GB/T 41413-2022
基本信息
标准号： GB/T 41413-2022
中文名称：玩具中N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定 高效液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
英文名称：Determination of migration of N-nitrosamines and N-nitrosatable substances in toys—High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
标准状态：现行
发布日期：2022-04-15
实施日期：2022-04-15
出版语种：简体中文
下载格式：.pdf .zip
下载大小：4178752
相关标签： 玩具 亚硝胺 迁移 测定 高效 色谱 串联 质谱法
标准分类号
标准ICS号：家用和商用设备、文娱、体育>>文娱活动设备>>97.200.50玩具
中标分类号：轻工、文化与生活用品>>文教、体育、娱乐用品>>Y57玩具
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：24页
标准价格：43.0
相关单位信息
起草人：冯岸红、陈秋华、高惊涛、张曜、兰文清、陶小美、望秀丽、蚁乐洲
起草单位：深圳市计量质量检测研究院、北京中轻联认证中心有限公司、必维申美商品检测(上海)有限公司、福建铭塔玩具股份有限公司、亿科检测认证有限公司、上海海关机电产品检测技术中心、广州海关技术中心
归口单位：全国玩具标准化技术委员会(SAC/TC 253)
提出单位：中国轻工业联合会
发布部门：国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会
标准简介
本文件描述了以下玩具及玩具材料中N-亚硝胺及其前体物迁移量测定的高效液相色谱-串联质谱法。
——弹性体玩具和玩具弹性体部件。
——指画颜料。
示例：弹性体玩具如气球和牙胶。
注： 对于弹性体材料，目前主要在硫化材料中检出了N-亚硝胺及其前体物。
本文件适用于以上玩具及玩具弹性体材料中13种N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定。其他N-亚硝胺及其前体物的检测经过验证后可参照本文件进行。
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标准内容
ICS 97.200.50
CCSY57
中华人民共和国国家标准
GB/T41413—2022
玩具中N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定高效液相色谱-串联质谱法
Determination of migration of N-nitrosamines andN-nitrosatable substances in toys-High performance liquidchromatography-tandem mass spectrometry2022-04-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2022-04-15实施
GB/T41413—2022
规范性引用文件
术语和定义
试剂和材料
仪器设备
样品制备
结果计算
方法定量限
精密度
测试报告
附录A（资料性）
本文件的背景和基本原理
附录B（规范性）
本文件检测的13种N-亚硝胺
附录C（资料性）13种N-亚硝胺的总离子流色谱图附录D（资料性）
精密度试验结果www.bzxz.net
参考文献
GB/T41413—2022
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国轻工业联合会提出本文件由全国玩具标准化技术委员会（SAC/TC253）归口。本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院、北京中轻联认证中心有限公司、必维申美商品检测（上海）有限公司、福建铭塔玩具股份有限公司、亿科检测认证有限公司、上海海关机电产品检测技术中心、广州海关技术中心。
本文件主要起草人：冯岸红、陈秋华、高惊涛、张曜、兰文清、陶小美、望秀丽、蚁乐洲。I
玩具中N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定高效液相色谱-串联质谱法
GB/T41413—2022
警示一一使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件1范围
本文件描述了以下玩具及玩具材料中N-亚硝胺及其前体物迁移量测定的高效液相色谱-串联质谱法。
弹性体玩具和玩具弹性体部件。指画颜料。
示例：弹性体玩具如气球和牙胶注：对于弹性体材料，目前主要在硫化材料中检出了N-亚硝胺及其前体物，本文件适用于以上玩具及玩具弹性体材料中13种N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定。其他N-亚硝胺及其前体物的检测经过验证后可参照本文件进行。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
指画颜料fingerpaint
设计为儿童用手指或手直接涂抹于物体表面的黏土状或胶状的着色材料。［来源：GB6675.14—2014,3.1］3.2
弹性体elastomer
在室温条件下，受力作用发生显著形变，释放后能迅速恢复到接近原有状态和尺寸的柔性交联大分子材料。
注：并不是所有弹性体都可能含有N-亚硝胺和N-亚硝胺前体物。有关于弹性体中N-亚硝胺和N-亚硝胺前体物的可能来源及其他相关信息见附录A。［来源：ENISO472：2013,2.327，有修改］3.3
N-nitrosamine
N-亚硝胺
含有一N一N=O特征官能团，通常是胺与硝化剂在酸性条件下反应生成的物质，1
GB/T41413—2022
注1：参与反应的胺主要是仲胺。注2：例如亚硝酸盐就是一种硝化剂。3.4
N-亚硝胺前体物N-nitrosatablesubstance在特定条件下，可迁移到测试溶液中经亚硝化作用转化成N-亚硝胺的物质。4原理
采用测试溶液为迁移基质，样品中的N-亚硝胺及其前体物迁移至测试溶液中，N-亚硝胺前体物通过亚硝化作用转化成N-亚硝胺，采用高效液相色谱-串联质谱法测定最终测试溶液中的N-亚硝胺迁移量。
指画颜料中N-亚硝胺的测试溶液为水，指画颜料中N-亚硝胺前体物以及弹性体中N-亚硝胺及其前体物的测试溶液均为模拟唾液。5试剂和材料
5.1试剂
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682推荐使用的一级水，5.1.1碳酸氢钠（NaHCO3）（CAS号144-55-8）。5.1.2
氯化钠（NaCI)（CAS号7647-14-5）。5.1.3
碳酸钾（K.CO）（CAS号584-08-7）。亚硝酸钠（NaNO2）（CAS号7632-00-0）。5.1.4→
5.1.5浓盐酸（CAS号7647-01-0），质量分数为36.0%～38.0%。5.1.6
氢氧化钠（CAS号1310-73-2）。5.1.7浓度为1mo1/L的盐酸溶液：移取约85mL浓盐酸（5.1.5）于1L容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.8浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠（5.1.6）于1L容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.9浓度为0.1mol/L的盐酸溶液，移取10mL盐酸溶液（5.1.7）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.10浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液，移取10mL氢氧化钠溶液（5.1.8）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.11模拟唾液：称取（4.2±0.021)gNaHCO（5.1.1）、（0.5±0.0025)gNaC1(5.1.2）、（0.2±0.0010)gK,CO3（5.1.3）和（0.03士0.00015）gNaNO2（5.1.4）于烧杯中，用水溶解并稀释至（950士5）mL，并用盐酸溶液（5.1.9)或氢氧化钠溶液（5.1.10）调节pH值为9土0.1，转移到1L容量瓶中，加水稀释至刻度保存时间不得超过5天。
5.1.12甲醇，HPLC级（≥99.9%）。5.1.13甲酸，LC-MS级（≥99.5%）。5.2标准品
N-亚硝胺见紫外光易分解，迁移液或标准品应避免暴露于阳光或者日光灯下。5.2.1N-亚硝胺标准物质，纯度≥97%，附录B给出了13种N-亚硝胺的具体信息。5.2.2内标，N-亚硝基二乙醇胺-D8（N-nitrosodiethanolamine-d8，简称NDELA-d8，CAS号1173019-2
53-8），纯度≥99%。
GB/T41413—2022
5.2.3内标，N-亚硝基二甲胺-D6（N-nitrosodimethylamine-d6，简称NDMA-d6，CAS号17829-05-9），纯度≥99%。
5.2.4N-亚硝胺标准储备液：
用甲醇将各N-亚硝胺标准物质（5.2.1)配制成质量浓度为10μg/mL的储备液，于（一18土3）℃避光保存。
5.2.5内标溶液
5.2.5.1弹性体用内标储备液：
用甲醇将NDELA-d8（5.2.2）和NDMA-d6（5.2.3）配制成质量浓度为1μg/mL的储备液，于（一18土3)℃避光保存。
5.2.5.2指画颜料用内标工作溶液：用水将NDELA-d8（5.2.2）配制成质量浓度为1ug/mL的工作溶液，有效期为1天。5.2.6标准工作溶液。
5.2.6.1指画颜料中N-亚硝胺的标准工作溶液：用水将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到6个标准工作溶液，质量浓度分别为0.5ug/L、1.0ug/L、2.0ug/L、5.0ug/L、10ug/L和20ug/L，并加人适量内标工作溶液（5.2.5.2），使得每个系列标准工作溶液的内标含量均为10ug/L，混合均匀，有效期为1天。5.2.6.2指画颜料中N-亚硝胺前体物的标准工作溶液：用模拟唾液（5.1.11)将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到至少5个标准工作溶液，质量浓度分别为1.0μg/L、2.0ug/L、5.0μg/L、10.0μg/L和20ug/L。取系列标准工作溶液1mL于棕色进样瓶中，加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混合均匀，有效期为1天。5.2.6.3弹性体中N-亚硝胺及其前体物的标准工作溶液：用模拟唾液（5.1.11)将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到至少5个标准工作溶液，质量浓度分别为0.2ug/L、0.5ug/L、1.0ug/L、2.0ug/L和5.0ug/L。取系列标准工作溶液1mL于棕色进样瓶中，加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混合均匀，有效期为1天。61
仪器设备
6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配APCI源。6.2涡旋混合器。
6.3振荡器，振荡频率为400次/min或等效。6.4离心机，转速不低于10000r/min。6.5玻璃珠。
6.6棕色锥形瓶。
6.7恒温箱，可保持温度（40士2)℃。6.8滤膜，水相，0.22um。
7样品制备
7.1概述
本文件采用高效液相色谱-串联质谱法进行测定分析。经验证后，也可以采用其他方法进行测定。3
GB/T41413—2022
值得注意的是，当采用其他方法进行测定时，需要对迁移后的溶液进行再处理。对于亚硝化过程，应使用给定体积比的样品溶液、盐酸溶液和氢氧化钠溶液以及给定的时间和温度。N-亚硝胺易见紫外光分解。样品分析前，应在低于25℃温度下密封避光保存，并应避免样品交叉污染。
样品、萃取液、迁移液或标准溶液均应避免阳光和日光灯的照射。所有萃取液、迁移液和标准溶液均应使用铝箔纸外包或使用棕色器皿。若萃取液不能立即进行测定，则应将迁移液和标准溶液于（53）℃避光保存，并在24h内进行测定。进行指画颜料和弹性体样品分析时应同时进行方法空白试验。液相色谱用进样瓶已被报道含有NDELA，可通过用乙醇预洗涤或用紫外光（UV)照射进样瓶去除NDELA。如果空白样品中检出N-亚硝胺时，则在分析样品之前应检查其来源并去除。7.2指画颜料
7.2.1N-亚硝胺
分析前指画颜料应混合均匀（例如，使用玻璃棒）。称取样品1.0g（精确到0.0001g）于离心管中，依次准确加入0.20mLNDELA-d8工作溶液（5.2.5.2）和18.8mL水，涡旋1min；置于振荡器（6.3）上连续振荡15min后，在4000r/min条件下离心15min。转移部分上清液于新的离心管中，并在10000r/min条件下，离心15min，过滤膜（6.8)后待测。测试溶液应于（5士3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
7.2.2N-亚硝胺前体物
分析前指画颜料应混合均匀（例如，使用玻璃棒）。称取样品0.4g（精确到0.0001g）于离心管中，逐步加入模拟睡液（5.1.11)至20g（精确到0.0001g），涡旋1min；在振荡器（6.3）上连续振荡15min使其完全混匀。准确移取5.0mL测试溶液于棕色瓶中，并加人0.5mL浓度为1mol/L的盐酸溶液（5.1.7），合上盖子，摇匀，并于（40土2）℃条件下放置（30土1)）min；随后加入1.0mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液(5.1.8）并摇匀，然后转移到离心管中，并在10000r/min条件下离心15min，过滤膜（6.8)后待测。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。迅速转移1.0mL测试溶液于棕色进样瓶中，并加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混匀后进行仪器分析。
如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
7.3弹性体
7.3.1气球
沿纵向将气球均匀剪成两半，根据样品质量可再次对气球进行纵向均匀裁剪。称取二等分或者四等分气球样品3.5g~4.5g于50mL棕色锥形瓶（6.6）中，加35mL～45mL（10倍样品质量）温度为（40士2）℃的模拟唾液（5.1.11），可加入玻璃珠［6.5，温度为（40士2）℃］确保气球被完全浸没，合上磨口塞，并在（40士2）℃的条件下放置（60±3）min。4
GB/T41413—2022
立即将测试溶液倒入合适的玻璃瓶中以停止迁移过程。该测试溶液可用于N-亚硝胺的测定（7.3.4）以及亚硝化过程（7.3.3）。测试溶液倒出后应立即进行亚硝化步骤。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺，但不能再用于亚硝化步骤7.3.2其他玩具或玩具部件（气球除外）尽可能将玩具的弹性体部分与其他材料（如纺织品)分开。玩具或玩具部件应整体测试。若无法整体测试（如玩具或玩具部件的质量大于4g或无法直接放入50mL锥形瓶），则玩具的弹性部分应以尽量减少难以接近的内部表面的方式进行切割，切割齿产生的表面积应尽可能小。
称取2.0g~4.0g样品于50mL棕色锥形瓶（6.6）中，加入20.0mL～40.0mL（10倍样品质量）温度为（40士2）℃的模拟唾液（5.1.11），可加入玻璃珠[6.5，温度为（40士2）℃以确保样品被完全浸没和湿润，还可防止样品附着在锥形瓶底部。合上磨口塞，并于（40士2）℃的条件下放置（240士5）min立即将测试溶液倒人合适的玻璃瓶中以停止迁移过程。该测试溶液可用于N-亚硝胺的测定（7.3.4）以及亚硝化过程（7.3.3）。测试溶液倒出后应立即进行亚硝化步骤。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺，但不能再用于亚硝化步骤。7.3.3亚硝化
迁移后立即准确移取5.0mL测试溶液于棕色瓶中，加人0.5mL浓度为1mol/L的盐酸溶液（5.1.7），合上盖子，混匀，于（40土2）℃条件下放置（30土1）min。随后加人1.0mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液（5.1.8），混匀后按7.3.4进行N-亚硝胺的测定。测试溶液应于（5士3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。7.3.4测定前样品准备
快速移取1.0mL测试溶液于棕色进样瓶中，并加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混匀后按第8章进行测定。
如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
试验表明，模拟唾液中的NDiNA在质谱中的响应会随着时间而逐渐降低。如果样品中存在NDiNA，则需使用甲醇对标准溶液和测试溶液按照1：1进行稀释后进行测定分析，8测定
8.1液相色谱参考工作条件
液相色谱参考工作条件如下：
色谱柱：C18（2.1mm×100mm，粒径1.8um）或相当者；a）
b）流动相A：水，含0.1%（体积分数）甲酸；流动相B：甲醇；
流速：0.5mL/min；
柱温：40℃；
进样体积：10μL；
梯度洗脱程序见表1。
GB/T41413—2022
时间/min
质谱参考工作条件
质谱参考工作条件如下：
离子源：APCI，正模式；
梯度洗脱程序
流动相A/%
流动相B/%
监测模式：动态多反应监测（dMRM），监测离子对及相关参数设定见表2，保留时间见附录C；脱溶剂气流速：800L/h；
脱溶剂气温度：300℃；
离子源温度：110℃；
毛细管电压：3.5kV。
2N-亚硝胺化合物的监测离子对及相关参数设定表2
化合物名称
NDELA-d8
NDMA-d6
母离子m/2
子离子m/2
锥孔电压/V
碰撞能量/eV
化合物名称
定性分析
N-亚硝胺化合物的监测离子对及相关参数设定（续）
母离子m/
子离子m/
锥孔电压/V
GB/T41413—2022
碰撞能量/eV
按分析条件（8.1～8.2)对标准溶液及样品溶液进行分析，采用特征离子对的相对丰度比和色谱峰的保留时间（见附录C)进行定性。如果检出的色谱峰的保留时间和标准溶液相一致，并且所选择的监测离子对的相对丰度比与标准品的离子对的相对丰度比的偏差在规定允许的范围内（见表3），则可认为样品中存在N-亚硝胺。
定性判断时相对离子丰度的最大允许偏差表3
离子相对丰度/%
结果计算
指画颜料
允许相对偏差/%
采用内标法对NDELA进行定量。以质量浓度（mg/L）为横坐标，NDELA峰面积和NDELA-d8峰面积之比（R）为纵坐标得到NDELA的标准曲线。7
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CCSY57
中华人民共和国国家标准
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玩具中N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定高效液相色谱-串联质谱法
Determination of migration of N-nitrosamines andN-nitrosatable substances in toys-High performance liquidchromatography-tandem mass spectrometry2022-04-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2022-04-15实施
GB/T41413—2022
规范性引用文件
术语和定义
试剂和材料
仪器设备
样品制备
结果计算
方法定量限
精密度
测试报告
附录A（资料性）
本文件的背景和基本原理
附录B（规范性）
本文件检测的13种N-亚硝胺
附录C（资料性）13种N-亚硝胺的总离子流色谱图附录D（资料性）
精密度试验结果www.bzxz.net
参考文献
GB/T41413—2022
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国轻工业联合会提出本文件由全国玩具标准化技术委员会（SAC/TC253）归口。本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院、北京中轻联认证中心有限公司、必维申美商品检测（上海）有限公司、福建铭塔玩具股份有限公司、亿科检测认证有限公司、上海海关机电产品检测技术中心、广州海关技术中心。
本文件主要起草人：冯岸红、陈秋华、高惊涛、张曜、兰文清、陶小美、望秀丽、蚁乐洲。I
玩具中N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定高效液相色谱-串联质谱法
GB/T41413—2022
警示一一使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件1范围
本文件描述了以下玩具及玩具材料中N-亚硝胺及其前体物迁移量测定的高效液相色谱-串联质谱法。
弹性体玩具和玩具弹性体部件。指画颜料。
示例：弹性体玩具如气球和牙胶注：对于弹性体材料，目前主要在硫化材料中检出了N-亚硝胺及其前体物，本文件适用于以上玩具及玩具弹性体材料中13种N-亚硝胺及其前体物迁移量的测定。其他N-亚硝胺及其前体物的检测经过验证后可参照本文件进行。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
指画颜料fingerpaint
设计为儿童用手指或手直接涂抹于物体表面的黏土状或胶状的着色材料。［来源：GB6675.14—2014,3.1］3.2
弹性体elastomer
在室温条件下，受力作用发生显著形变，释放后能迅速恢复到接近原有状态和尺寸的柔性交联大分子材料。
注：并不是所有弹性体都可能含有N-亚硝胺和N-亚硝胺前体物。有关于弹性体中N-亚硝胺和N-亚硝胺前体物的可能来源及其他相关信息见附录A。［来源：ENISO472：2013,2.327，有修改］3.3
N-nitrosamine
N-亚硝胺
含有一N一N=O特征官能团，通常是胺与硝化剂在酸性条件下反应生成的物质，1
GB/T41413—2022
注1：参与反应的胺主要是仲胺。注2：例如亚硝酸盐就是一种硝化剂。3.4
N-亚硝胺前体物N-nitrosatablesubstance在特定条件下，可迁移到测试溶液中经亚硝化作用转化成N-亚硝胺的物质。4原理
采用测试溶液为迁移基质，样品中的N-亚硝胺及其前体物迁移至测试溶液中，N-亚硝胺前体物通过亚硝化作用转化成N-亚硝胺，采用高效液相色谱-串联质谱法测定最终测试溶液中的N-亚硝胺迁移量。
指画颜料中N-亚硝胺的测试溶液为水，指画颜料中N-亚硝胺前体物以及弹性体中N-亚硝胺及其前体物的测试溶液均为模拟唾液。5试剂和材料
5.1试剂
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682推荐使用的一级水，5.1.1碳酸氢钠（NaHCO3）（CAS号144-55-8）。5.1.2
氯化钠（NaCI)（CAS号7647-14-5）。5.1.3
碳酸钾（K.CO）（CAS号584-08-7）。亚硝酸钠（NaNO2）（CAS号7632-00-0）。5.1.4→
5.1.5浓盐酸（CAS号7647-01-0），质量分数为36.0%～38.0%。5.1.6
氢氧化钠（CAS号1310-73-2）。5.1.7浓度为1mo1/L的盐酸溶液：移取约85mL浓盐酸（5.1.5）于1L容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.8浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠（5.1.6）于1L容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.9浓度为0.1mol/L的盐酸溶液，移取10mL盐酸溶液（5.1.7）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.10浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液，移取10mL氢氧化钠溶液（5.1.8）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，有效期为6个月。
5.1.11模拟唾液：称取（4.2±0.021)gNaHCO（5.1.1）、（0.5±0.0025)gNaC1(5.1.2）、（0.2±0.0010)gK,CO3（5.1.3）和（0.03士0.00015）gNaNO2（5.1.4）于烧杯中，用水溶解并稀释至（950士5）mL，并用盐酸溶液（5.1.9)或氢氧化钠溶液（5.1.10）调节pH值为9土0.1，转移到1L容量瓶中，加水稀释至刻度保存时间不得超过5天。
5.1.12甲醇，HPLC级（≥99.9%）。5.1.13甲酸，LC-MS级（≥99.5%）。5.2标准品
N-亚硝胺见紫外光易分解，迁移液或标准品应避免暴露于阳光或者日光灯下。5.2.1N-亚硝胺标准物质，纯度≥97%，附录B给出了13种N-亚硝胺的具体信息。5.2.2内标，N-亚硝基二乙醇胺-D8（N-nitrosodiethanolamine-d8，简称NDELA-d8，CAS号1173019-2
53-8），纯度≥99%。
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5.2.3内标，N-亚硝基二甲胺-D6（N-nitrosodimethylamine-d6，简称NDMA-d6，CAS号17829-05-9），纯度≥99%。
5.2.4N-亚硝胺标准储备液：
用甲醇将各N-亚硝胺标准物质（5.2.1)配制成质量浓度为10μg/mL的储备液，于（一18土3）℃避光保存。
5.2.5内标溶液
5.2.5.1弹性体用内标储备液：
用甲醇将NDELA-d8（5.2.2）和NDMA-d6（5.2.3）配制成质量浓度为1μg/mL的储备液，于（一18土3)℃避光保存。
5.2.5.2指画颜料用内标工作溶液：用水将NDELA-d8（5.2.2）配制成质量浓度为1ug/mL的工作溶液，有效期为1天。5.2.6标准工作溶液。
5.2.6.1指画颜料中N-亚硝胺的标准工作溶液：用水将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到6个标准工作溶液，质量浓度分别为0.5ug/L、1.0ug/L、2.0ug/L、5.0ug/L、10ug/L和20ug/L，并加人适量内标工作溶液（5.2.5.2），使得每个系列标准工作溶液的内标含量均为10ug/L，混合均匀，有效期为1天。5.2.6.2指画颜料中N-亚硝胺前体物的标准工作溶液：用模拟唾液（5.1.11)将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到至少5个标准工作溶液，质量浓度分别为1.0μg/L、2.0ug/L、5.0μg/L、10.0μg/L和20ug/L。取系列标准工作溶液1mL于棕色进样瓶中，加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混合均匀，有效期为1天。5.2.6.3弹性体中N-亚硝胺及其前体物的标准工作溶液：用模拟唾液（5.1.11)将N-亚硝胺标准储备液（5.2.4)逐级稀释得到至少5个标准工作溶液，质量浓度分别为0.2ug/L、0.5ug/L、1.0ug/L、2.0ug/L和5.0ug/L。取系列标准工作溶液1mL于棕色进样瓶中，加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混合均匀，有效期为1天。61
仪器设备
6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配APCI源。6.2涡旋混合器。
6.3振荡器，振荡频率为400次/min或等效。6.4离心机，转速不低于10000r/min。6.5玻璃珠。
6.6棕色锥形瓶。
6.7恒温箱，可保持温度（40士2)℃。6.8滤膜，水相，0.22um。
7样品制备
7.1概述
本文件采用高效液相色谱-串联质谱法进行测定分析。经验证后，也可以采用其他方法进行测定。3
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值得注意的是，当采用其他方法进行测定时，需要对迁移后的溶液进行再处理。对于亚硝化过程，应使用给定体积比的样品溶液、盐酸溶液和氢氧化钠溶液以及给定的时间和温度。N-亚硝胺易见紫外光分解。样品分析前，应在低于25℃温度下密封避光保存，并应避免样品交叉污染。
样品、萃取液、迁移液或标准溶液均应避免阳光和日光灯的照射。所有萃取液、迁移液和标准溶液均应使用铝箔纸外包或使用棕色器皿。若萃取液不能立即进行测定，则应将迁移液和标准溶液于（53）℃避光保存，并在24h内进行测定。进行指画颜料和弹性体样品分析时应同时进行方法空白试验。液相色谱用进样瓶已被报道含有NDELA，可通过用乙醇预洗涤或用紫外光（UV)照射进样瓶去除NDELA。如果空白样品中检出N-亚硝胺时，则在分析样品之前应检查其来源并去除。7.2指画颜料
7.2.1N-亚硝胺
分析前指画颜料应混合均匀（例如，使用玻璃棒）。称取样品1.0g（精确到0.0001g）于离心管中，依次准确加入0.20mLNDELA-d8工作溶液（5.2.5.2）和18.8mL水，涡旋1min；置于振荡器（6.3）上连续振荡15min后，在4000r/min条件下离心15min。转移部分上清液于新的离心管中，并在10000r/min条件下，离心15min，过滤膜（6.8)后待测。测试溶液应于（5士3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
7.2.2N-亚硝胺前体物
分析前指画颜料应混合均匀（例如，使用玻璃棒）。称取样品0.4g（精确到0.0001g）于离心管中，逐步加入模拟睡液（5.1.11)至20g（精确到0.0001g），涡旋1min；在振荡器（6.3）上连续振荡15min使其完全混匀。准确移取5.0mL测试溶液于棕色瓶中，并加人0.5mL浓度为1mol/L的盐酸溶液（5.1.7），合上盖子，摇匀，并于（40土2）℃条件下放置（30土1)）min；随后加入1.0mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液(5.1.8）并摇匀，然后转移到离心管中，并在10000r/min条件下离心15min，过滤膜（6.8)后待测。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。迅速转移1.0mL测试溶液于棕色进样瓶中，并加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混匀后进行仪器分析。
如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
7.3弹性体
7.3.1气球
沿纵向将气球均匀剪成两半，根据样品质量可再次对气球进行纵向均匀裁剪。称取二等分或者四等分气球样品3.5g~4.5g于50mL棕色锥形瓶（6.6）中，加35mL～45mL（10倍样品质量）温度为（40士2）℃的模拟唾液（5.1.11），可加入玻璃珠［6.5，温度为（40士2）℃］确保气球被完全浸没，合上磨口塞，并在（40士2）℃的条件下放置（60±3）min。4
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立即将测试溶液倒入合适的玻璃瓶中以停止迁移过程。该测试溶液可用于N-亚硝胺的测定（7.3.4）以及亚硝化过程（7.3.3）。测试溶液倒出后应立即进行亚硝化步骤。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺，但不能再用于亚硝化步骤7.3.2其他玩具或玩具部件（气球除外）尽可能将玩具的弹性体部分与其他材料（如纺织品)分开。玩具或玩具部件应整体测试。若无法整体测试（如玩具或玩具部件的质量大于4g或无法直接放入50mL锥形瓶），则玩具的弹性部分应以尽量减少难以接近的内部表面的方式进行切割，切割齿产生的表面积应尽可能小。
称取2.0g~4.0g样品于50mL棕色锥形瓶（6.6）中，加入20.0mL～40.0mL（10倍样品质量）温度为（40士2）℃的模拟唾液（5.1.11），可加入玻璃珠[6.5，温度为（40士2）℃以确保样品被完全浸没和湿润，还可防止样品附着在锥形瓶底部。合上磨口塞，并于（40士2）℃的条件下放置（240士5）min立即将测试溶液倒人合适的玻璃瓶中以停止迁移过程。该测试溶液可用于N-亚硝胺的测定（7.3.4）以及亚硝化过程（7.3.3）。测试溶液倒出后应立即进行亚硝化步骤。测试溶液应于（5土3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺，但不能再用于亚硝化步骤。7.3.3亚硝化
迁移后立即准确移取5.0mL测试溶液于棕色瓶中，加人0.5mL浓度为1mol/L的盐酸溶液（5.1.7），合上盖子，混匀，于（40土2）℃条件下放置（30土1）min。随后加人1.0mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液（5.1.8），混匀后按7.3.4进行N-亚硝胺的测定。测试溶液应于（5士3）℃避光保存，可用于重新分析N-亚硝胺。7.3.4测定前样品准备
快速移取1.0mL测试溶液于棕色进样瓶中，并加人0.020mL内标储备液（5.2.5.1），混匀后按第8章进行测定。
如果测得的N-亚硝胺浓度高于校准曲线范围，则可将保存在冰箱中的测试溶液用模拟唾液稀释后进行重新分析。
试验表明，模拟唾液中的NDiNA在质谱中的响应会随着时间而逐渐降低。如果样品中存在NDiNA，则需使用甲醇对标准溶液和测试溶液按照1：1进行稀释后进行测定分析，8测定
8.1液相色谱参考工作条件
液相色谱参考工作条件如下：
色谱柱：C18（2.1mm×100mm，粒径1.8um）或相当者；a）
b）流动相A：水，含0.1%（体积分数）甲酸；流动相B：甲醇；
流速：0.5mL/min；
柱温：40℃；
进样体积：10μL；
梯度洗脱程序见表1。
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时间/min
质谱参考工作条件
质谱参考工作条件如下：
离子源：APCI，正模式；
梯度洗脱程序
流动相A/%
流动相B/%
监测模式：动态多反应监测（dMRM），监测离子对及相关参数设定见表2，保留时间见附录C；脱溶剂气流速：800L/h；
脱溶剂气温度：300℃；
离子源温度：110℃；
毛细管电压：3.5kV。
2N-亚硝胺化合物的监测离子对及相关参数设定表2
化合物名称
NDELA-d8
NDMA-d6
母离子m/2
子离子m/2
锥孔电压/V
碰撞能量/eV
化合物名称
定性分析
N-亚硝胺化合物的监测离子对及相关参数设定（续）
母离子m/
子离子m/
锥孔电压/V
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碰撞能量/eV
按分析条件（8.1～8.2)对标准溶液及样品溶液进行分析，采用特征离子对的相对丰度比和色谱峰的保留时间（见附录C)进行定性。如果检出的色谱峰的保留时间和标准溶液相一致，并且所选择的监测离子对的相对丰度比与标准品的离子对的相对丰度比的偏差在规定允许的范围内（见表3），则可认为样品中存在N-亚硝胺。
定性判断时相对离子丰度的最大允许偏差表3
离子相对丰度/%
结果计算
指画颜料
允许相对偏差/%
采用内标法对NDELA进行定量。以质量浓度（mg/L）为横坐标，NDELA峰面积和NDELA-d8峰面积之比（R）为纵坐标得到NDELA的标准曲线。7
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