本标准规定了食品中胭脂树橙(红木素、降红木素)的液相色谱测定方法。 本标准适用于干酪和再制干酪及其类似品、人造黄油及其类似制品、植脂末、冷冻饮品、果酱、巧克力和巧克力制品、糖果、粮食和粮食制品、焙烤食品、西式火腿类、肉灌肠类、复合调味料、饮料类、果冻、膨化食品中红木素和降红木素的测定。

中华人民共和国国家标准
GB5009.287—2022
食品安全国家标准
食品中脑脂树橙的测定
2022-06-30发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2022-12-30实施
1范围
食品安全国家标准
食品中脑脂树橙的测定
本标准规定了食品中胭脂树橙（红木素、降红木素)的液相色谱测定方法。GB5009.287—2022
本标准适用于干酪和再制干酪及其类似品、人造黄油及其类似制品、植脂末、冷冻饮品、果酱、巧克力和巧克力制品、糖果、粮食和粮食制品、焙烤食品、西式火腿类、肉灌肠类、复合调味料、饮料类、果冻、膨化食品中红木素和降红木素的测定原理
试样用水二容液油谜，“酸化儿来写二巴取，液色法分离，二极管阵列检测器或紫处含测器芯法宝量3试剂和材1
除非另有说明，本方法讯剂均水为G16682--级水。3.1试剂
3.1.1甲醇(CH,O)：色谱纯。
无水乙醇（CzHO）：色，钝。
乙（C,HN)：色评_
石油醚：沸程为30℃～u0℃。
二氯甲烷（CHzCl2）：色谱纯。2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（C1sH24O，简称BHT）。浓氨水（NH：·HzO），浓度含量为25%～28%。冰乙酸（CHO2）。
试剂配制
3.2.1BHT-甲醇溶液：称取0.5gBHT（3.1.6），用500mL甲醇溶解。3.2.2
BHT-乙醇溶液：称取0.5gBHT（3.1.6），用500mL无水乙醇溶解。3.2.3
70%乙睛水溶液：量取350mL乙睛和150mL水，混合均匀，加人0.5gBHT（3.1.6），振荡溶解3.2.45%氨水乙醇溶液：量取50mL氨水和950mL无水乙醇，混合均匀，加人1gBHT3.1.6），振荡溶解。
BHT-石油醚溶液：称取0.5gBHT（3.1.6），用500mL石油醚溶解。BHT-二氯甲烷溶液：称取0.5gBHT（3.1.6），用500mL二氯甲烷溶解。3.2.6
3.2.72%乙酸水溶液：量取20mL冰乙酸，加到980mL水中，混合均匀。GB5009.287—2022
3.3标准品
3.3.1顺式构型降红木素标准品（Norbixin，C24H2sO4，CAS号：542-40-5）：纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。3.3.2顺式构型红木素标准品（Bixin，C25H3oO4，CAS号：6983-79-5）：纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（100mg/L）：准确称取经折算含量的降红木素标准品（3.3.1)10.0mg于100mL棕色容量瓶中，加入BHT-甲醇溶液（3.2.1)溶解并定容至刻度，混匀；准确称取经折算含量的红木素标准品（3.3.2)10.0mg于100mL棕色容量瓶中，加人BHT-乙醇溶液（3.2.2）溶解并定容至刻度，混匀。标准储备液于一18℃下避光保存，保存期6个月。3.4.2混合标准工作溶液：分别吸取降红木素和红木素标准储备液（3.4.1)0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL和5.0mL于10mL棕色容量瓶中，加入70%乙水溶液（3.2.3）定容至刻度，混匀。降红木素和红木素混合标准系列工作液的浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、20mg/L和50mg/L。现配现用。3.4.3含顺、反构型的降红木素和红木素溶液：准确移取5.0mL的降红木素和红木素标准储备液（3.4.1），用BHT-乙醇溶液（3.2.2）稀释定容至50mL无色透明容量瓶中，置于阳光下直射2h，获得含顺、反构型的降红木素和红木素溶液。该溶液用于降红木素和红木素各异构体的定性。现配现用。3.5材料
3.5.1硅藻土，商品名为Celite545或者相当产品。3.5.20.45um滤膜：聚四氟乙烯材质。4仪器和设备
液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。4.1
电子天平：感量为0.01g和0.0001g。4.2
涡旋混合器：转速不小于3000r/min。4.3
离心机：转速不小于3000r/min。4.4
氮气浓缩装置。
5分析步骤wwW.bzxz.Net
样品前处理
5.1.1试样制备
固态样品和半固态样品需粉碎或匀浆成均匀的粉状样品和黏稠状样品；液态样品摇匀。制备好的试样于0℃～4℃避光保存。
5.1.2试样提取
5.1.2.1粉状样品
称取试样0.5g～5g（精确至0.01g）于50mL具塞塑料离心管中，加人20mL5%氨水乙醇溶液2
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（3.2.4），涡旋振荡2min，8000r/min离心5min，转移上清液于另一支50mL离心管内，重复提取1次，合并提取液至同一离心管内，采用氮气浓缩装置40℃下浓缩至体积约10mL，待净化5.1.2.2黏稠状样品
称取试样0.5g～5g（精确至0.01g）于50mL具塞塑料离心管中，加人2g～5g硅藻土，采用玻璃棒将样品和硅藻土充分混匀，搅拌至疏松颗粒状，加人20mL5%氨水乙醇溶液（3.2.4）之后的步骤同5.1.2.1。
5.1.2.3液态样品
称取试样0.5g~5g（精确至0.01g）于50mL具塞塑料离心管中，加入5mL5%氨水乙醇溶液（3.2.4），待净化。
5.1.3试样净化
在试样提取液中加人2mL氨水，用水稀释至约20mL，加人20mLBHT-石油醚溶液（3.2.5），涡旋振荡1mi，上层，复mL.1-醚（225），旅振1min，离心弃去上层溶液，下液人nL5ml：-二氯（3.26，，振荡1min，离心后弃去上」俗下层鼠完溶夜『：人！」1T7醇容、？2）采氯浓缩装置35℃下浓缩至体积约1L.用PUT7醇溶液（322)辅助转移残留溶滴至5mI.棕色容量瓶中定容并摇匀，经0.45μm满膜，、过小瓶『，共泽相色普仪测宝。注：前处理过西意避：。
仪器参考条件
5.2.1色谱柱：Cis色谱柱，长15nmim.任l.vmm，5μm等效色谱柱。流动相：乙腈+2%z酸<溶液=
5.2.3流速：1.0mL/min
5.2.4柱温：30℃。
5.2.5进样量：10μL，
5.2.6检测波长：458nm。
5.3标准曲线的制作
将3.4.2配制的混合标准工作溶液分别注入液相色谱仪中（顺式降红木素和顺式红木素标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1），以保留时间定性，测定相应的峰面积，以混合标准工作溶液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到顺式降红木素和顺式红木素的标准曲线回归方程。将3.4.3配制的含顺、反构型的降红木素和红木素溶液分别注入液相色谱仪中（含顺、反构型的降红木素和红木素溶液的液相色谱图参见附录A中图A.2和图A.3），确定降红木素和红木素各异构体保留时间。
5.4试样溶液的测定
将试样溶液注人液相色谱仪中，以保留时间定性，得到各异构体的峰面积，根据标准曲线采用外标法定量。反式构型的浓度按对应顺式构型的标准曲线回归方程计算，顺反构型结果合并计算。若试样溶液中降红木素和红木素的质量浓度不在标准曲线范围内，则应进行适当稀释后测定。3
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分析结果的表述
试样中红木素或降红木素的含量按式（1)计算：X, =_p, ×V
m×1000
式中：
试样中红木素或降红木素的含量，单位为克每千克（g/kg）；..--...-
........( 1)
由标准曲线得到的试样溶液中红木素或降红木素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；试样定容体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）；
由mg/kg转换为g/kg的换算因子。计算结果保留两位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。其他
当按取样量为5g，定容体积为5mL时，本方法的检出限：降红木素为0.5mg/kg，红木素为1.0mg/kg；定量限：降红木素为1.0mg/kg，红木素为2.0mg/kg。4
附录A
降红木素和红木素液相色谱图
A.1顺式降红木素和顺式红木素标准溶液液相色谱图见图A.1。0.30寸
含顺、反均型
鹭红系
说明：
反式降红木素；
双顺式降红木素；
顺式降红木素。
顺式降红木素
顺式红木素
页代降1实和顶式：、案准液相谱图液相
2含顺、反构型的降红木素溶液的液相色谱图图A.2
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含顺、反构型的红木素溶液液相色谱图见图A.3。0.030
.0.020
说明：
反式红木素；
双顺式红木素；
顺式红木素。
含顺、反构型的红木素溶液的液相色谱图图A.3
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