本标准规定了食品中环己基氨基磺酸盐的测定方法。 第一法气相色谱法适用于食品（蒸馏酒、发酵酒、配制酒、料酒及其他含乙醇的食品除外）中环己基氨基磺酸盐的测定。 第二法液相色谱法适用于食品中环己基氨基磺酸盐的测定。 第三法液相色谱-质谱/质谱法适用于食品中环己基氨基磺酸盐的测定。
本标准代替GB 5009.97-2016《食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定》。
本标准与GB 5009.97-2016相比，主要变化如下：
——将标准名称改为《食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸盐的测定》；
——修改了适用范围；
——修改了前处理方法；
——修改了仪器条件及参数；
——修改了第三法液相色谱-质谱/质谱法的定量方式为内标法。

中华人民共和国国家标准
GB5009.97—2023
食品安全国家标准
食品中环己基氨基磺酸盐的测定2023-09-06发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2024-03-06实施
GB5009.97—2023
本标准代替GB5009.97一2016《食品安全国家标准食品中环已基氨基磺酸钠的测定》。本标准与GB5009.97—2016相比，主要变化如下：—一将标准名称改为《食品安全国家标准食品中环已基氨基磺酸盐的测定》；修改了适用范围；
——修改了前处理方法；
修改了仪器条件及参数；
一修改了第三法液相色谱-质谱/质谱法的定量方式为内标法。1范围
食品安全国家标准
食品中环己基氨基磺酸盐的测定本标准规定了食品中环已基氨基磺酸盐的测定方法GB5009.97—2023
第一法气相色谱法适用于食品（蒸馏酒、发酵酒、配制酒、料酒及其他含乙醇的食品除外）中环已基氨基磺酸盐的测定。
第二法液相色谱法适用于食品中环已基氮基磺酸盐的测定第三法液相色谱-质谱/质谱法适用于食品中环已基氨基磺酸盐的测定。第一法
气相色谱法
2原理
试样中的环已基氨基磺酸盐经水提取，在硫酸介质中与亚硝酸钠反应，生成环已醇亚硝酸酯和环已醇，用正庚烧萃取后，用气相色谱-氢火焰离子化检测器测定，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
正庚烷［CH（CH),CH,]：色谱纯。石油醚：沸程为30℃～60℃。
硫酸（HzSO，），95.0%~98.0%（质量分数），密度：1.84g/mL亚硝酸钠（NaNO,）。
淀粉酶：酶活力≥1500U/g
无水乙醇（CHCH，OH）。
试剂配制
亚硝酸钠溶液（50g/L）：称取50g亚硝酸钠，溶于水并稀释至1000mL，混匀。2硫酸溶液（200g/L）：量取108mL硫酸，缓慢加入800mL水中，不断搅拌避免局部过热，冷却后3.2.2
加水稀释至1000mL，混匀
3.3标准品
环已基氨基磺酸钠标准品（C.HNSONa）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
GB5009.97—2023
3.4标准溶液配制
3.4.1环已基氨基磺酸标准储备液（6mg/mL）：准确称取适量环已基氨基磺酸钠标准品（精确至0.1mg）于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度.混匀（环已基氨基磺酸钠折算为环已基氨基磺酸的换算系数为0.8907)。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期12个月2环已基氨基磺酸标准中间液（1200ug/mL）：准确吸取环已基氨基磺酸标准储备液10mL于3.4.2
50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勾。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期6个月。
3.5材料
3.5.1离心管：50mL具螺纹盖刻度离心管。3.5.2
有机相微孔滤膜：0.45μm孔径。4仪器和设备
气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。分析天平：感量1mg、0.1mg。
涡旋混合器。
高速离心机。
超声波发生器。
粉碎机。
研磨机。
匀浆机。
恒温水浴装置。
分析步骤
试样制备
5.1.1液体试样
直接摇匀（含二氧化碳的试样，超声除去气泡后摇匀）。5.1.2
非均匀的液态、半固态试样
取适量试样，经匀浆机匀浆后混匀。5.1.3
巧克力、巧克力制品、奶酪、黄油等试样取适量试样，一18℃冷冻后，粉碎机粉碎并搅拌均匀5.1.4固态试样
取适量试样，用研磨机或粉碎机粉碎并搅拌均匀2
5.2试样提取
GB5009.97—2023
5.2.1巧克力、奶油、奶酪、乳粉、调味面制品、油腐乳、油豆豉、肉及肉制品、水产品罐头等含较高油脂试样
称取2g试样（精确至0.001g）于离心管中，加人20mL石油醚，涡旋5min，超声10min，5000r/min离心3min，弃去石油醚层.再加人20mL石油醚提取1次，弃去石油醚层，60℃士2℃水浴挥去残留石油醚，加入20mL水（巧克力、奶油、奶酪、乳粉等试样需在水浴锅中60℃土2℃加热20min），涡旋5min，超声提取30min，混匀后放至室温备用。5.2.2果冻、糖果、米粉、淀粉制品等试样称取2g试样（精确至0.001g）于离心管中，加人20mL水（米粉、淀粉制品等试样需再加入0.2g淀粉酶），混合均勾后，60℃士2℃水浴加热20min，涡旋5min，超声提取10min，混匀后放至室温备用。5.2.3其他固体、半固体试样
称取2g试样（精确至0.001g）于离心管中，加人20mL水，涡旋5min，超声提取30min，混匀后放至室温备用。
5.2.4液体试样
称取2g试样（精确至0.001g）于离心管中，加水至20mL，涡旋5min，超声提取10min，混匀后放至室温备用。
5.3衍生化
将装有试样提取液的离心管置于冰浴10min后，依次加入10mL正庚烷、5mL亚硝酸钠溶液（50g/L）、5mL硫酸溶液（200g/L），混匀，于冰浴中放置30min，其间振摇3次~5次，取出后涡旋3min，于4℃条件下9000r/min离心3min（如出现乳化现象，可缓慢滴加无水乙醇，同时轻摇离心管，直至破乳，于4℃条件下9000r/min离心3min），取上清液过有机相微孔滤膜，供上机测定。5.4标准系列工作液的制备及衍生化分别准确移取0.05mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.5mL、5.0mL环已基氨基磺酸标准中间液（1200μg/mL）于离心管中，用水稀释至20mL，按5.3测定步骤衍生化。此时正庚烷中待测物的浓度分别相当于6μg/mL、12μg/mL、30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL、300μg/mL、600μg/mL，临用现配。
5.5仪器参考条件
5.5.1色谱柱：内涂50%苯基-50%甲基聚硅氧烷的中等极性毛细管柱，30m×0.32mm×0.25μm或同等性能的色谱柱。
5.5.2柱温升温程序：初温50℃保持3min，10℃/min升温至70℃保持0.5min，30℃/min升温至220℃保持3min。
5.5.3进样口温度：230℃。
5.5.4进样量：1uL。
5.5.5进样方式：分流进样，分流比为1：5。5.5.6检测器：氢火焰离子化检测器（FID)，温度260℃。3
GB5009.97—2023
5.5.7载气：高纯氮气，流速为2.0mL/min。5.5.8氢气：32mL/min；空气：300mL/min。5.6标准曲线的制作
经衍生化处理的标准系列工作液注人气相色谱仪中，测得相应衍生物的峰面积，以标准系列工作溶液中环已基氨基磺酸的浓度为横标，以环已基氨基磺酸衍生物环已醇亚硝酸酯和环已醇两峰面积之和为纵坐标，绘制标准曲线。
环己基氨基磺酸衍生物气相色谱图参见附录A中图A.1。5.7试样溶液的测定
经衍生化处理的试样溶液注人气相色谱仪中，环已基氨基磺酸衍生物环已醇亚硝酸酯和环己醇两峰保留时间定性，测得峰面积加和作为测定面积计算，根据标准曲线得到试样溶液中待测物的浓度，计算样品中待测物的含量。衍生化处理的试样溶液中待测物响应若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进样分析。
5.8空白试验
除不加试样外，均按5.2和5.3测定步骤进行。6
分析结果的表述
试样中环已基氨基磺酸含量按式(1)计算。X=-exVx1000
mx1000x1000
式中：
试样中环已基氨基磺酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；.（1)
由标准曲线计算出待测溶液中环已基氨基磺酸的质量浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；加人正庚烷体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）：
f—稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。7精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。8其他
当取样量为2g时，本方法检出限为0.01g/kg，定量限为0.03g/kg。第二法
9原理
高效液相色谱法
试样中的环已基氨基磺酸盐经水提取，在硫酸介质中与次氯酸钠反应，生成N，N-二氯环已胺用4
正庚烷萃取后，用高效液相色谱-紫外或二极管阵列检测器测定，外标法定量。10
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水10.1试剂
正庚烧LCH（CH）.CH：色谱纯。乙睛（CH，CN）：色谱纯
石油醚：沸程为30℃~60℃。
硫酸（HSO,），95.0%~98.0%（质量分数），密度：1.84g/mL。次氯酸钠(NaCIO)。
碳酸氢钠（NaHCO）。
无水乙醇（CHCH,OH)。
试剂配制
GB5009.97—2023
硫酸溶液（1+1）：量取250mL硫酸，缓慢加入250mL水中，不断搅拌避免局部过热，混匀。次氯酸钠溶液：将次氯酸钠用水稀释，混勾，保持有效氯含量120g/L以上，保存于棕色瓶中，临用现配。
也可使用市售产品，需标定。
碳酸氢钠溶液（50g/L）：称取25g碳酸氢钠，溶于水并稀释至500mL，混勾。标准品
同3.3。bZxz.net
标准溶液配制
环已基氨基磺酸标准储备液（6mg/mL）：同3.4.1。10.4.1
环己基氨基磺酸标准中间液（1200μg/mL）：同3.4.2。10.4.2
离心管：50mL具螺纹盖刻度离心管。有机相微孔滤膜：0.45μm孔径。仪器和设备
液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器。分析天平：感量1mg、0.1mg。
涡旋混合器
高速离心机。
超声波发生器。
粉碎机。
研磨机。
勾浆机。
恒温水浴装置。
GB5009.97-2023
12分析步骤
试样制备
同5.1。
2试样提取
同5.2。
衍生化
向装有试样提取液的离心管中依次缓慢加人4mL硫酸溶液（1十1）、10mL正庚烷、2mL次氯酸钠溶液.涡旋3min，9000r/min离心3min（如出现乳化现象，可缓慢滴加无水乙醇，同时轻摇离心管直至破乳，于4℃条件下9000r/min离心3min），立即移取3mL上清液于另一离心管中，加人15mL碳酸氢钠溶液（50g/L），涡旋5min，9000r/min离心3min，取上清液过有机相微孔滤膜，供上机测定。
标准系列工作液的制备及衍生化12.4
分别准确移取0.05mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.0mL、2.5mL，5.0mL环已基氨基磺酸标准中间液（1200μg/mL）于离心管中，用水稀释至20mL，按12.3测定步骤衍生化。此时正庚烷中待测物的浓度分别相当于6μg/mL、12μg/mL、30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL.300μg/mL、600μg/mL，临用现配。
仪器参考条件
色谱柱：Ci柱，4.6mm×150mm，5μm或同等性能的色谱柱流动相；水十乙腈=25十75，等度洗脱。流速：l.0mL/min。
进样量：10μL。
柱温：40℃。
检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器检测波长：314nm。
标准曲线的制作
经衍生化处理的标准系列工作液注人液相色谱仪中，测得相应衍生物的峰面积，以标准系列工作溶液中环己基氨基磺酸的浓度为横坐标，以环已基氨基磺酸衍生物N.N-二氯环己胺峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
环己基氨基磺酸衍生物液相色谱图参见附录B中图B.1。12.7试样溶液的测定
经衍生化处理的试样溶液注入液相色谱仪中，保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中待测物的浓度，计算样品中待测物的含量。衍生化处理的试样溶液中待测物响应若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进样分析。6
12.8空白试验
除不加试样外，均按12.2和12.3测定步骤进行。13
分析结果的表述
试样中环已基氨基磺酸含量按式（2）计算。pxVx1000
mX1000x1000
式中：
——试样中环已基氨基磺酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；X
GB5009.97—2023
....（2)
由标准曲线计算出待测溶液中环己基氨基磺酸的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；V一加人正庚烷体积，单位为毫升（mL)；—试样质量，单位为克（g）；
稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。其他
当取样量为2g时，本方法检出限为0.01g/kg，定量限为0.03g/kg。第三法
液相色谱-质谱/质谱法
试样中的环已基氨基磺酸盐经提取液提取后，液相色谱-质谱/质谱仪测定，保留时间及相对离子丰度定性，同位素稀释内标法定量。17
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。17.1试剂
17.1.1乙（CH,CN）：色谱纯。
甲酸（HCOOH)：色谱纯。
甲醇（CH,OH)：色谱纯。
二氯甲烷（CH,Cl）。
GB5009.97-—2023
17.2试剂配制
17.2.1含0.1%甲酸的乙腈水溶液：吸取1.0mL甲酸，加入300mL乙睛，用水稀释至1000mL，混匀。
17.2.2含0.1%甲酸的水溶液：吸取1.0mL甲酸，用水稀释至1000mL混匀。17.2.3含0.1%甲酸的甲醇溶液：吸取1.0mL甲酸，用甲醇稀释至1000mL，混匀。17.3标准品
17.3.1同3.3。
17.3.2环己基氨基磺酸钠-D,（C,H.D,NSO,Na)同位素内标物：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
17.4标准溶液配制
17.4.1环已基氨基磺酸标准储备液（5mg/mL）：准确称取适量环已基氨基磺酸钠标准品（精确至0.1mg）于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀（环已基氨基磺酸钠折算为环已基氨基磺酸的换算系数为0.8907）。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期12个月。17.4.2环已基氨基磺酸同位素内标储备液（100μg/mL）：准确称取适量环已基氨基磺酸钠-D,（精确至0.1mg）于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀（环已基氨基磺酸钠-D，折算为环已基氨基磺酸-D，的换算系数为0.8928）。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期12个月。17.4.3环已基氨基磺酸标准中间液（10ug/mL）：准确吸取环已基氨基磺酸标准储备液0.20ml于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期1个月。
17.4.4环已基氨基磺酸同位素内标中间液（5g/mL）：准确吸取环已基氨基磺酸同位素内标储备液5.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中，4℃下避光保存，有效期1个月
17.4.5环己基氨基磺酸标准系列工作液：分别准确吸取环已基氨基磺酸标准中间液10uL、20uL、50L、100L200uL500L、1000L于10mL容量瓶中，再分别加人环已基氨基磺酸同位素内标中间液100μL，用含0.1%甲酸的乙腈水溶液定容至刻度。环已基氨基磺酸浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL.500ng/mL、1000ng/mL.标准系列工作液中环已基氨基磺酸同位素内标的浓度为50ng/mL。临用现配17.5材料
17.5.1离心管：50mL具螺纹盖刻度离心管。17.5.2有机相微孔滤膜：0.22um孔径。18仪器和设备
18.1液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。18.2分析天平：感量1mg、0.1mg。18.3涡旋混合器。
高速离心机。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。