本标准适用于以蚕沙或草类、紫花苜蓿、荨麻、菠菜等植物为原料提取叶绿素，或者直接以叶绿素为原料，经皂化、铜代等步骤加工制得的食品添加剂叶绿素铜钾盐。使用溶剂为丙酮、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正己烷和（或）石油醚（沸程为90℃～120℃）。

中华人民共和国国家标准
GB1886.307—2020
食品安全国家标准
食品添加剂
2020-09-11发布
叶绿素铜钾盐
2021-03-11实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
食品安全国家标准
食品添加剂
叶绿素铜钾盐
GB1886.307-—2020
本标准适用于蚕沙或草类、紫花首、尊麻、菠菜等植物为原料提取叶绿素，或者直接以叶绿素为原料，经皂化、铜代等步骤加工制得的食品添加剂叶绿素铜钾盐。使用溶剂为丙酮、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正已烷和（或）石油醚（沸程为 90℃~120℃)。分子式和相对分子质量
2.1分子式
叶绿酸铜二钾（C34H3005N4CuK2）叶绿酸铜三钾(C34H31O6N4CuK3)相对分子质量
叶绿酸铜二钾：716.38（按2016年国际相对原子质量）叶绿酸铜三钾：772.48（按2016年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
感官要求应符合表1的规定
理化指标
深绿色至深黑色
理化指标应符合表2的规定。
叶绿素铜钾盐含量（以干基计），o/%总铜(Cu),cg/%
感官要求
检验方法
取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态
表2理化指标
检验方法
附录A中A3
附录A中A4
游离铜(Cu)，80/%
碱性染料
溶剂残留a
二氯甲烷/(mg/kg）
甲醇、异丙醇、正己烷、
正庚烷总和/(mg/kg)
钻(Pb)/ma/ka)
础（As)/ma/ka)
表2（续）
通过试验
GB1886.307—2020
检验方法
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A7
GB5009.75或GB5009.12
GB5009.76或GB5009.11
注：商品化的叶绿素铜钾盐产品应以符合本标准的叶绿素铜钾盐为原料，可添加植物油、麦芽糊精、水等食品辅料和/或符合食品添加剂质量规格要求的乳化剂、抗氧化剂、酸度调节剂等，其含量符合声称值，形态可以是粉末或液体。
根据产品实际使用的溶剂，测定相应溶剂残留（使用石油醚测定正庚烷）。2
A.1—般规定
附录A
检验方法
GB1886.307—2020
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2鉴别试验
A2.1溶解性
溶手水，几乎不溶手低分子醇、酮类和乙醚，不溶于氯代烷烃、烃类和固定油类。A.2.2最大吸收波长
取A.3.3.1叶绿素铜钾盐含量测定中的试样溶液，在405nm±3nm和630nm±3nm的两个波长范围内均有最大吸收峰。
A.2.3铜钾离子试验
取1g试样，置于800℃±25℃下灼烧至恒重的埚中，缓缓加热直至试样完全碳化。将碳化的试样冷却，用0.5mL-1mL硫酸润湿残渣，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，并在800℃±25℃的高温炉中灼烧残渣至恒重。在残渣中加入10mL盐酸溶液(1+3),在水浴上加热溶解，过滤后补充水至10mL,作为试样溶液，进行如下试验：
a）取5mL试样溶液，加入10%氨水溶液，呈蓝色。b）取5mL试样溶液，加入0.5mL的0.1%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液，产生红褐色沉淀。取试样溶液做焰色试验，呈紫色。c
叶绿素铜钾盐含量（以干基计）的测定A.3.1试剂和材料
A3.1.10.15molL磷酸氢二钠溶液：称取53.7g磷酸氢二钠(NaHPO4-12HhO),加水溶解,稀释并定容至1000mL。
A.3.1.20.15mol/L磷酸二氢钾溶液：称取20.4g磷酸二氢钾(KH2PO4),加水溶解，稀释并定容至1000mL
A3.1.3磷酸盐缓冲液(pH 7.5):0.15molVL磷酸氢二钠溶液与 0.15molL磷酸二氢钾溶液21 :4混合。
A.3.2仪器和设备
分光光度计。
A.3.3分析步骤
试样溶液的制备
GB1886.3072020
称取0.1g试样，精确至0.0002g加水溶解并稀释定容至100mL。取1mL上述溶液，用磷酸盐缓冲液（pH7.5）稀释定容至100mLA.3.3.2测定
取试样溶液置于1am比色血中，以磷酸盐缓冲液（pH7.5)做空白对照，用分光光度计在405m士3m波长范围内的最大吸收波长处测定吸光度。吸光度应控制在0.3～0.7否则应调整试样溶液浓度，再重新测定吸光度。
A.3.4结果计算
叶绿素铜钾盐含量（以干基计）的质量分数拎1，按式（A.1)计算：松
AX10°
565100Xm（1-m）
式中：
一试样溶液的吸光度值；
104一体积换算系数；
565—1m比色血中浓度为1%(100mL溶剂含1g叶绿素铜钾盐）的溶液消光值；100一浓度换算系数；
养—试样的质量，单位为克(g);羚试样的干燥减量，%。
试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0%
注：按照B5009.3直接干燥法测定干燥减量，干燥温度和时间分别为105℃和2h。A.4总铜（
的测定
A.4.1试剂和材料
同GB5009.13。
A.4.2仪器和设备
同GB5009.13。
A.4.3试样处理
A.4.3.1微皮消解
称取0.2g～0.5g精确至0.0002g,于微波消解罐中，加入，5mL硝酸，按照微波消解的操作步骤消解试样，消解条件参考 B.1。冷却后取出消解罐，手 120 ℃~～ 140℃C赶酸至 1 mL/左右。 消解罐放冷反绿将消化液转移至 25 ml容量瓶中,用少量二级水洗涤消解罐 2 次～ 3次，合并洗涤液于容量瓶中，用二级水定容至刻度，混匀备用。同时做空白试验。4
A.4.3.2干法灰化
GB1886.307-—2020
称取0.1g试样，精确至0.0002g于中，小火加热，炭化至无烟，转移至550℃马弗炉中，灰化3h-4h;冷却后取出。对于灰化不彻底的试样，加数滴硝酸，小火加热，小心蒸干，再转入550°℃马弗炉中，继续灰化1h~2h至试样呈白灰状，冷却后取出。用适量硝酸溶液(1+1)溶解并用水定容至10mL,混匀备用。同时做空白试验。A.4.4分析步骤
除试样处理外，其余步骤按GB5009.13规定的方法测定。A5游离铜(CU)的测定
A.5.1试样处理
称取0.1g样，精确至0.0002g加约50ml水溶解，用1molL盐酸溶液调节pH至3.0,用水定容至100mL,过滤。
A.5.2分析步骤
除试样处理外，其余步骤按GB5009.13规定的方法测定。A.6碱性染料的测定
配制5mL的0.05%试样溶液，加1mL的1mol/L盐酸溶液，再加5mL正己烷，完全混合后分离。正己烷层不深于淡绿色，即为通过试验。A.7溶剂残留（二氯甲烷、甲醇、异丙醇、正己烷、正庚烷）的测定A.7.1试剂和材料
A.7.11水：符合GB/T6682规定的一级水。A.7.1.2待测组分标准品：二氯甲烷、甲醇、异丙醇、正己烷、正庚烷，色谱纯。A.7.1.3内标物：3-甲基-2-戊酮，色谱纯。A.7.1.4N-甲基吡咯烷酮。
A.7.2仪器和设备
气相色谱仪：配备氢火焰离子化检测器（FID)和顶空进样器。A.7.3参考色谱条件
A73.1色谱柱：石英毛细管柱(中0.53mmx30m)涂层为二甲基聚硅氧烷，厚度为5μm,或同等性能的色谱柱。
A7.3.2载气：氮气。
A7.3.3载气流速5ml/min
AZ34柱温：35℃保持,5.min以5℃/min升温至90℃保持6min。A7.3.5进样口温度：140℃。
检测器温度：300℃
进样量：10mL
参考顶空进样条件
试样加热温度：80℃。
试样加热时间
注射器温度：90℃
传质温度：100℃
A.7.5分析步骤
内标溶液的制备
GB1886.307-2020
量取约50.0mL水至一个50mL容量瓶中定容，称量容量瓶，精确至0.001g。移取15μL3-甲基-2-戊酮，将其注入容量瓶，混匀，再称量容量瓶，精确至0.01g。A.7.5.2空白溶液的制备
分别量取5.0mL水和1.0mL内标溶液，移入顶空瓶中，移取20μL擎甲基吡咯烷酮，将其注入顶空瓶，封盖，60℃加热10min并剧烈振摇，混匀。A.7.5.3标准溶液的制备
分别量取5.0mL水和1.0mL内标溶液，移入顶空瓶中，称取10mg待测组分标准品（对每个溶剂分别分析），用擎-甲基吡咯烷酮溶解稀释定容至100mL，移取20μL注入顶空瓶，封盖，60℃加热10min并剧烈振摇，混匀。
A.7.5.4试样溶液的制备
称取0.2g试样，精确至0.0001g,置于顶空瓶中，加入5.0mL水和1.0mL内标溶液，移取20μ肇甲基吡咯烷酮，将其注入顶空瓶，封盖，60℃加热10min并剧烈振摇，混匀。A.7.5.5测定
在A.7.3和A.7.4参考操作条件下，分别对空白溶液、标准溶液和试样溶液顶空处理后进行色谱分析。
A.7.6结果计算
A7.6.1校准因子f
校准因子豹按安式(A.2)计算：
式中：
m：×50
m.XA,-A,)
标准溶液中待测组分的质量，单位为毫克(mg）；50一质量换算系数；
猛s标准溶液中内标物的质量，单位为毫克(mg)；f一标准溶液色谱图中待测组分峰面积与内标物峰面积的比值；培g空白溶液色谱图中待测组分峰面积与内标物峰面积的比值。(A2)
A.7.6.2待测组分含量
GB1886.307—2020
试样中待测组分（二氯甲烷、甲醇、异丙醇、正己烷、正庚烷）的含量oi，单位为毫克每干克(mg/kg),按式(A.3)计算：
A,XmoXJ.x100g
式中：
A/一试样溶液色谱图中待测组分峰面积与内标物峰面积的比值；一内标溶液中内标物的质量，单位为毫克(mg）；mo
fi校准因子；
1000一质量换算系数；
7—试样的质量，单位为克(g)；m
一体积换算系数。
.......A.3)
由式(A.3)计算得到二氯甲烷的含量为82，甲醇、异丙醇、正己烷、正庚烷的含量分别为c3、8o4、0o5、06，四者之和即为试样中溶剂残留（甲醇、异丙醇、正己烷、正庚烷总和）的含量。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2.0%。
微波消解升温程序见表B.1。
附录B
微波消解升温程序
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微波消解升温程序
升温时间/min
GB1886.307-—2020
恒温时间/min
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