似种的鉴别检索表以及分布、寄主等生物学基本信息可作为参考。9.2实时荧光PCR检测
在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下，即阳性对照Ct值<35并出现典型扩增曲线，阴性、空白对照无Ct值且无扩增曲线，则：检测样品的Ct值≤35时，判定为石蒜绵粉；检测样品无扩增曲线或Ct值>40时，判定为非石蒜绵粉；检测样品的35雌成虫可制成玻片标本保存，卵、若虫和成虫均可用乙醇-甘油保存液保存。各类型标本均需记录学名、截获/收集时间、地点、寄主、鉴定人等相关信息。保存条件为避光、干燥、防虫蛀。一般保存至少6个月。
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A.1地理分布
附录A
（资料性）
石蒜绵粉其他基本信息
亚洲：中国、印度、伊朗、以色列、日本、基里巴斯（吉尔伯特群岛）、新加坡、泰国、越南。欧洲：法国、德国、意大利（西西里岛）、西班牙、土耳其、英国（英格兰）。大洋洲：美属萨摩亚、澳大利亚、关岛、马绍尔群岛。北美洲：加拿大（不列颠哥伦比亚省）、瓜德罗普（法）、危地马拉、夏威夷群岛（夏威夷）、墨西哥、安的列斯群岛（荷）（库拉索）、波多黎各和别克斯岛（波多黎各）美国（亚利桑那州、加利福尼亚州、科罗拉多州、佛罗里达州、路易斯安那州、马里兰州、新墨西哥州、俄勒冈州、得克萨斯州、弗吉尼亚州、华盛顿州）。
南美洲：巴西、哥伦比亚、古巴、厄瓜多尔、法属圭亚那、秘鲁、圣卢西亚、特立尼达和多巴哥（特立尼达）、委内瑞拉。
非洲：阿森松岛（英属）、佛得角、埃及、南非、津巴布韦。A.2
寄主植物
石蒜绵粉寄主植物广泛，已报道寄主包括石蒜科、爵床科、菊科、豆科、姜科、番否科、五加科、兰科等31余科，喜食石蒜科、茄科、菊科等寄主。其常见寄主植物见表A.1。表A.1石蒜绵粉主要寄主植物
爵床科Acanthaceae
番杏科Aizoaceae
苋科Amaranthaceae
石蒜科Amaryllidaceae
漆树科Anacardiaceae
伞形科Apiaceae
天门冬科Asparagaceae
属名及种名
狗肝菜属Diclipterasp.，狭叶翠芦莉RuelliasimplerMesembryanthemum nodiflorum
密叶滨藜Atripleaconfertifolia，澳洲滨藜Atriplersemibaccata，青属Celosiasp.，青Celosiaargentea，藜属Chenopodiumsp.孤挺花属Amaryllissp.，油加律（亚马逊百合）Eucharisamazonica，朱顶红属Hippeastrumsp.，水鬼蕉Hymenocallislittoralis，石蒜Lycorisradiata，水仙属Narcissus sp.，葱莲属Zephyranthes sp.芒果Mangifera indica
刺芹Eryngiumfoetidum
天门冬属Asparagussp.，酒瓶兰属Beaucarneasp.，麦冬Ophiopogonjaponicus，杜宾虎眼万年青Ornithogalumdubium科名
菊科Asteraceae
紫草科Boraginaceae
十字花科Brassicaceae
仙人掌科Cactaceae
使君子科Combretaceae
景天科Crassulaceae
莎草科Cyperaceae
大戟科Euphorbiaceae
豆科Fabaceae
草海桐科Goodeniaceae
鸢尾科Iridaceae
唇形科Lamiaceae
锦葵科Malvaceae
棵科Meliaceae
兰科 Orchidaceae
列当科Orobanchaceae
叶下珠科Phyllanthaceae
禾本科Poaceae
夢科Polygonaceae
石蒜绵粉主要寄主植物
（续）
属名及种名
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菁属Achilleasp.，紫茎泽兰Ageratinaadenophora，豚草属Ambrosiasp.
Ambrosia chamissonis，苦艾Artemisia absinthum，Artemisia douglasiana，龙蒿Artemisiadracunculus，紫菀属Astersp.，铺散矢车菊Centaureadiffusa，Centaurea diluta，Centromadiaparryi，杭菊Chrysanthemummorifolium，白酒草属Conyzasp.，一点红Emiliasonchifolia，飞蓬属Erigeronsp.，Eriophyllumcomfertiflorum，勋章菊Gazaniarigens，单冠菊属Haplopappussp.，向日葵属Helianthus sp.，蝎尾蕉属Hemizonia sp.，异囊属Heterotheca sp.，银胶菊Partheniumhysterophorus，苦苣菜Sonchus oleraceus，南美菊Sphagneticolatrilobata，Tetradymia spinosaVerbesinasp.，李花菊Wollastoniabiflora钟穗花属Phacelia sp.，紫丹属Tournefortia sp.甘蓝Brassica oleracea，萝卜Raphanus sativus仙人掌属Cactaceae sp.
榄仁树Terminalia catappa
莲花掌属Aeoniumsp.，莲花掌Aeoniumarboreum，青锁龙属Crassulasp.，翡翠木Crassulaovata，石莲花属Echeveriasp..银明色Echeveria carnicolor，吴钩Echeveria craigiana，罗西玛Echeveria longissima，摩莎Echeveria racemosa，Echeveriarecuruata，施施莲Echeveria sessiliflora，厚叶草属Pachyphytumsp.，薄化妆Sedumpalmeri，观音莲Sempervivumtectorum油莎草Cyperus esculentus，莎草Cyperusrotundus大载属Euphorbia sp.
Astragalusmiguelensis，羽扇豆属Lupinussp.，紅豆Vignaunguiculat草海桐属Scaevolasp.
鸢尾属Irissp.
狼薄荷属Monardellasp.
棉花Gossypiumhirsutum，木槿属Hibiscussp.，锦葵属Maluasp.，小花锦葵Malua parviflora,Maluapusilla,Malvellaleprosa苦楝Meliaazedarach
石斛属Dendrobiumsp
Castillejaapplegatei，列当属Orobanchesp.苦味叶下珠Phyllanthusamarus
格兰马草属Boutelouasp.，香茅属Cymbopogomsp.，羊茅属Festucasp.，苇状羊茅Festuca arundinacea
多花绣毛蓼Eriogomumbellatum
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马齿苋科Portulacaceae
茜草科Rubiaceae
芸香科Rutaceae
茄科Solanaceae
马鞭草科Verbenaceae
堇菜科Violaceae
葡萄科Vitaceae
泽米铁科Zamiaceae
姜科Zingiberaceae
主要生物学特性
石蒜绵粉主要寄主植物（续）
属名及种名
马齿苋属Portulacasp.，马齿苋Portulacaoleracea小果咖啡Coffeaarabica
柑橘属Citrussp.，青柠Citrusaurantiifolia辣椒Capsicumannuum，夜香树Cestrumnocturnum，番茄属Lycopersiconsp.，本氏烟草Nicotianabenthamiana，烟草Nicotianatabacum，酸浆属Physalissp.Solanumdouglasii，番茄SolanumLycopersicum，金银茄Solanummelongena，马铃薯Solanum tuberosum
马缨丹Lantanacamara
堇菜属Violasp.，三色堇Violatricolor葡萄Vitisinifera
非洲铁属Encephalartossp.，雨王非洲铁Encephalartostransuenosus姜黄Curcuma longa
该虫多营孤雌生殖，属于卵胎生，卵至成虫发育历期37d。卵产在卵囊内，每卵囊具卵150粒～600粒，且多数孵化为雌虫，卵期很短，1d内孵化为若虫，若虫期22d～25d，若虫3龄，1龄若虫历期约6d,行动活泼，从卵囊爬出后短时间内即可取食危害，取食位点不固定；2龄若虫需要8d，大多聚集在寄主植物的茎、花蕾和叶腋处取食；3龄若虫需要10d，虫体明显披覆白色蜡粉，营固定所取食。成虫整个虫体披覆白色蜡粉，似白色棉籽状群居于植物茎部，有时发现群居于寄主叶背。A.4危害
石蒜绵粉繁殖能力极强，单虫产卵量高，可营孤雌生殖，种群世代重叠，种群增长速度极快。以雌成虫和若虫吸食植物幼嫩部位的汁液，包括嫩枝、叶片、花芽和叶柄，造成受害植株长势衰弱，生长缓慢或停止，至失水干枯（见图A.1）。石蒜绵粉还大量分泌蜜露，诱发煤污病，影响植株光合作用，导致被害寄主枝叶生长不良，提早落叶、落果，降低产量。8
图A.1石蒜绵粉为害朱顶红（Hippeastrumsp.）GB/T43157—2023
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