本标准规定了电子级水中细菌总数(活菌)的滤膜培养测试方法。本标准适用于Ⅰ～Ⅳ级电子水中细菌总数的测量。 GB/T 11446.10-1997 电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法 GB/T11446.10-1997 标准下载解压密码：www.bzxz.net

GB/T11446. 311446. 10—1997
GB/T11446-311446.10—1997是分别对GB11446.3—89《电子级水检测方法通则》GB11446.4—89《电子级水电阻率的测试方法》、GB11446.5—89电子级水中痕量金属的原子吸收分光光度测试方法》，GB11446.6—89电于级水中量二氧化硅的分光光度测试方法》、GB11446.7—89《电子级水中痕最氮离子的离子色谱测试方法》.GB11146.8--89《电子级水中总有机碳的测试方法》，GB11446.9—89电子级水中微粒的仪器测试方法》、GF11446.10—89《电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法》进行修订。
I于GB/T11446.1增加厂金属镍、硝酸根离子，磷酸根高了、硫酸根离子的技术指标，在本标准中增加「原子吸收分光光度法测定金属镍以及用离子色谱法测定硝酸根、磷酸根、硫酸根的测试方法。细菌的测试法只用滤膜培养法，对测总打机碳方法也作了全新改写，对测试方法通则，测电阻率的方法，全硅的测定方法等都作了一些修订并重新改写。本标从实施之口起.同吋代替GB11446.3～11446.10—89。本标准由中华人民共和国电子工业部提出。本标准由电了工业部标准化研究所归口。本标准起草单位：中国科学院半导体研究所.电子工业部标滩化研究所。本标准主要起草人：闻瑞梅、李晓英、王在忠、徐学敏、孙日盼、刘任重、许秀欣。..com1范围
中华人民共和国国家标准
电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法GB/T11446.10—1997
Test method for total bacterial count inelectronic grade waterby membrane filters本标准规定了电子级水巾细菌总数（活菌）的滤膜培养测试方法本标准适用于I～I级电子级水中细菌总数的测量，2引用标准
代替 GB11446.10--89
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T11446.1—1997电子级水
GB/T11446.31997电子级水测试方法通则3定义
3.1尤菌操作bacteria frce operation在无细菌存在的条件下进行的操作。在测定水巾的细菌时，必须事先将使用的器血，仪器设备及实验宰进行火菌，以获得止的结果。3.2菌落bacterium colony
水中的细菌是极微小的，无法用肉眼观察，将单个菌体或孢子在固体培养替上培养-定时间后.便其生长繁殖形成肉眼可见的微生物集团，即为菌落。3.3细菌培养法bacterium culture method將定量水样经超滤膜过滤，再用适当的培养基将留在超滤膜表面的细菌培养以形成菌落，然后计数以测量水中活细菌的数量。
4原理
水中的细菌经过 0. 45 μm 微孔膜过滤截留于滤膜上,将密膜贴在衬底(吸透了 TGY培养基的滤纸)上，在适宜的条件下进行培养，细菌繁殖成肉眼可见的菌落。细菌体内存在的脱氢酶，与2.3,5-三苯基氯化四氮唑（简称T.工.C)在胞内反应使菌体呈红色，反差增大，借此规测及计数，5试剂
5.1空白用水，1级电子级水于高压菌器内在1.4×10°Pa压力下，无菌15min。5.2IGY培养基：1L空白用水中10.0g胰蛋白陈（B3.R)6.0g牛肉音（B.R).2.0g葡荷糖（A.R），加热溶解.冷至室温,以 1 mol/L氢氧化钠调节 pH至 7. 4~7. 6.加15. 0 g琼脂，加热溶解并整热过滤(以四层纱布，-层脱脂棉为介质）,装于300 ml.三角瓶中，灭菌后备川。国家技术监督局1997-09-01批准1998-09-01实施
GB/T 11446. 101997
5.31 mol/L 氢氧化钠液:20 氢氧化钠(A,R)游于 500 ml. 空白水中,储于聚乙烯瓶中。5.4 0. 1%(W/V)T.T.C 溶液灭菌备用。6仪器和设备
6.1无菌间(或无菌工作台):备有功率大丁或等于2 W/m的紫外灯,置丁工作台1.5 m处。6.2电热恒温培养箱：(20~60)11℃。6.3高压蒸汽灭菌器。
6.4：恒温烘箱，
6.5体视显微镜。
6.6微孔有机滤膜：±50mm，孔径0.45μm格栅膜。6.7过滤器$50mm杯式不锈钢过滤器。6.8各种玻璃器血小\口瓶、角瓶、培养血、量筒等。6.9、酒精灯、平头镊子,纱布、棉花、定性滤纸等,6.10抽滤系统：如下图所尔
1—被杯，2—滤膜，3—裁膜网14-独滤瓶5缓瓶±6真空泵抽滤系统示意图
7分析步骤
7.1检溯前的准备
7.1.1开启无菌室及净化丁作台1h～2 h斤,使之进入稳定工作状态。7.1.2器皿的灭菌:将培养血,取样瓶等玻璃器皿,先用电子级水洗净,烘干，用纸包严后置于铅制专用容器巾放入恒温箱（160℃～165℃>内：「热灭菌2h。7.1.3有机滤膜的灭菌：于电子级水中煮沸15 min充去沸水后盘加新的水煮沸反复进行三次即可。惑在紫外灯下照1h～2h灭菌。7.2水样测淀
取 2. 0 mL T. T. C 溶液于 100 ml. 培养基中,在培养咀中混匀(约 3 mm~4 mm 厚),冷却备用。取操勾后的适量水样：I～I级水取 2 ～1现L,水取1划L,经过过滤装置过滤,用 5L空白用水冲洗，抽于。用镊子将滤膜置下备好的培养基上，膜面朝上,盖好Ⅲ盖+待凝固后,将平而翻转貿于培养箱巾，于37亡士1℃下恒温暗养48h后取马+作体秘显微镜下观察菌落并计数。接同样骤进行空白实验。每个样品平行进行三次测定，取其平均值。8分析结果的计算www.bzxz.net
水中的细菌总数接下式计算：
GB/T11446.10—1997
式中：A——每毫升水样中细菌总数，个，九—滤膜上的菌落数，个；
—空白实验的菌落数，个
V—被测水样的体积，mL。
试验报告
按GB/T 11446.3—1997第 6章要求。注意事项
10.1细菌分析应特别注意外来微生物的污染。10.2将载菌膜置于培养基上时，中间不得有间隙或气泡，10.3在制备培养基的加热过程中，应补充所损失的水分，
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