本标准适用于以羊毛脂胆固醇为原料，经化学合成得到7-脱氢胆固醇，再经紫外线照射、精制等工艺制成的食品营养强化剂胆钙化醇（维生素D3）。

中华人民共和国国家标准
GB1903.50—2020
食品安全国家标准
食品营养强化剂
2020-09-11发布
胆钙化醇（维生素D3）
2021-03-11实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
食品安全国家标准
食品营养强化剂
胆钙化醇（维生素D3）
本标准适用于以羊毛脂胆固醇为原料，经化学合成得到7-脱氢胆固醇，再经紫外线照射、精制等工艺制成的食品营养强化剂胆钙化醇（维生素D）。2
化学名称、结构式、分子式、相对分子质量化学名称
（5Z，7E)-9，10-开环胆留-5，7，10（19)-三烯-3β-醇结构式
分子式
相对分子质量
384.64（按2018年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定。
无色或白色
无臭，无异味
针状晶体或结晶性粉末
理化指标
理化指标应符合表2的规定。
维生素D含量：2/%
比旋光度αm（20℃，D)/（）·dm.kg吸收系数E1%（265nm）
有关物质：前维生素D，反式维生素D:，速留醇D7-脱氢胆固醇
铅（Pb）/（mg/kg）
总砷（以As计）/（mg/kg）
感官要求
检验方法
GB1903.50—2020
将适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态，嗅其气味
理化指标
97.0~103.0
+105.0~+112.0
465~495
除前维生素D峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍：各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
附录A中A.5
附录A中A.6
GB5009.75或GB5009.12
GB5009.76或GB5009.11
注：商品化的胆钙化醇（维生素D）产品应以符合本标准的胆钙化醇（维生素D）为原料，添加工艺所必需的食品原料和/或食品添加剂作为辅料，其质量、范围和使用量应符合相应的食品安全国家标准的规定2
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB1903.50—2020
本标准中所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂或以上规格和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液A.2
鉴别试验
乙酸酐浓硫酸呈色反应
A.2.1.1试剂和材料
A.2.1.1.1
三氯甲烷。
A.2.1.1.2
A.2.1.1.3
乙酸酐。
硫酸。
鉴别方法
称取试样0.5mg，加5mL三氯甲烷溶解后，加0.3mL乙酸酐与0.1mL硫酸，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色A.2.2
红外光谱试验
A.2.2.1试剂和材料
溴化钾。
仪器和设备
红外光谱仪。
A.2.2.3分析步骤
采用溴化钾压片法，按照GB/T6040进行试验，试样的红外光谱应与标准红外光谱图一致。维生素D.标准红外光谱图参考附录B中图B.1。A.3
维生素D.含量测定
A.3.1方法提要
维生素D经溶解、稀释，通过高效液相色谱法测定，外标法计算维生素D3含量。A.3.2wwW.bzxz.Net
试剂和材料
正已烷：色谱纯。
正戊醇：色谱纯。
A.3.2.3异辛烷：色谱纯。
维生素D3标准品：质量分数不小于98%。A.3.2.57-脱氢胆固醇标准品：质量分数不小于98%。A.3.2.6水：符合GB/T6682规定的一级水。A.3.3
仪器和设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器，或其他等效的检测器。A.3.4
色谱参考条件
GB1903.50—2020
推荐的色谱柱及典型色谱操作条件列出如下，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。
色谱柱：硅胶色谱柱（柱长250mm，柱内径4.6mm），或相当者。流动相：正已烷：正戊醇=997：3。A.3.4.2
柱温：35℃。
流速：2mL/min。
进样量：100μL。
检测波长：254nm。
分析步骤
标准溶液的制备
称取维生素D标准品25mg（精确至0.0001g），置100mL棕色容量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理1min使完全溶解，用异辛烷稀释至100mL，摇匀，作为储备溶液。量取上述溶液5.0mL，置50mL棕色容量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。A.3.5.2系统适用性试验
量取维生素D储备溶液（A.3.5.1)5.0mL，置具塞玻璃瓶中，通氮后密塞，置90℃水浴加热1h，取出迅速冷却，加正已烷5.0mL，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254nm和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°，并距灯管5cm～6cm，照射5min，使溶液中含有维生素D：、前维生素D3、反式维生素D，和速留醇D3。量取该溶液注人液相色谱仪，色谱条件参考A.3.4。进样5次，记录峰面积。计算维生素D，峰面积相对标准偏差不大于2.0%；前维生素D峰与反式维生素D峰以及维生素D3峰与速留醇D,峰的分离度均应大于1.0。前维生素D3、反式维生素D3、速留醇D与维生素D相对保留时间分别约为0.5、0.6、1.1。在A.3.4色谱条件下分析，参考色谱图见图C.1。称取7-脱氢胆固醇标准品25mg，按照标准溶液（A.3.5.1）配制方法配制7-脱氢胆固醇标准溶液量取维生素D.标准溶液（A.3.5.1）和7-脱氢胆固醇标准溶液各2mL，制备混合标准溶液。量取该溶液注入液相色谱仪，色谱条件参考A.3.4。进样5次，记录峰面积。计算维生素D，峰面积相对标准偏差不大于2.0%；维生素D3峰与7-脱氢胆固醇峰的分离度均应大于1.0,7-脱氢胆固醇与维生素D的相对保留时间约为1.5。在A.3.4色谱条件下分析，参考色谱图见图C.2。A.3.5.3试样溶液的制备
称取维生素D，试样25mg（精确至0.0001g）.置100mL棕色容量瓶，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理1min使完全溶解，用异辛烷稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5.0mL，置50mL棕色容量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，此溶液作为试样溶液。4
A.3.5.4测定
GB1903.50—2020
在A.3.4色谱条件下，分别对维生素D标准溶液（A.3.5.1)和试样溶液（A.3.5.3)进行色谱分析。记录标准溶液和试样溶液色谱图中维生素D,峰面积，将相应的值分别记作A，和A2。按式（A.1）计算出试样中维生素D的含量。
结果计算
试样中维生素D含量的质量分数w，数值以%表示，按式（A.1)计算：A.
式中：
A一标准溶液色谱图中维生素D.的峰面积值；A2试样溶液色谱图中维生素D的峰面积值。·（A.1)
结果计算以两次平行测定结果的算术平均值为准。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2%。
比旋光度的测定
试剂和材料
无水乙醇。
仪器和设备
旋光仪。
A.4.3测定
称取试样0.5g（精确至0.0001g）。加入无水乙醇充分溶解并定容至100mL，制成每1.0mL中约含5.0mg试样的溶液。其他按GB/T613规定的方法进行。注：在溶液配制后30min内测定完毕。结果计算
比旋光度αm（20℃，D），数值以）·dm2·kg表示，按式（A.2）计算：式中：
am(20 ℃,D) =Ixp.
α一—一测得的旋光度，单位为度（°）；1——测定管的长度，单位为分米（dm）；P。——溶液中维生素D,的质量浓度，单位为克每毫升（g/mL）。..(A.2)
试样的比旋光值以两次平行测定结果的算术平均值为准。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%A.5
吸收系数的测定
试剂和材料
无水乙醇。
仪器和设备
紫外-可见分光光度计。
分析步骤
GB1903.50—2020
称取试样0.01g（精确至0.0001g），加人无水乙醇溶解并稀释定容至100mL，摇匀作为储备液再取10mL储备液稀释定容至100mL，制成每1.0mL中约含10μg样品的溶液。取此试样溶液于1cm比色Ⅲ，以无水乙醇做空白对照，用分光光度计在265nm波长处测定其吸光度。A.5.4结果计算
吸收系数E1%m（265nm），按式（A.3)计算：A
El%m（265nm）=
式中：
A一试样溶液的吸光度的数值；
C一试样溶液的质量分数，%。
....(A.3)
试样溶液的吸光度值以两次平行测定结果的算术平均值为准。在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大手算术平均值的2%。A.6
有关物质
试剂和材料
同A.3.2。
仪器和设备
同A.3.3。
色谱参考条件
同A.3.4。
分析步骤
A.6.4.1试样溶液的制备
称取维生素D，试样25mg（精确至0.0001g），置100mL棕色容量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理1min使完全溶解，用异辛烷稀释至100mL，摇匀，作为试样溶液。精密量取1mL上述溶液，置100mL棕色容量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。A.6.4.2系统适用性试验
同A.3.5.1、A.3.5.2。
A.6.4.3测定
在A.3.4色谱条件下，分别对试样溶液（A.6.4.1）和对照溶液（A.6.4.1)进行色谱分析。记录试样溶液和对照溶液色谱图峰面积，高效液相参考色谱图见图C.3。6
A.6.4.4结果计算
GB1903.50—2020
试样溶液中除前维生素D，峰外，单个杂质峰面积与对照溶液主峰面积比值为X，，按式（A.4)计算。各杂质峰面积的和与对照溶液主峰面积比值为X，按式（A.5)计算：A,
X=A.+A,+A,+A
式中：
i=b、C、d分别代表试样溶液中反式维生素D3、速留醇D3、7-脱氢胆固醇）)；A。—试样溶液中前维生素D,峰面积值；A。—试样溶液中反式维生素D.峰面积值；A。试样溶液中速笛醇D峰面积值；Ad试样溶液中7-脱氢胆固醇峰面积值；A3—对照溶液主峰峰面积值。
·（A.4)
·（A.5)
和国B
人民共D，中华家标准卫生
全国家D食品准安标营养见养B.1。100.0
波数/cm-1
生B.1人民共D，中华家标准卫生1000.0
GB1903.50—2020
附录C
维生素D:及相关物质高效液相参考色谱图维生素D,及相关物质高效液相参考色谱图见图C.1、图C.2、图C.3。mAU
维生素D：4——速留醇D。
说明：1——前维生素D;2——反式维生素Ds：3—GB1903.50—2020
维生素D3、前维生素D3、反式维生素D,和速笛醇D高效液相参考色谱图图C.1
说明：1
维生素D：2
—7-脱氢胆固醇。
图C.2维生素D,和7-脱氢胆固醇高效液相参考色谱图25.0
GB1903.50—2020
速备醇D3;5——7-脱氢胆固醇。说明：1——前维生素D;2——反式维生素Ds;3——维生素D3;4—维生素D,及相关物质高效液相参考色谱图图.3
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